核糖核酸酶A（RNase A）是一種廣泛應(yīng)用于酶學(xué)、生物化學(xué)、結(jié)構(gòu)生物學(xué)等領(lǐng)域研究的工具酶,同時,這種具有有效殺傷腫瘤細胞和抑制HIV-1病毒復(fù)制能力的核酸酶可直接作為多種疾病的治療藥物;核糖核酸酶H（RNase H）是一種特異性切割RNA/DNA雙鏈中的核糖核苷酸的核酸內(nèi)切酶,在調(diào)節(jié)免疫防御過程及維持真核生物基因組穩(wěn)定方面具有重要意義。因此,開展兩種相關(guān)性核酸酶的活性監(jiān)測不僅能對酶動力學(xué)進行分析而且能對酶與疾病之間的關(guān)系進行揭示。本論文基于還原型氧化石墨烯（rGO）尺寸小、分散性好、猝滅能力強這些優(yōu)點,開展了簡單、特異、靈敏的核糖核酸酶檢測體系構(gòu)建及其應(yīng)用研究。主要內(nèi)容如下:1.基于rGO熒光納米探針的RNase A酶活性分析方法建立和應(yīng)用。首先,我們基于rGO和熒光探針構(gòu)建了一個RNase A活性檢測平臺。結(jié)果表明:該體系的最適還原型氧化石墨烯濃度為8μg/mL,最適反應(yīng)溫度與時間分別為37℃和35 min。體系中RNase A活性的檢測下限為0.05 pg/μL。為了驗證該方法在實際中的應(yīng)用性,我們利用該方法考察了不同價態(tài)的重金屬離子對RNase A活性影響。結(jié)果表明:重金屬離子... 

【文章來源】：湖南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

直接電化學(xué)法監(jiān)測核糖核酸酶活性的原理圖

圖 1.1 直接電化學(xué)法監(jiān)測核糖核酸酶活性的原理圖[35]ato 等人利用金電極和循環(huán)伏安法構(gòu)成的電極傳感器來檢測該金電極上附著一段核酸序列，包括固定部分、核糖核酸酶點以及與之相鄰的作為電化學(xué)活性位點的二茂鐵脫氧核糖溶液中該傳感器電極的電流響應(yīng)隨酶濃度的增加而降低。這測范圍為 1.0×10-11~1.0×10-6g/mL，比已有的電化學(xué)生物傳是，它仍有不直觀、信號小等缺點。

圖 1.3 基于陽離子聚噻吩衍生物的比色法檢測核糖核酸酶 H 活性的原理圖[37究表明，帶負電荷的單鏈 DNA 能有效地穩(wěn)固納米粒子對抗鹽溶特點，2011 年 Xiaoji Xie 等人發(fā)展了一種利用納米金的比色法檢性[38]。其原理為：當(dāng)緩沖液中的 DNA-RNA 雙鏈底物與 HIV-1 R產(chǎn)生單鏈 DNA 和單鏈 RNA 片段。之后再將金納米顆粒加入，切所獲得的單鏈 DNA 和 RNA 片段能夠附著在金納米顆粒的表

【參考文獻】：
期刊論文
[1]氧化石墨烯保護的核酸分子探針及其在生物分析中的應(yīng)用[J]. 崔亮,張薇婷,林暉,朱志,楊朝勇.  廈門大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2014(05)
[2]Reduced Graphene Oxide Mediated SnO2 Nanocrystals for Enhanced Gas-sensing Properties[J]. Yanhong Chang,Yunfeng Yao,Bin Wang,Hui Luo,Tianyi Li,Linjie Zhi.  Journal of Materials Science & Technology. 2013(02)
[3]熒光探針技術(shù)在兩親分子有序組合體研究中的應(yīng)用[J]. 高莉?qū)?夏慧蕓,陳華鑫,鄧娟利.  化學(xué)通報. 2012(08)
[4]中華眼鏡蛇毒核糖核酸酶的分離純化及其特殊生物學(xué)活性[J]. 陶鳳云,趙偉,林強,馬潤宇.  中國生化藥物雜志. 2010(03)
[5]中國林蛙卵核糖核酸酶的分離純化及其抗腫瘤作用[J]. 陶鳳云,趙偉,林強,馬潤宇.  中國生物工程雜志. 2010(05)
[6]人類核糖核酸酶P的研究進展[J]. 寧容,張文軍,李紅枝.  國際藥學(xué)研究雜志. 2008(04)
[7]蕈菌核糖核酸酶蛋白和肽的研究進展[J]. 孔祥輝,張介馳,馬慶芳,韓增華,張丕奇,楊志興.  菌物研究. 2008(02)
[8]核糖核酸酶研究進展[J]. 錢敏,李關(guān)榮,魯成.  蠶業(yè)科學(xué). 2004(02)
[9]核糖核酸酶及其在胰腺癌診斷中的應(yīng)用[J]. 景在平,仲劍平.  國外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗學(xué)分冊. 1989(03)

碩士論文
[1]重組核糖核酸酶A的表達和復(fù)性研究[D]. 肖文楚.天津大學(xué) 2009



本文編號：3599618