本文關(guān)鍵詞：四種氨基酸修飾的樹形高分子基因轉(zhuǎn)染效率及生物相容性比較，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：基因治療被認為是未來的疾病治療的重要手段之一,然而基因治療需要高效的基因運輸載體將所需的基因運輸?shù)侥康奈稽c�；蜉d體主要分為病毒類和非病毒類。病毒類的基因載體其安全性不足而且難以大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn),非病毒類基因載體雖然安全,易大規(guī)模生產(chǎn),但是轉(zhuǎn)染效率較差,因此構(gòu)建高效、安全的基因轉(zhuǎn)染載體尤為重要。本文以聚酰胺胺(poly-amidoamine,PAMAM)樹形高分子為基礎(chǔ),將其表面進行不同的氨基酸功能化修飾,探討不同氨基酸修飾的PAMAM樹形高分子基因轉(zhuǎn)染效率。 我們合成了由精氨酸、賴氨酸、組氨酸、苯丙氨酸修飾的第五代聚酰胺胺樹形高分子(generation5,G5PAMAM),通過核磁共振技術(shù)進行了表征,根據(jù)連接數(shù)量,產(chǎn)物分別標記為G5-Arg64、G5-Arg110、G5-His40、G5-His113、G5-Phe71、 G5-Phe99、G5-Lys130。在N/P為2時G5-Arg64、G5-Arg110、G5-His40、G5-His113、 G5-Phe71可以完全復(fù)合質(zhì)粒DNA,形成穩(wěn)定的復(fù)合物；在N/P為4時G5-Phe99、G5-Lys130可以完全復(fù)合質(zhì)粒DNA,形成穩(wěn)定的復(fù)合物。在HeLa和293T細胞上對所合成材料轉(zhuǎn)染Luciferase、EGFP兩種報告基因轉(zhuǎn)染效率進行比較,結(jié)果表明,G5-Arg110轉(zhuǎn)染Luciferase質(zhì)粒的效率高于G5-Arg64,并且G5-Arg64和G5-Arg110這兩種材料相對于G5PAMAM的轉(zhuǎn)染效率提高了約十倍,明顯促進Luciferase在HeLa、293T細胞上的轉(zhuǎn)染；G5-Lys130的轉(zhuǎn)染效率與G5PAMAM相當；G5-His40、G5-His113、G5-Phe71和G5-Phe99均顯著低于G5PAMAM的轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染EGFP質(zhì)粒時,在HeLa、293T兩種細胞上,我們發(fā)現(xiàn)類似的結(jié)果,精氨酸修飾能顯著提高G5PAMAM的轉(zhuǎn)染效率,而其它幾種氨基酸修飾改善效果不明顯。 接著我們用MTT法比較了四種氨基酸修飾的G5PAMAM在HeLa、293T兩種細胞上的毒性,結(jié)果表明,G5PAMAM口經(jīng)過氨基酸修飾后的G5PAMAM在最佳N/P時,對HeLa、293T這兩種細胞均無明顯毒性,細胞存活率均在90%以上,細胞狀態(tài)良好。在這個基礎(chǔ)上我們又做了單獨材料對細胞的毒副作用實驗,結(jié)果表明,G5-His40、G5-His113、G5-Arg64、G5-Arg110、G5-Lys130對細胞的毒副作用相比于G5PAMAM降低,G5-Phe71、G5-Phe99對細胞的毒副作用相比于G5PAMAM加大。 綜上所述,利用精氨酸修飾后的G5PAMAM的基因轉(zhuǎn)染效率更高,而且可以使樹形高分子的細胞毒性下降：利用賴氨酸修飾后的G5PAMAM可以使樹形高分子的細胞毒性下降,但是基因轉(zhuǎn)染效率沒有得到明顯提高；利用組氨酸修飾后G5PAMAM可以顯著降低樹形高分子對細胞的毒性,但是基因轉(zhuǎn)染效率明顯下降；利用苯丙氨酸修飾后的G5PAMAM不僅顯著提高樹形高分子對細胞的毒性,而且基因轉(zhuǎn)染效率明顯下降。
【關(guān)鍵詞】：基因轉(zhuǎn)染 聚酰胺-胺樹形高分子 核磁共振 精氨酸 組氨酸 賴氨酸 苯丙氨酸 Luciferase EGFP
【學位授予單位】：華東師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 第一章 基因轉(zhuǎn)染的研究進展11-30
• 第二章 不同氨基酸修飾的G5 PAMAM樹形高分子合成與表征30-46
• 1 前言30
• 2 材料與方法30-33
• 3 實驗結(jié)果33-43
• 4 討論43-45
• 5 參考文獻45-46
• 第三章 四種氨基酸修飾的樹形高分子基因轉(zhuǎn)染效率及細胞毒性試驗46-98
• 1 前言46-48
• 2 材料與方法48-52
• 3 實驗結(jié)果52-92
• 4 討論92-96
• 5 參考文獻96-98
• 附錄98-99
• 致謝99

【參考文獻】

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  本文關(guān)鍵詞：四種氨基酸修飾的樹形高分子基因轉(zhuǎn)染效率及生物相容性比較，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：324908