低溫保存技術(shù)發(fā)展至今已成功在理論和實(shí)踐中取得了進(jìn)展。人體紅細(xì)胞的長期低溫保存對調(diào)節(jié)血液供需平衡,正常開展輸血工作和保存稀有血型有著重要作用。迄今為止,人體紅細(xì)胞的低溫保存方法發(fā)展已較為成熟并成功應(yīng)用于臨床,主要包括4℃低溫冷藏和高甘油（Gly）慢速冷凍保存。低溫冷藏法的存儲時(shí)間太短,冷鏈運(yùn)輸成本高,不適合在特殊地區(qū)使用。慢速冷凍法需使用高濃度的Gly作為低溫保護(hù)劑（CPA）,增加了臨床操作的復(fù)雜度和難度,對紅細(xì)胞的低溫保存和輸血帶來了諸多不便。因此,尋找一種低溫保存紅細(xì)胞的新方法來降低CPA濃度具有探究價(jià)值。在此課題中:（一）利用低甘油快速冷凍保存法進(jìn)行紅細(xì)胞低溫保存,探究CPA的種類和濃度對紅細(xì)胞低溫保存的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,添加海藻糖（Tre）可以提高紅細(xì)胞的存活率。（二）使用已廣泛應(yīng)用于低溫保存研究中的海藻酸鹽水凝膠,提出基于水凝膠微纖維封裝技術(shù)的紅細(xì)胞低溫保存新方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在使用超低濃度甘油（≤5%（w/v））作為CPA時(shí),基于水凝膠微纖維封裝技術(shù)的保存方法可以提高紅細(xì)胞存活率。使用5%Gly+0.3 mol/L Tre作為CPAs時(shí),紅細(xì)胞存活率可提高到約80%。此外... 

【文章來源】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)安徽省 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．３紅細(xì)胞存儲病變［２５］??１．１．２常見的水凝膠材料??

］和普朗克尼［５９，?６０］等。??０?ｄ?？??＇?＇？一、?—、??ｔｖｍｅｔｒ＊、ｊ?＼?／????＇ＶＰ??ｉ?＿?＇秩?ＡＰｐ？ｃ．＿ｓ?廣寸‘－廠一??＼?ｏｆＡＩｕｉｉｉａｒｃ?／?—??ｐＪＺ、６６—?＾）＝二零??？ｎ＾ｔｕ＾ｄ?Ｉ．Ｖ—?？一??＼?＇、：：：、?暴＇＾??、?Ｃｔｔｅｉｍ??八、??｝＞？？?＼?＾?ｙｍｍｍ?＼??｜?｜?Ｉ??一?＇?＿Ｊ?■，＇ｔ＾ｊ??ｗ??■Ｐ?ａ??＊ｗｆｃ？ｒ？??圖１．４基于海藻酸鹽的水凝膠的應(yīng)用［６１］??海藻酸鹽水凝膠因?yàn)榭梢允辜?xì)胞固定化，所以具有很高的適用性。海藻酸鹽??水凝膠的各種應(yīng)用如圖１．４所示。海藻酸鹽是一種天然的多糖，通常從海藻中提??取，因此產(chǎn)量豐厚，生物相容性好，常被作為封裝細(xì)胞的水凝膠材料［３６］。在保??持細(xì)胞活力和功能的生理?xiàng)l件下，它可與某一些＋２或＋３價(jià)的離子（例如：Ｃａ２＋，??Ｂａ２＋和Ｓｒ２—等）交聯(lián)配制成具有高含水量的不同軟彈性的海藻酸鹽水凝膠［６２］。??通常情況下，交聯(lián)可以直接在室溫中進(jìn)行，交聯(lián)過程較為溫和，交聯(lián)劑對細(xì)胞毒??性也比較小，因此得到的水凝膠是具有良好生物相容性的，可以專用于特定的生??物醫(yī)學(xué)和細(xì)胞應(yīng)用［６３］。尤其對于基于微囊化技術(shù)的低溫保存，各種海藻酸鹽水??凝膠膠囊在包裹活細(xì)胞，聚集體和組織等物質(zhì)上展示出了很高的效率，與傳統(tǒng)方??６??

