通過(guò)構(gòu)建透明質(zhì)酸鍵合低分子量聚乙烯亞胺的低毒性siRNA載體,探究其轉(zhuǎn)染si RNA的效果。利用核磁共振氫譜確定透明質(zhì)酸與低分子量聚乙烯亞胺嫁接形成復(fù)合物的結(jié)構(gòu),并通過(guò)MTT方法檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞的毒性。采用凝膠電泳法確定siRNA與復(fù)合載體的結(jié)合比,利用粒度儀對(duì)其粒徑大小、帶電量等進(jìn)行表征,并通過(guò)透射電子顯微鏡觀(guān)察其形態(tài)。通過(guò)復(fù)合載體在B16F1細(xì)胞內(nèi),觀(guān)察其基因沉默效率。結(jié)果表明:當(dāng)siRNA與復(fù)合載體的質(zhì)量比為1∶20時(shí),其表面帶電量約為+0. 3 m V,粒子直徑約為113. 7 nm,形態(tài)均勻呈球形,分散均勻。其對(duì)細(xì)胞毒性遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于高分子量聚乙烯亞胺,但轉(zhuǎn)染效果較好。因此,透明質(zhì)酸鍵合低分子量聚乙烯亞胺是一種低毒、高效的新型非病毒載體。 

【文章來(lái)源】：重慶理工大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)). 2020,34(04)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

HA、PEI、HA+PEI和PEI-HA的核磁共振氫譜

MTT法檢測(cè)PEI 2K-HA與PEI 25K-HA的細(xì)胞毒性結(jié)果顯示(見(jiàn)圖2):PEI 2K-HA與PEI 25K-HA對(duì)細(xì)胞均具有毒性，并且隨著用量的增加，毒性也逐漸增加;但是，在不同濃度水平下，PEI 2K-HA對(duì)細(xì)胞的毒性均明顯小于PEI 25K-HA對(duì)細(xì)胞的毒性;且當(dāng)濃度低于50μ/m L時(shí)，PEI 2K-HA幾乎無(wú)細(xì)胞毒性。因此，需要進(jìn)一步對(duì)PEI 2K-HA進(jìn)行表征，檢測(cè)其用作基因載體的特性。2.3 凝膠電泳法檢測(cè)si RNA/PEI 2K-HA結(jié)合的結(jié)果

凝膠電泳法檢測(cè)si RNA與PEI 2K-HA復(fù)合物的結(jié)合結(jié)果顯示(見(jiàn)圖3),si RNA與PEI 2K-HA復(fù)合物在質(zhì)量比為1∶5、1∶10和1∶20這3種條件下均能夠完全結(jié)合。因此，需要進(jìn)一步表征3種質(zhì)量比時(shí)的其他性能指標(biāo)，來(lái)確定si RNA與PEI2K-HA復(fù)合物的最佳結(jié)合比。2.4 si RNA/PEI 2K-HA復(fù)合物的表征結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基因治療的輸送屏障及輸送載體的研究[J]. 呂楠,馬柳青,陳順,蘭維華,黃襲雯,袁偉恩.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2014(01)
[2]聚乙烯亞胺與殼聚糖在基因載體中的應(yīng)用[J]. 朱青,劉克海,王曉宇,龐杰,劉承初.  藥學(xué)服務(wù)與研究. 2013(06)
[3]透明質(zhì)酸鍵合分枝狀聚乙烯亞胺作為siRNA載體的研究[J]. 袁玉姣,董爽,馮曉娜,蔣革,王慧國(guó).  沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào). 2012(04)
[4]RNAi藥物的臨床研究進(jìn)展[J]. 王慶曉,王建軍,徐根興.  藥學(xué)與臨床研究. 2010(02)
[5]陽(yáng)離子聚合物基因載體的理論研究[J]. 趙亮,蘇暢,馬洪林.  中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù). 2009(42)
[6]基因治療現(xiàn)狀與前景[J]. 張夏華,吳廣通,李蓉.  藥學(xué)實(shí)踐雜志. 2009(01)
[7]siRNA非病毒載體的研究進(jìn)展[J]. 王曦培,于鳳波,李宇婷,姜同英,王思玲.  世界臨床藥物. 2008(03)



本文編號(hào)：3483408