發(fā)布時(shí)間：2017-05-02 23:13

  本文關(guān)鍵詞：不同時(shí)期離心力對(duì)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨分化的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:觀察小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞微團(tuán)培養(yǎng)成軟骨分化過程中,不同時(shí)期離心力對(duì)其的作用,探討力學(xué)因素與Notch信號(hào)通路在軟骨分化過程中的作用機(jī)制。方法:昆明小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離,多次換液傳代培養(yǎng)至第3代,進(jìn)行細(xì)胞表型鑒定,以1×106細(xì)胞量制作成細(xì)胞微團(tuán)。按處理因素的不同將試驗(yàn)分為5組:A組:誘導(dǎo)培養(yǎng)第1周離心處理;B組:誘導(dǎo)培養(yǎng)第2周離心處理;C組:誘導(dǎo)培養(yǎng)第3周離心處理;D組:誘導(dǎo)培養(yǎng)第4周離心處理;E組:靜態(tài)培養(yǎng),期間未進(jìn)行離心處理。實(shí)驗(yàn)采用Eppendorf 5920 R恒溫離心機(jī)提供37℃,200G,2h/d相對(duì)離心力,每周換液2次。在相應(yīng)處理后于第7、14、21、28日采用CCK-8法和PCNA標(biāo)記法檢測離心處理后細(xì)胞與對(duì)照組細(xì)胞的增殖效率,RT-PCR分析Sox9,Col-Ⅱ,及Notch信號(hào)通路相關(guān)分子表達(dá)。Elisa法測定每次換液后各組培養(yǎng)基內(nèi)Col-Ⅱ的蛋白含量。28天后,番紅O染色檢測各組ECM,免疫熒光檢測各組Col-Ⅱ表達(dá)。結(jié)果:1.原代細(xì)胞呈類圓形,24小時(shí)后可見少許貼壁,傳代后細(xì)胞呈長梭形,生長迅速,細(xì)胞集落形成,呈漩渦狀生長。流式細(xì)胞儀鑒定為CD45陽性表達(dá),CD11b,CD34,CD29陰性表達(dá)。細(xì)胞純度高,為間充質(zhì)干細(xì)胞表型。2.細(xì)胞增殖率檢測:A,B組較對(duì)照組細(xì)胞增殖明顯,C,D組細(xì)胞增殖效率與對(duì)照組沒有顯著差異。3.RT-PCR檢測:誘導(dǎo)28天后Sox9與Col-Ⅱ表達(dá)相一致,B,C組表達(dá)較對(duì)照組增高,A組較對(duì)照組降低,D組無明顯差異。Notch1和Hey1表達(dá)相一致,B,C組均較對(duì)照組降低;A,D組均升高。Hes1表達(dá)各組間沒有明顯差異。A組離心7天后(第1周末)與對(duì)照組相比,Sox9與Col-Ⅱ表達(dá)均降低(P0.05),Notch1與Hey1表達(dá)均增高(P0.05);B組離心7天后(第2周末)與對(duì)照組相比,Sox9與Col-Ⅱ表達(dá)明顯增高(P0.05),Notch1與Hey1表達(dá)降低(P0.05);C組離心7天后(第3周末)與對(duì)照組相比,Sox9與Col-Ⅱ表達(dá)明顯增高(P0.05),Notch1與Hey1表達(dá)降低(P0.05)。4.培養(yǎng)基中Col-Ⅱ的濃度隨著誘導(dǎo)時(shí)間呈現(xiàn)增長趨勢,與對(duì)照組相比,A組分泌Col-Ⅱ受到抑制,分化延遲,且終濃度較低;B組誘導(dǎo)效果最明顯,Col-Ⅱ早期分泌,且終濃度最高;C組誘導(dǎo)效果亦顯著,終濃度與B組相當(dāng);D組誘導(dǎo)效果無差異。5.番紅O及免疫熒光染色顯示各誘導(dǎo)組均成軟骨誘導(dǎo)成功,B組ECM和Col-Ⅱ表達(dá)最多,A組細(xì)胞密度最大。結(jié)論:不同時(shí)期離心力對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化的作用不同。軟骨分化的第二周給予細(xì)胞離心力可促進(jìn)軟骨基質(zhì)形成并促進(jìn)細(xì)胞增殖,是離心力干預(yù)最佳時(shí)期。早期離心力干預(yù)可激活Notch信號(hào)通路,從而抑制細(xì)胞成軟骨分化。分化中期的離心力干預(yù)可能通過抑制Notch信號(hào)而促進(jìn)軟骨形成。
【關(guān)鍵詞】：軟骨分化 離心力 Sox9 Notch
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R684;R318.08
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 常用縮寫詞中英文對(duì)照表10-11
• 前言11-13
• 1 材料與方法13-21
• 1.1 一般資料13-14
• 1.2 研究方法14-20
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理20-21
• 2 結(jié)果21-28
• 2.1 小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞分離及體外擴(kuò)增21
• 2.2 小鼠BMSCs的鑒定21-22
• 2.3 不同時(shí)期離心力對(duì)小鼠BMSCs增殖的作用22-23
• 2.4 RT-PCR檢測23-25
• 2.5 誘導(dǎo)28天后番紅O染色25-26
• 2.6 免疫熒光檢測Col-Ⅱ26
• 2.7 Elisa法檢測培養(yǎng)基中Col-Ⅱ26-28
• 3 討論28-31
• 4 結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-36
• 綜述36-45
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 致謝45-46
• 在學(xué)期間參與的科研課題與研究成果46-47
• 個(gè)人簡歷47

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