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噬菌體展示肽庫(kù)篩選人成骨細(xì)胞特異性結(jié)合多肽的實(shí)驗(yàn)研究

發(fā)布時(shí)間:2022-01-15 15:04
  以純化的人顱骨成骨細(xì)胞為陽(yáng)性靶細(xì)胞,從噬菌體展示十二肽庫(kù)中篩選出能夠與之特異性結(jié)合的多肽,為鈦種植體表面的生物化修飾提供新的策略和研究方向。本研究一共包含兩個(gè)部分:第一部分:噬菌體展示十二肽庫(kù)篩選人成骨細(xì)胞特異性多肽的實(shí)驗(yàn)研究以人顱骨成骨細(xì)胞作為靶細(xì)胞,對(duì)噬菌體展示十二肽庫(kù)進(jìn)行全細(xì)胞篩選,洗滌后將獲得的細(xì)胞洗脫液和細(xì)胞裂解液分別培養(yǎng)計(jì)數(shù),經(jīng)四輪篩選后,從計(jì)數(shù)平板中隨機(jī)挑選46個(gè)(洗脫、裂解各23個(gè))分離良好的噬菌體克隆,以人牙齦成纖維細(xì)胞為對(duì)照細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞ELISA檢測(cè)、細(xì)胞免疫熒光等鑒定陽(yáng)性噬菌體克隆并測(cè)序分析。結(jié)果顯示:共得到22個(gè)與成骨細(xì)胞特異性結(jié)合力高于成纖維細(xì)胞2倍以上的陽(yáng)性克隆,氨基酸序列具有同源性。洗脫、裂解液中獲得了共同的特異性結(jié)合多肽,比例相當(dāng),占有相近的結(jié)合優(yōu)勢(shì),這也說(shuō)明與成骨細(xì)胞具有高度親和力的噬菌體是通過(guò)其表面展示的短肽與細(xì)胞特異性結(jié)合,而能夠內(nèi)化入細(xì)胞胞漿內(nèi)的噬菌體也是通過(guò)這種受體介導(dǎo)的胞吞作用進(jìn)行的。出現(xiàn)頻率最高的多肽氨基酸序列為:M G W S W W P E T W P M,對(duì)該多肽序列的氨基酸組成特點(diǎn)及其基本的生化特性進(jìn)行分析。第二部分:噬菌體展示十二... 

【文章來(lái)源】:安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】:62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【文章目錄】:
縮略詞表
摘要
Abstract
前言
材料與方法
    第一部分 材料與試劑
        1. 材料與試劑
        2. 儀器與設(shè)備
        3. 試劑的配置方法
    第二部分 實(shí)驗(yàn)方法
        1. 細(xì)胞培養(yǎng)
        2. 噬菌體展示肽庫(kù)篩選人成骨細(xì)胞特異性多肽的實(shí)驗(yàn)研究
            2.1 技術(shù)路線
            2.2 篩選方法
            2.3 檢測(cè)分析
            2.4 結(jié)果
        3 噬菌體展示肽庫(kù)差減篩選人成骨細(xì)胞特異性多肽的實(shí)驗(yàn)研究
            3.1 技術(shù)路線
            3.2 篩選方法
            3.3 檢測(cè)分析
            3.4 結(jié)果
討論
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)歷
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
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本文編號(hào):3590827

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