目的:研究不同分子量絲素蛋白對人永生化表皮細胞的增殖作用、紫外防護作用和對大鼠的UVB防護作用。方法:1. 將提取出來的絲素蛋白依據(jù)正交試驗分組出來的不同條件用堿性蛋白酶降解,得出不同分子量的絲素蛋白;2. MTT法檢測UVB對Ha Ca T細胞的損傷實驗的最佳劑量;MTT法檢測絲素蛋白對Ha Ca T細胞增殖的最佳濃度;3. MTT法檢測不同組絲素蛋白對Ha Ca T細胞的增殖影響。4. 建立Ha Ca T細胞UVB損傷模型。將Ha Ca T細胞以1×10⁴個/cm²的密度接種于培養(yǎng)板上,當細胞生長到密度為70%以上時（約72 h）,將培養(yǎng)板取出,以備實驗檢測,輻射劑量為130m J/cm²（1.97m W/cm²,66s）。5. 不同分子量組絲素蛋白對Ha Ca T細胞UVB損傷修復的影響細胞實驗分七組:Control組、Damage組、SF組、MW1<3000Da組、MW=3.0×10⁴Da組、MW12<3000 Da組、MW=8.0×10³

【文章來源】：河北醫(yī)科大學河北省

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同濃度絲素蛋白對HaCaT細胞增殖的影響(*P<0.05)

21不同組絲素蛋白作用于HaCaT細胞后用MTT法檢測HaCaT細胞增殖情況，檢測結(jié)果示，絲素蛋白能促進HaCaT細胞的增殖活性，不同分子量絲素蛋白效果有所不同。與空白對照組相比，各組絲素蛋白均促進HaCaT細胞增殖，其中MW1<3000組的絲素蛋白明顯促進HaCaT細胞增殖，其作用最強（P<0.05）；降解后絲素蛋白實驗組MW1<3000組與未降解絲素蛋白SF組相比促進HaCaT細胞增殖的效果更為明顯（P<0.05）。其它降解后絲素蛋白實驗組與未降解絲素蛋白SF組相比，促進HaCaT細胞增殖的效果略高于SF組，但差異不夠明顯，無統(tǒng)計學意義（如圖2）。è′j圖2不同分子量組絲素蛋白對HaCaT細胞增殖的影響(*P<0.05，□P<0.05)Fig.2EffectsofdifferentMWgroupofsilkfibroinonHaCaTcells’proliferation;*representforcomparingwiththeControlgroupP<0.05.□representforcomparingwiththeSFgroupP<0.05.2不同分子量絲素蛋白對HaCaT細胞的紫外防護作用2.1MTT法檢測UVB對HaCaT細胞的損傷實驗的最佳劑量通過MTT法檢測可發(fā)現(xiàn)UVB對HaCaT細胞增殖的影響比較明顯。如結(jié)果示，和無UVB輻射對照組比較，UVB輻射量130mj/cm2、150mj/cm2(P<0.05)分別降低HaCaT細胞存活率到71%和50%，呈劑量依賴性；UVB輻射量110mj/cm2HaCaT細胞存活率到85%，但差異不夠

22明顯，無統(tǒng)計學意義。由于本實驗的細胞凋亡情況不可以太大，選擇輻射劑量130mJ/cm2為UVB細胞損傷模型的輻射劑量（如圖3）。圖3不同組UVB劑量對HaCaT細胞增殖的影響(*P<0.05，□P<0.05)Fig.3EffectsofdifferentUVBirradiationonHaCaTcells’proliferation;*representforcomparingwiththeControlgroupP<0.05.2.2MTT法檢測不同分子量組絲素蛋白對HaCaT細胞UVB損傷修復的影響UVB輻射Damage組與正常對照Control組相比，UVB輻射顯著性抑制了HaCaT細胞的活性；絲素防護實驗組與UVB輻射Damage組相比，絲素給藥后，HaCaT細胞的存活率顯著提高（如圖4）。

【參考文獻】：
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博士論文
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本文編號：3318311