本文關(guān)鍵詞：氧化鋯表面不同粗化處理對成骨細(xì)胞增殖分化的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:自從上世紀(jì)60年代以來利用口腔種植技術(shù)恢復(fù)咀嚼功能受到了越來越多的患者的認(rèn)同,目前臨床上所應(yīng)用的種植材料主要是純鈦及鈦合金。金屬鈦是一種生物材料,具有良好的生物相容性,但是由于其強(qiáng)度不太理想,鈦離子釋放造成牙齦薄弱區(qū)色澤改變等問題,科研人員一直在探索能夠彌補(bǔ)鈦材不足的更加理想的新型種植材料。氧化鋯是一種具有良好生物相容性并且具有較高的強(qiáng)度以及與牙體組織相近色澤的新型陶瓷材料。本研究通過對氧化鋯片表面進(jìn)行不同的粗化處理使氧化鋯表面形成不同的形貌結(jié)構(gòu),與小鼠胚胎成骨細(xì)胞MC3T3-E1進(jìn)行體外培養(yǎng),掃描電鏡觀察氧化鋯表面形貌及表面元素能譜分析,粗糙度儀測量氧化鋯表面粗糙度,MTT法檢測成骨細(xì)胞增殖活性情況以及堿性磷酸酶(ALP)活性檢測法檢測成骨細(xì)胞分化情況,觀察不同表面粗化處理方法對培養(yǎng)于氧化鋯表面上的成骨細(xì)胞生物學(xué)活性的影響,為更好地研究和設(shè)計(jì)氧化鋯種植體表面粗化處理方法提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1氧化鋯片的制備及分組制備直徑19 mm,厚度1mm的氧化鋯片36枚,Ra=0.4μm,分3組,每組12枚。A組熱酸蝕刻組。將制作好的氧化鋯陶瓷片以100℃放入濃HF(分析純)和濃HNO_3(分析純)混合液(1:1)中熱酸蝕處理30分鐘。B組Al_2O_3噴砂+熱酸蝕刻組。粒度為120目的Al_2O_3砂粒,0.45Mpa氣壓下噴砂;用濃HF/HNO_3混合液(1:1)于100℃下熱酸蝕30分鐘。C組對照組。表面不做任何粗化處理。2氧化鋯片表面粗糙度的測量利用TR-200粗糙度儀(測量范圍:Ra:0.025~12.5μm)測量三種經(jīng)不同表面處理方法處理的氧化鋯片表面的粗糙度,將各組所測得的平均粗糙度值作為該種表面處理方法鋯片的表面粗糙度。3氧化鋯片表面形貌的掃描電鏡觀察和元素能譜分析采用掃描電鏡觀察HF/HNO_3混合酸熱酸蝕處理組,Al_2O_3砂粒噴砂+HF/HNO_3混合酸熱酸蝕處理組和未處理光滑組的三組氧化鋯片的表面形貌并對其表面進(jìn)行元素能譜分析。4小鼠胚胎成骨細(xì)胞MC3T3-E1細(xì)胞復(fù)蘇、傳代培養(yǎng)將凍存的原代小鼠胚胎成骨細(xì)胞MC3T3-E1進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇,鏡下觀察細(xì)胞生長情況,待細(xì)胞長滿培養(yǎng)瓶底,且形態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。5在不同粗化處理氧化鋯片上進(jìn)行成骨細(xì)胞培養(yǎng)取生長狀態(tài)良好的第3代成骨細(xì)胞,將其制備成骨細(xì)胞濃度為1×10~5個/ml的單細(xì)胞懸液,分別接種于經(jīng)HF/HNO_3混合酸熱酸蝕處理,Al_2O_3砂粒噴砂+HF/HNO_3混合酸熱酸蝕處理和未處理光滑的三組氧化鋯片表面,然后將三組氧化鋯片分別放入12孔培養(yǎng)板內(nèi),使成骨細(xì)胞在氧化鋯片上生長。6對不同粗化處理氧化鋯片表面的成骨細(xì)胞增殖活性情況的檢測在接種后培養(yǎng)的第3、5、7天做MTT細(xì)胞活性的檢測,用酶聯(lián)免疫儀在490nm處測定各組氧化鋯片表面的吸光度值(OD值)以了解各組細(xì)胞的增殖活性情況。7成骨細(xì)胞堿性磷酸酶(ALP)活性檢測生長狀態(tài)良好的第3代成骨細(xì)胞接種于不同粗化處理氧化鋯陶瓷片上,在12孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)。