ｗａｒ?＇們丨?ｕｒｙ??￥＃＊ｔｅｃ１ｋｍ?ａｎｆｌ?ｊｏｋｉｎｇ?ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ｝?ｆｅＰｅｃｔ－ｖｅ?４?ｕｆＫｆｏｆｗｌ?＿＿＿?ＪＺ￣￣￣７￣ＴＺＺ７??０ｐａｍｔｔａ，ｔ，〇ｎ?ｍｏｔｉｏｎ?ｏｔ?ＣＰＡ?ｒ＾Ｃ二ｍｏｏｔ?｜?［?ｒｅｗａ＾＾ｐ??＾?Ｒｅｍｏｖａｉ?ｏ＊?ＣＰＡ??（ｂ）?Ｔｗｏ?Ｔｙｐｅｓ?ｏｆ?Ｃｒｙｏｉｎｊｕｒｉｅｓ??３７?°Ｃ?０?°Ｃ?＾??．ｆ、Ｏｓｍｏｔｉｃ?Ｉｎｊｕｒｙ??？?Ｆｒｅｅｚｉｎｇ?：??圖１．５?（ａ）低溫保存的步驟及對低溫?fù)p傷的優(yōu)化［７］，?（ｂ）兩種低溫保存損傷機(jī)制［６６］。??由于細(xì)胞低溫?fù)p傷的存在，低溫保存不只是將生物材料直接放置在低溫環(huán)境??中，而是需要一些特殊的化學(xué)試劑來輔助保存以減小低溫?fù)p傷，即ＣＰＡ。低溫保??存的一般步驟是：１）在降溫前將ＣＰＡ與細(xì)胞混合進(jìn)行預(yù)處理；２）將細(xì)胞按程??序降溫至所需低溫開始保存；３）解凍復(fù)溫保存的細(xì)胞；４）從解凍后的細(xì)胞去除??ＣＰＡ［７，?７１］。細(xì)胞的冷凍過程在ＣＰＡ存在的情況下發(fā)生改變，來控制水輸送、成??核和冰晶的生長速度［１１］。ＣＰＡ的保護(hù)作用可能存在于整個(gè)低溫保存過程中。因??此，使用適當(dāng)?shù)模茫校翆τ谔岣邩悠返蜏乇４婧蟮纳婺芰O其關(guān)鍵丨１１］。ＣＰＡ根??據(jù)是否可以擴(kuò)散到細(xì)胞內(nèi)部，而分成兩大類．？滲透性ＣＰＡ和非滲透性ＣＰＡ。??滲透性ＣＰＡ可以通過擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，一般只有滲透到胞內(nèi)的滲透性ＣＰＡ??才會(huì)在低溫保存過程中對細(xì)胞產(chǎn)生保護(hù)作用。常見的滲透性ＣＰＡ有：二甲亞砜、??甘油、丙三醇、乙二醇等。不同的滲透性ＣＰＡ有不同的細(xì)胞保護(hù)機(jī)制，常見的??作用機(jī)制如下

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]低溫保護(hù)劑相關(guān)研究進(jìn)展及其應(yīng)用[J]. 李夏,臧傳寶.  現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生. 2019(20)
[2]納米技術(shù)應(yīng)用于低溫生物保存的研究現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢[J]. 張淼,趙剛,顧寧.  科學(xué)通報(bào). 2019(21)
[3]海藻糖水替代機(jī)制對凍干紅細(xì)胞保護(hù)作用的探討[J]. 李文慧,王玨,李玲,宋寧,劉忠.  中國輸血雜志. 2018(03)
[4]4種保存液對犬紅細(xì)胞低溫保存效果的比較[J]. 李燕,王昌虹,劉新峰,郝志明,丁向彬.  延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào). 2017(02)
[5]冰凍紅細(xì)胞甘油化與去甘油化的改進(jìn)[J]. 張成松.  菏澤醫(yī)學(xué)�？茖W(xué)校學(xué)報(bào). 2017(02)
[6]滲透壓法檢測冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞甘油殘留量的可行性[J]. 夏紅英,任芙蓉,陳小林,馮博.  北京醫(yī)學(xué). 2015(06)
[7]人紅細(xì)胞凍干保護(hù)劑的研究進(jìn)展[J]. 陳奕冰,田力,宋寧,陳強(qiáng),劉忠.  中國輸血雜志. 2015(03)
[8]血液紅細(xì)胞的低溫保存[J]. 曾葉,呂維敏,黃鋼妹,姜紅強(qiáng),何勤躍.  低溫與超導(dǎo). 2014(09)
[9]紅細(xì)胞冷凍干燥保存研究進(jìn)展[J]. 譚淑玲,林國奎.  中外醫(yī)療. 2012(09)
[10]用原子力顯微鏡觀察術(shù)中失血回收對紅細(xì)胞形態(tài)的影響[J]. 黃艷,聶偲,田玲玲,胡冬華,彭雪梅,王小平,李雅蘭.  中國病理生理雜志. 2012(02)

博士論文
[1]線性多元醇水溶液低溫下的熱現(xiàn)象研究[D]. 高才.上海理工大學(xué) 2004

碩士論文
[1]HUVECs海藻酸鹽水凝膠封裝保存及其抑冰機(jī)制研究[D]. 李玉芳.中國科學(xué)技術(shù)大學(xué) 2019
[2]凍干紅細(xì)胞殘余水含量的測量、分布及其代謝影響研究[D]. 洪樹青.安徽醫(yī)科大學(xué) 2017
[3]透析法結(jié)合超濾法去除冷凍復(fù)溫紅細(xì)胞保護(hù)劑的方法研究[D]. 張瑩.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2016
[4]人紅細(xì)胞的凍干保存方法研究[D]. 楊媛媛.安徽醫(yī)科大學(xué) 2009



本文編號：3571354