目的應(yīng)用譜系重編程技術(shù)將表皮角質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為汗腺樣細(xì)胞,并在體外構(gòu)建三維培養(yǎng)體系,誘導(dǎo)工程化的汗腺樣細(xì)胞自組裝為汗腺類器官,以實(shí)現(xiàn)汗腺功能性修復(fù)。方法采用CRISPR/dCas9系統(tǒng)上調(diào)內(nèi)源性外胚層發(fā)育不全(EDA)基因在人永生化表皮角質(zhì)(HaCaT)細(xì)胞中的表達(dá),篩選陽性克隆后進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)。將細(xì)胞分為HaCaT組(HaCaT細(xì)胞使用汗腺培養(yǎng)基培養(yǎng))、HaCaT+Dox組(HaCaT細(xì)胞使用含5 μg/ml Dox的汗腺培養(yǎng)基培養(yǎng))、HaCaT-E組(HaCaT-E細(xì)胞使用汗腺培養(yǎng)基培養(yǎng))、HaCaT-E+Dox組(HaCaT-E細(xì)胞使用含5 μg/ml Dox的汗腺培養(yǎng)基培養(yǎng)),采用RT-PCR及Western blotting檢測(cè)EDA基因在各組細(xì)胞中的表達(dá)水平,以驗(yàn)證質(zhì)粒轉(zhuǎn)染是否成功。另將細(xì)胞分為HaCaT-E組(汗腺培養(yǎng)基組)及HaCaT-E+Dox組(汗腺培養(yǎng)基+5 μg/ml Dox組),利用免疫熒光染色鑒定汗腺表面標(biāo)記物的表達(dá)水平,以驗(yàn)證HaCaT細(xì)胞是否成功重編程為汗腺樣細(xì)胞。隨后以Matrigel為主體支架模擬汗腺發(fā)育微環(huán)境,在體外誘導(dǎo)汗腺樣細(xì)胞自組裝形成汗腺類器官,...

【文章來源】： 解放軍醫(yī)學(xué)雜志. 2020,45(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
    1.2 病毒包裝與收集
    1.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染與篩選
    1.4 RT-PCR、Western blotting檢測(cè)EDA表達(dá)水平
    1.5 經(jīng)誘導(dǎo)后HaCaT-E的細(xì)胞免疫熒光染色
    1.6 汗腺類器官的體外構(gòu)建與免疫熒光染色
    1.7 燙傷模型的建立及多細(xì)胞結(jié)構(gòu)的移植
    1.8 碘-淀粉發(fā)汗實(shí)驗(yàn)及組織免疫熒光染色
    1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
2 結(jié) 果
    2.1 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染及陽性細(xì)胞篩選
    2.2 RT-PCR、Western blotting檢測(cè)EDA的表達(dá)
    2.3 HaCaT-E細(xì)胞的形態(tài)特征及表型鑒定
    2.4 汗腺類器官的結(jié)構(gòu)特征及表型鑒定
    2.5 汗腺類器官促進(jìn)體內(nèi)汗腺的功能性修復(fù)
3 討 論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]類器官技術(shù)在食管癌研究中的應(yīng)用與展望 [J]. 李春震,朱勃睿,趙鐵軍.  解放軍醫(yī)學(xué)雜志. 2019(11)
[2]汗腺樣細(xì)胞經(jīng)凍存復(fù)蘇后再生汗腺功能的研究[J]. 馬奎,魯剛,楊思明,孫同柱,付小兵,盛志勇.  感染、炎癥、修復(fù). 2011 (04)
[3]汗腺的種植(附2例報(bào)告) [J]. 盛志勇,付小兵,蔡颯,雷永紅,孫同柱,白曉東,陳敏亮.  解放軍醫(yī)學(xué)雜志. 2008(04)



本文編號(hào)：3550300