本文關(guān)鍵詞：人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞與京尼平交聯(lián)的Ⅰ型膠原蛋白支架構(gòu)建組織工程脂肪的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：探討人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞與京尼平交聯(lián)的I型膠原蛋白支架材料構(gòu)建組織工程脂肪的可行性。 方法：1.分離培養(yǎng)人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(hADSCs),傳代培養(yǎng)至第3代,接種于京尼平交聯(lián)的I型膠原蛋白支架材料,測(cè)定細(xì)胞粘附率；MTT法評(píng)估hADSCs在支架材料上的粘附和增殖情況,支架材料對(duì)細(xì)胞的毒性作用；光鏡和電鏡分別觀察hADSCs在支架材料上的粘附和生長(zhǎng),以及細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,評(píng)估]DSCs與京尼平交聯(lián)的I型膠原蛋白材料的生物相容性。2.體外復(fù)合培養(yǎng)成脂和成血管內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)的hADSCs.實(shí)驗(yàn)分為3組,A組為實(shí)驗(yàn)組：：ADSCs和誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞按4：1比例接種于支架材料；B、C組為對(duì)照組,B組：?jiǎn)渭兘臃N1ADSCs:C組：?jiǎn)渭兘臃N誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞。細(xì)胞接種于支架材料并成脂誘導(dǎo)5-7天后,對(duì)細(xì)胞—支架復(fù)合物行油紅O染色,RT-PCR檢測(cè)成脂特異性基因PPAR γ-2的表達(dá),掃描電鏡觀察支架材料上細(xì)胞的生長(zhǎng)及成脂情況。3.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：將上述A.B.C3組細(xì)胞-支架復(fù)合物及空白支架材料(D組)分別植入雌性Wistar大鼠大鼠背部皮下。12周后,取材并觀察移植物,移植物行組織形態(tài)學(xué)和掃描電鏡觀察,]RT-PCR檢測(cè)成脂特異性基因PPAR γ-2的表達(dá)。 結(jié)果：1.hADSCs接種于支架材料后,能夠迅速在材料上粘附、增殖,其平均黏附率為86.5%；光鏡和掃描電鏡顯示hADSCs在支架材料上粘附性良好,隨著時(shí)間的推移,細(xì)胞逐漸增多,可以遷移進(jìn)入支架內(nèi)部并均勻分布。2.體外實(shí)驗(yàn)：3組細(xì)胞在材料上均生長(zhǎng)良好。RT-PCR檢測(cè)到A、B兩組成脂特異性基因PPAR γ-2的表達(dá)；油紅O染色表明成脂誘導(dǎo)后,A、B兩組均成功誘導(dǎo)生成大量成熟脂肪細(xì)胞,C組則沒(méi)有脂肪細(xì)胞生成。A、B兩組和C組支架材料上的脂肪細(xì)胞數(shù)量有顯著差異(P0.01)。3.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：A、B兩組移植物油紅O染色均呈陽(yáng)性,HE染色顯示A組成熟脂肪細(xì)胞和新生血管數(shù)量均明顯多于B組,有顯著差異(P0.01),C組、D組移植物內(nèi)未見(jiàn)成熟脂肪細(xì)胞和新生血管形成；各組材料較植入時(shí)均明顯降解,且A組材料較其它各組降解更為明顯。 結(jié)論：1、hADSCs在京尼平交聯(lián)的Ⅰ型膠原蛋白支架材料上能很好地粘附、增殖,材料對(duì)hADSCs的毒性較低,交聯(lián)后的支架材料與1ADSCs具有良好的體外生物相容性。2、hADSCs成血管內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)分化后,和hADSCs復(fù)合接種于支架材料,在體外能成功地構(gòu)建組織工程化脂肪。3、復(fù)合移植在體內(nèi)更能顯著促進(jìn)構(gòu)建組織工程化脂肪,并能促進(jìn)構(gòu)建物內(nèi)的血管新生。
【關(guān)鍵詞】：脂肪組織工程 京尼平 Ⅰ型膠原蛋白 人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞 共培養(yǎng) 工程脂肪 血管新生
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R318.08
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 縮略詞表10-11
• 前言11-13
• 第一部分 人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞與京尼平交聯(lián)的Ⅰ型膠原蛋白材料生物相容性的體外研究13-22
• 1. 材料和方法13-17
• 1.1 材料13-14
• 1.1.1 主要試劑和儀器14
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法14-17
• 1.2.1 hADSCs的分離、培養(yǎng)14-15
• 1.2.2 hADSCs的鑒定15
