發(fā)布時間：2022-01-06 23:37

　　本文基于原子力顯微鏡,結(jié)合量子點標記技術、激光掃描共聚焦顯微鏡以及流式細胞儀等生物檢測技術和密度梯度離心法、陽性和陰性磁珠分選法等分離方法,以正常健康人和慢性淋巴白血病患者的外周血B淋巴細胞作為研究對象,在高分辨的納米尺度下從不同角度研究這兩種細胞的生物物理特性,即細胞形態(tài)及膜納米結(jié)構(gòu)、膜表面粘附特性、楊氏模量、抗原-抗體之間特異性相互作用力、膜表面抗原分子的分布情況等。主要獲得了以下具有創(chuàng)新性的成果：1)與正常B淋巴細胞相比,慢性淋巴白血病B淋巴細胞高大,膜表面納米結(jié)構(gòu)更加粗糙,非特異性粘附力和硬度都明顯減小。通過修飾CD20抗體的AFM針尖測出CD20抗原-抗體的相互作用力比未修飾抗體針尖測得的非特異性粘附力大5倍,并依據(jù)抗原抗體特異性作用力的測量,得出CD20分子在正常CD20+B淋巴細胞膜上分布比較均勻,小部分有聚集現(xiàn)象,相反,在慢淋CD20+B淋巴細胞膜表面分布稀疏。表明應用AFM可在形態(tài)學和機械性能上明顯區(qū)分正常和慢性淋巴白血病B淋巴細胞,為臨床診斷慢性淋巴白血病提供新的手段,B淋巴細胞上的CD20分布可以作為抗原CD20用藥選擇參考。2)隨著超抗原SAC刺激時間增加,1.... 

【文章來源】：暨南大學廣東省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
目錄
第一章 緒論
    第一節(jié) 原子力顯微鏡簡介
        1.1 原子力顯微鏡的山來
        1.2 原子力顯微鏡的基本原理
        1.3 原子力顯微鏡的工作模式
    第二節(jié) 在原子力顯微鏡在細胞成像方面的應用
        2.1 研究單細胞的意義
        2.2 單細胞成像
    第三節(jié) AFM單分子力譜測量在細胞方面的應用
        3.1 測定細胞粘附力和彈性
        3.2 單分子力譜在細胞特異性分子相互作用中的應用
    展望
    研究創(chuàng)新點和意義
    參考文獻
第二章 原子力顯微鏡探測人正常和慢淋B淋巴細胞
    1 引言
    2 試劑材料與方法
        2.1 試劑材料
        2.2 儀器
        2.3 細胞樣品制備
        2.4 AFM樣品制備
        2.5 原子力顯微鏡掃描
        2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
    3 結(jié)果與討論
        3.1 原了力顯微鏡對正常和慢淋B淋巴細胞的形貌與膜納米結(jié)構(gòu)的表征
        3.2 原了力顯微鏡測定正常和慢淋B淋巴細咆的力學性質(zhì)
        3.3 正常和慢性淋巴白血病B淋巴細胞的楊氏模量分析
    小章小結(jié)
    參考文獻
第三章 B淋巴細胞膜CD20抗原的分布與單分子力譜探測
    1 引言
    2 材料和方法
        2.1 試劑和儀器
        2.2 方法
    3 結(jié)果與討論
        3.1 正常和B-CLL外周血CD20~+B淋巴細胞的熒光成像
        3.2 正常和B-CLL外周血CD20~+B淋巴細胞形態(tài)及CD20抗原-抗體特異性相互作用力的AFM分析
    本章小結(jié)
    參考文獻
第四章 SAC刺激慢性淋巴白血病B淋巴細胞的原子力觀察
    1 引言
    2 材料和方法
        2.1 材料和儀器
        2.2 細胞分離培養(yǎng)
        2.3 AFM樣品制備
        2.4 增殖實驗
        2.5 原子力顯微鏡成像及力譜測定
        2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
    3 結(jié)果與分析
        3.1 CCK-8細胞增殖實驗
        3.2 刺激細胞形貌分析
        3.3 刺激B淋巴細胞超微結(jié)構(gòu)分析
        3.4 B淋巴細胞膜納米力學性能測量
    4 討論
    本章小結(jié)
    參考文獻
第五章 有絲分裂原誘導的B淋巴細胞形貌及生物力學分析
    1 引言
    2 材料和方法
        2.1 材料
        2.2 細胞培養(yǎng)
        2.3 純化B淋巴細胞
        2.4 掃描激光共聚焦顯微鏡
        2.5 細胞染色和流式細胞分析
        2.6 原子力顯微鏡成像及力學測定
        2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
    3 結(jié)果與討論
        3.1 倒置熒光顯微鏡觀察B淋巴細胞
        3.2 抗原誘導B淋巴細胞活化
        3.3 細胞周期檢測
        3.4 細胞內(nèi)鈣離子濃度檢測
        3.5 靜息和活化B淋巴細胞形貌和納米結(jié)構(gòu)變化
        3.6 活化B淋巴細胞的粘附力變化
        3.7 細胞骨架蛋白F-actin檢測
        3.8 細胞膜電位檢測
    本章總結(jié)
    參考文獻
附錄1 英文縮略語表
附錄2 攻讀碩士學位期問參加科研工作基本情況
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]重組質(zhì)粒pIRES-EGFP-BCL 11B電轉(zhuǎn)染幼稚T細胞的可視化研究[J]. 龔超群,郜世雋,蔡繼業(yè),王秋蘭.  分析測試學報. 2009(12)
[2]原子力顯微鏡對中性粒細胞與K562細胞超微結(jié)構(gòu)及機械性能的探測[J]. 黃訓,金花,趙宏霞,伍時縣,蔡繼業(yè).  分析測試學報. 2009(11)
[3]基于原子力顯微鏡的人外周血CD8+T細胞形貌觀察與力譜分析[J]. 黃飛程,郜世雋,邱思遠,蔡繼業(yè).  分析測試學報. 2009(10)
[4]應用原子力顯微鏡分析正常淋巴細胞和Jurkat細胞的形態(tài)和機械性質(zhì)[J]. 蔡小芳,蔡繼業(yè),董世松,鄧華,胡明鉛.  生物工程學報. 2009(07)
[5]單細胞結(jié)構(gòu)與功能的原子力顯微鏡研究[J]. 朱杰,孫潤廣.  生命科學儀器. 2005(02)



本文編號：3573372