通過構(gòu)建透明質(zhì)酸鍵合低分子量聚乙烯亞胺的低毒性siRNA載體,探究其轉(zhuǎn)染si RNA的效果。利用核磁共振氫譜確定透明質(zhì)酸與低分子量聚乙烯亞胺嫁接形成復(fù)合物的結(jié)構(gòu),并通過MTT方法檢測其對細胞的毒性。采用凝膠電泳法確定siRNA與復(fù)合載體的結(jié)合比,利用粒度儀對其粒徑大小、帶電量等進行表征,并通過透射電子顯微鏡觀察其形態(tài)。通過復(fù)合載體在B16F1細胞內(nèi),觀察其基因沉默效率。結(jié)果表明:當(dāng)siRNA與復(fù)合載體的質(zhì)量比為1∶20時,其表面帶電量約為+0. 3 m V,粒子直徑約為113. 7 nm,形態(tài)均勻呈球形,分散均勻。其對細胞毒性遠遠小于高分子量聚乙烯亞胺,但轉(zhuǎn)染效果較好。因此,透明質(zhì)酸鍵合低分子量聚乙烯亞胺是一種低毒、高效的新型非病毒載體。 

【文章來源】：重慶理工大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)). 2020,34(04)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

HA、PEI、HA+PEI和PEI-HA的核磁共振氫譜

MTT法檢測PEI 2K-HA與PEI 25K-HA的細胞毒性結(jié)果顯示(見圖2):PEI 2K-HA與PEI 25K-HA對細胞均具有毒性，并且隨著用量的增加，毒性也逐漸增加;但是，在不同濃度水平下，PEI 2K-HA對細胞的毒性均明顯小于PEI 25K-HA對細胞的毒性;且當(dāng)濃度低于50μ/m L時，PEI 2K-HA幾乎無細胞毒性。因此，需要進一步對PEI 2K-HA進行表征，檢測其用作基因載體的特性。2.3 凝膠電泳法檢測si RNA/PEI 2K-HA結(jié)合的結(jié)果

凝膠電泳法檢測si RNA與PEI 2K-HA復(fù)合物的結(jié)合結(jié)果顯示(見圖3),si RNA與PEI 2K-HA復(fù)合物在質(zhì)量比為1∶5、1∶10和1∶20這3種條件下均能夠完全結(jié)合。因此，需要進一步表征3種質(zhì)量比時的其他性能指標(biāo)，來確定si RNA與PEI2K-HA復(fù)合物的最佳結(jié)合比。2.4 si RNA/PEI 2K-HA復(fù)合物的表征結(jié)果

【參考文獻】：
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本文編號：3483408