發(fā)布時(shí)間：2021-11-02 20:15

　　第一部分PFTα誘導(dǎo)MC3T3-E1細(xì)胞成骨分化的機(jī)制研究目的探索PFTα誘導(dǎo)成骨分化的作用機(jī)制方法本研究采用CCK-8檢測PFTα對MC3T3-E1細(xì)胞毒性,篩選PFTα誘導(dǎo)MC3T3-E1細(xì)胞成骨分化的最佳濃度。細(xì)胞經(jīng)PFTα處理后,real-time PCR、westernblot、免疫熒光法檢測細(xì)胞內(nèi)NOX4水平,流式細(xì)胞儀檢測ROS水平。制備并篩選siNOX4i并將siNOX4轉(zhuǎn)染細(xì)胞,觀察干擾NOX4后PFTα對MC3T3-E1細(xì)胞成骨誘導(dǎo)的作用機(jī)制。分別予細(xì)胞ALP、茜素紅染色觀察成骨情況;qPCR,WB、IF檢測Nox4;流式檢測ROS的表達(dá)。結(jié)果PFTα能顯著提高M(jìn)C3T3-E1細(xì)胞成骨分化。在10-80μmol范圍內(nèi)隨著PFTα濃度增高細(xì)胞活力下降。同時(shí),隨著PFTα濃度增加,NOX4和ROS水平也逐步增加,成骨能力提升。在轉(zhuǎn)染si-NOX4的細(xì)胞后,PFTα增加NOX4-ROS的作用和促進(jìn)成骨的作用明顯受到抑制。結(jié)論P(yáng)FTα通過PFTα-NOX4-ROS通路促進(jìn)MC3T3-E1細(xì)胞成骨分化第二部分SIS-ECM/PLGA/PFTα,復(fù)合膜體外誘導(dǎo)MC3T3-E1細(xì)... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：117 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１?ｐ５３的基本結(jié)構(gòu)間??Ｆｉｇ．?１－１?Ｔｈｅ?ｂａｓｉｃ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｐ５３??

?博士學(xué)位論文???３．實(shí)驗(yàn)結(jié)果??３．１?ＣＣＫ８檢測藥物對細(xì)胞活性的影響??對不同濃度的ＰＦＴａ細(xì)胞毒性進(jìn)行篩眩按照５?ｎＭ，?１０?｜ｉＭ，２０?ｐＭ，?４０?ｐＭ，??８０?ｎＭ的濃度進(jìn)行配置，ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細(xì)胞經(jīng)不冋濃度的ＰＦＴａ處理２４小時(shí)后，檢??測細(xì)胞活性情況。如圖１－２?ＣＣＫ８在４５０ｎｍ處ＯＤ值所示：與對照組（ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１）??相比，隨著ＰＦＴａ濃度增加，ＯＤ數(shù)值逐漸減�。杭�(xì)胞相對增值率如表１－３：與對??照組相比，５ｐＭ，?ｌＯｐＭ，２０ｐＭ組細(xì)胞增殖率較高，均大？�。福埃�，４０ｐＭ組??６１．８°／。，８０ｐＭ組細(xì)胞增殖率＜５０％。Ｉｆｌ丨細(xì)胞毒性：５（ｉＭ，１０ｐＭ，２０ｐＭ為１級，??４０?為２級，８０ｐＭ３級，岡此在８０?ｐＭ細(xì)胞的毒性作用已經(jīng)顯著增加。??Ｅ?１．〇１?＊??ｃ?｜?１?，?■?ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１??養(yǎng)?０．８－?＾?１?｜??ＷＭ?ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１＋５ｍＭ?ＰＦＴａ??？?Ｈ｜?ｔ?＊?■?ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１?＋?１０＿?ＰＦＴａ??Ｂｉ?ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１＋２０（ＪＭ?ＰＦＴａ??｜?Ｂ｜?ｍ?ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１＋４０（ｊＭ?ＰＦＴａ??ｉｌｌｌＵＵ??＾?＾?＜Ｃ＞?／??？。令。令０?士??圖１－２不同濃度的ＰＦＴｃｔ處理ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細(xì)胞后，ＣＣＫ８法檢測細(xì)胞毒性。隨著濃度的增加，??細(xì)胞的活性下降。數(shù)據(jù)以Ｍ土ＳＤ：＊ｐ＜（）．（）５。??Ｆｉｇ．?１－２?ＣＣＫ８?ｗａｓ?ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ?ｔｏ?ｔｅｓｔ?ｔｈｅ?ｃ＞?ｔｏｔｏ＼ｉｃｉｔｙ?ｏｆ?ＰＦＴａ?ｕｓｅｄ?ｉｎ?ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１?ｃｅｌｌｓ．?Ｗｉｔｈ?ｔｈｅ??ｉｎｃ

Ｔｃｔ?９０．８％?１??ＭＣ３Ｔ３－ＥＫ２０＾Ｍ?ＰＦＴａ?８４．２＆?１??ＭＣ３Ｔ３－Ｅｌ＋４０＾ｉＭ?ＰＦＴａ?６１．８％?２??ＭＣ３Ｔ３－Ｅｌ＋８０＾ｉＭ?ＰＦＴａ?４０．６％?３??３．２?ＡＬＰ結(jié)果??用不同濃度的ＰＦＴａ處理ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細(xì)胞，誘導(dǎo)其成骨。ＡＬＰ是成骨分化的??早期指標(biāo)，因此ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細(xì)胞培養(yǎng)７天后行ＡＬＰ檢測，結(jié)果顯示相對于對照??組，ＰＦＴａ具備誘導(dǎo)成骨分化的能力，這種作用呈劑量依賴性，在４０ｐＭ的時(shí)候??達(dá)到峰值（如圖１－３）。結(jié)合ＣＣＫ８的結(jié)果綜合分析ＰＦＴａ在４０ｐＭ具有最大的??成骨作用，細(xì)胞毒性相對于８０ｐＭ校后續(xù)實(shí)驗(yàn)采用４０ｐＭ濃度。??２?°＇１°?］?．?■?＊???ｍ?ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１??§＿?０．０８－?■?＊?Ｉ?＿?＇?ｍ?ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１?＋?５｜ＪＭ?ＰＦＴａ??〇?｜?■?ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１?＋?１０｜ＪＭ?ＰＦＴａ??２?０?０６?■????Ｈ?ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１＋２０｜ＪＭ?ＰＦＴａ??；Ｈ?ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１＋４０｜ＪＭ?ＰＦＴａ??，專?〇．０４－?＿?ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１＋８〇ｍＭ?ＰＦＴａ??匕?ｔｕｔｕ??＾?／?／?／?／??圖１－３不同濃度的ＰＦＴａ處理ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細(xì)胞７天后行ＡＬＰ檢測。數(shù)據(jù)以Ｍ士ＳＤ：＊ｐ＜０．０５。??Ｆｉｇ．?１－３?Ｔｈｅ?ｏｓｔｅｏｇｅｎｅｓｉｓ?ｏｆ?ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１?ｃｅｌｌｓ?ｔｒｅａｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ＰＦＴ?ａ?ｗａｓ??ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｂｙ?ＡＬＰ?ａｆｔｅｒ?７?ｄａｙｓ．?Ｄａｔａ?ｗｅｒｅ?ｒｅｐｒ


本文編號：3472321