• 1.2.3 支架處理及觀察15
• 1.2.4 支架材料孔隙率測(cè)定15-16
• 1.2.5 支架材料體外降解率測(cè)定16
• 1.2.6 光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞—支架材料復(fù)合物16
• 1.2.7 細(xì)胞在支架材料上的黏附率測(cè)定16-17
• 1.2.8 細(xì)胞在支架材料上的粘附及增值17
• 1.2.9 細(xì)胞—支架復(fù)合物掃描電鏡觀察17
• 2. 結(jié)果17-20
• 2.1 hADSCs的體外培養(yǎng)生長(zhǎng)及形態(tài)學(xué)17
• 2.2 hADSCs的鑒定17-18
• 2.3 支架材料大體及掃描電鏡觀察18
• 2.4 支架材料體外降解18
• 2.5 細(xì)胞-支架復(fù)合物倒置顯微鏡觀察18-19
• 2.6 細(xì)胞在支架材料上的粘附19
• 2.7 細(xì)胞在支架材料上的增殖19
• 2.8 掃描電鏡觀察復(fù)合物19-20
• 3. 討論20-22
• 第二部分 人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞與京尼平交聯(lián)的Ⅰ型膠原蛋白體外構(gòu)建組織工程化脂肪的實(shí)驗(yàn)研究22-29
• 1. 材料和方法22-25
• 1.1 材料22-23
• 1.1.1 主要試劑和儀器22-23
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法23-25
• 1.2.1 hADSCs的分離、培養(yǎng)23
• 1.2.2 hADSCs成血管內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)分化及鑒定23-24
• 1.2.3 支架處理24
• 1.2.4 細(xì)胞接種及誘導(dǎo)24
• 1.2.5 MTT法檢測(cè)成脂誘導(dǎo)劑對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞活性的影響24
• 1.2.6 細(xì)胞—支架復(fù)合物掃描電鏡觀察及油紅O染色24
• 1.2.7 RT-PCR檢測(cè)成脂特異性基因PPARγ-2的表達(dá)24-25
• 2. 數(shù)據(jù)處理25-26
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-27
• 3.1 hADSCs成內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)分化26
• 3.2 細(xì)胞在支架材料上成脂誘導(dǎo)26-27
• 3.2.1 成脂誘導(dǎo)劑對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞活性的影響26
• 3.2.2 倒置顯微鏡觀察26
• 3.2.3 掃描電鏡觀察26
• 3.2.4 油紅O染色26
• 3.2.5 RT-PCR26-27
• 4. 討論27-29
• 第三部分 人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞與京尼平交聯(lián)的Ⅰ型膠原蛋白材料體內(nèi)構(gòu)建組織工程脂肪的研究29-35
• 1. 材料和方法29-31
• 1.1 材料29-30
• 1.1.1 主要試劑和儀器29-30
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法30-31
• 1.2.1 hADSCs的分離、培養(yǎng)30
• 1.2.2 hADSCs成內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)分化30
• 1.2.3 膠原蛋白支架的處理30
• 1.2.4 hADSCs-支架材料體外共培養(yǎng)30
• 1.2.5 CM-DIL標(biāo)記細(xì)胞30
• 1.2.6 hADSCs-膠原蛋白支架復(fù)合物移植及觀察30-31
• 1.2.7 觀察移植物內(nèi)脂肪樣細(xì)胞數(shù)量與新生血管數(shù)量31
• 2. 數(shù)據(jù)處理31
• 3. 結(jié)果31-33
• 3.1 熒光顯微鏡觀察細(xì)胞-支架材料復(fù)合物31
• 3.2 移植物大體觀察31
• 3.3 移植物組織學(xué)觀察31-32
• 3.4 移植物內(nèi)脂肪細(xì)胞數(shù)量與新生血管數(shù)量32-33
• 3.5 掃描電鏡觀察33
• 3.6 RT-PCR33
• 4. 討論33-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-41
• 綜述41-49
• 參考文獻(xiàn)47-49
• 在學(xué)期間的研究成果49-50
• 致謝50-51
• 附圖51-67

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

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  本文關(guān)鍵詞：人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞與京尼平交聯(lián)的Ⅰ型膠原蛋白支架構(gòu)建組織工程脂肪的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：339757