本研究利用山羊誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（giPSCs-like）為實(shí)驗(yàn)材料,篩選能夠促進(jìn)giPSCs多能性狀態(tài)維持的小分子化合物,從而優(yōu)化培養(yǎng)體系。再對(duì)優(yōu)化后的培養(yǎng)體系下獲得的giPSCs進(jìn)行一系列生物學(xué)特性檢測(cè),同時(shí)結(jié)合RNA-seq技術(shù)和生物信息學(xué)分析,探究其促進(jìn)多能性維持的相關(guān)分子機(jī)制。1.促進(jìn)山羊iPSC-like細(xì)胞多能性的培養(yǎng)條件篩選（1）通過(guò)比對(duì)添加單個(gè)作用于表觀遺傳的小分子藥物對(duì)giPSC-like細(xì)胞的影響,以克隆形態(tài),堿性磷酸酶活性以及相關(guān)基因的表達(dá)量作為鑒定指標(biāo),結(jié)果發(fā)現(xiàn):Vc組與RG108組可以明顯促進(jìn)克隆的生長(zhǎng)速度與維持克隆形態(tài),克隆更加透亮,堿性磷酸酶（AP）活性增強(qiáng)。同時(shí)添加Vc組顯著提高了組蛋白去甲基化酶KDM2B和DNA去甲基化酶TET1,TET3的表達(dá)。添加RG108組降低了 DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑（DNMT1）的表達(dá)。（2）進(jìn)一步篩選小分子組合,結(jié)果發(fā)現(xiàn):Vc與RG108（即VR）組合使用時(shí),AP活性更強(qiáng),同時(shí)顯著上調(diào)TET1,TET3和顯著下調(diào)DNMT1的表達(dá)。另外多能性基因OCT4,SOX2,NANOG的表達(dá)量也顯著提高,促進(jìn)多能性的維持。（3）篩選基礎(chǔ)... 

【文章來(lái)源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：89 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２：撤ＤＯＸ時(shí)ｇｉＰＳＣ－２６傳代后克隆形態(tài)變化

驗(yàn)單獨(dú)添加５個(gè)小分子化合物，濃度設(shè)為文獻(xiàn)報(bào)道工作濃度和２倍的工作濃度，??觀察對(duì)克隆形態(tài)，堿性磷酸酶活性以及熒光定量ＰＣＲ結(jié)果的影響，發(fā)現(xiàn)：Ｖｃ組??與ＲＧ１０８組可以明顯促進(jìn)克隆的生長(zhǎng)速度與維持克隆形態(tài)（圖１－４），由圖１－５??能看出ｂ，Ｃ兩組ＡＰ著色最深，活性強(qiáng)，染色結(jié)果優(yōu)于Ｃｏｎｔｒｏｌ組，與形態(tài)觀察??結(jié)果一致，因此確定篩選小分子為Ｖｃ（５０?ｐＭ），ＲＧ１０８?（８?ｍＭ）。但是添加Ｖｃ提??高了組蛋白去甲基化酶ＫＤＭ２Ｂ和ＤＮＡ去甲基化酶ＴＥＴ１，ＴＥＴ３的表達(dá)，ＯＣＴ４??表達(dá)量顯著提高，ＮＡＮＯＧ表達(dá)量提高不顯著；添加ＲＧ１０８組降低了?ＤＮＡ甲基??２６??

細(xì)胞系多能性後持的研究??轉(zhuǎn)移酶抑制劑（ＤＮＭＴ１）的表達(dá)，０ＣＴ４表達(dá)量提高不顯著，但是ＮＡＮＯＧ表??達(dá)量得到顯著提高（如圖１－６）。其中ＲＧ１０８組工作濃度為８?ｐＭ，效果優(yōu)于文獻(xiàn)??報(bào)道的４?｜ｉＭ，?Ｖｃ設(shè)為文獻(xiàn)報(bào)道工作濃度（即５０?ｐＭ）效果較好。??ｂ?艮?ｅ?Ｅ??ＭＢ??心ｔ…??閣１－４：作用表觀遺傳的小分子篩選時(shí)，克隆形態(tài)圖（１０ｘ）。Ｃｏｎｔｒｏｌ為ＧＩＰＳ培養(yǎng)下的克??隆形態(tài)，其他圖均是在ＧＩＰＳ基礎(chǔ)上添加單個(gè)小分子的培養(yǎng)基體系下的克隆形態(tài)。ａ：添加??ＶＰＡ?（０．５ｍＭ），?Ａ：添加?ＶＰＡ（１?ｍＭ＞。ｂ：添加?Ｖｃ（５０（ｉＭ），?Ｂ：添加?Ｖｃ（１０〇ｈＭ）？?ｃ：添加??ＲＧ１０８（４ｐＭ），Ｃ：添力口?ＲＧ１０８（８｜ｉＭ）。?ｄ：添力口?３’Ｄｚｎｅｐ（０．１ｊａＭ）．Ｄ：添力口?３，Ｄｚｎｅｐ（０．２??ＨＭ）〇?ｅ：添加５－ａｚａ（０．５?ｐＭ），?Ｅ：添加５－ａｚａ（ｌ?ｐＭ）。由圖能看出圖ｂ，?Ｂ，?Ｃ克隆形態(tài)最??好，但是Ｂ組增殖過(guò)快，易分化，所以先排除。標(biāo)尺＝１００?ｐｍ。??Ｆｉｇｕｒｅ?１－４：?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?ｃｌｏｎｅｓ?ｗｈｅｎ?ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ?ｆｏｒ?ｓｍａｌｌ?ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ?ｔｈａｔ?ａｒｅ?ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ．?Ｃｏｎｔｒｏｌ??ｉｓ?ａ?ｃｌｏｎｅｄ?ｆｏｒｍ?ｕｎｄｅｒ?ＧＩＰＳ?ｃｕｌｔｕｒｅ

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號(hào)：3486409