每組設(shè)3個平行試樣,觀察細(xì)胞的生長變化情況,測定第3、5、7天的成骨細(xì)胞堿性磷酸酶(ALP)活性并描繪標(biāo)準(zhǔn)曲線,用酶聯(lián)免疫儀在405nm處測定各組氧化鋯片表面的吸光度值并根據(jù)所得標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算ALP活性,根據(jù)所得ALP活性以了解各組細(xì)胞的分化情況。8統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件,應(yīng)用析因設(shè)計(jì)的方差分析比較三組氧化鋯片在不同時間點(diǎn)的吸光度值及ALP活性值,并采用SNK法進(jìn)行組間的兩兩比較,P0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果:1三種不同表面處理的氧化鋯表面粗糙度的測量結(jié)果HF/HNO_3混合酸熱酸蝕處理組氧化鋯片表面粗糙度為0.75μm;Al_2O_3砂粒噴砂+HF/HNO_3混合酸熱酸蝕處理組氧化鋯片表面粗糙度為1.60μm;未處理光滑組氧化鋯片表面粗糙度為0.41μm。2三種不同表面處理的氧化鋯表面形貌的掃描電鏡觀察結(jié)果和元素能譜分析結(jié)果HF/HNO_3混合酸熱酸蝕處理組氧化鋯片表面形成了大量不規(guī)則的二級窩洞和少量淺顯的一級窩洞,Al_2O_3砂粒噴砂+HF/HNO_3混合酸熱酸蝕處理組氧化鋯片表面形成了大量形態(tài)不規(guī)則的一級窩洞和二級窩洞,兩種氧化鋯片表面形成的窩洞洞形相似。未處理光滑組氧化鋯片表面則只有淺顯的窩洞形態(tài),且相對較為平坦。表面元素能譜分析顯示,三種氧化鋯片表面都僅含有Zr和O元素,不含有其他元素。3三組氧化鋯片表面成骨細(xì)胞的增殖活性檢測結(jié)果成骨細(xì)胞在各組氧化鋯片表面培養(yǎng)3、5、7天后的吸光度值比較:HF/HNO_3混合酸熱酸蝕處理組吸光度值:(1)3 day:0.249±0.006(2)5 day:0.430±0.013(3)7 day:0.914±0.015;Al_2O_3砂粒噴砂+HF/HNO_3混合酸熱酸蝕處理組吸光度值:(1)3 day:0.235±0.006(2)5 day:0.552±0.014(3)7day:1.055±0.046;未處理組吸光度值:(1)3 day:0.221±0.004(2)5 day:0.315±0.013(3)7 day:0.717±0.003。單純熱酸蝕組與Al_2O_3砂粒+熱酸蝕組氧化鋯片表面在各個時間點(diǎn)的成骨細(xì)胞吸光度值之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),兩種粗化處理組與未處理組氧化鋯片表面在各個時間點(diǎn)的成骨細(xì)胞吸光度值之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。4三組氧化鋯片表面成骨細(xì)胞的堿性磷酸酶活性檢測結(jié)果成骨細(xì)胞在各組氧化鋯片表面培養(yǎng)3、5、7天后的ALP活性(單位:IU)比較:HF/HNO_3混合酸熱酸蝕處理組ALP活性:(1)3 day:3.556±0.053(2)5 day:6.190±0.077(3)7 day:6.700±0.185;Al_2O_3砂粒噴砂+HF/HNO_3混合酸熱酸蝕處理組ALP活性:(1)3 day:3.619±0.223(2)5 day:6.407±0.076(3)7 day:7.231±0.115;未處理組ALP活性:(1)3 day:3.324±0.069(2)5 day:5.649±0.026(3)7 day:6.230±0.229。單純熱酸蝕組與Al_2O_3砂粒+熱酸蝕組氧化鋯片表面在各個時間點(diǎn)的成骨細(xì)胞ALP濃度之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),兩種粗化處理組與未處理組氧化鋯片表面在各個時間點(diǎn)的成骨細(xì)胞ALP濃度之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:1經(jīng)HF/HNO_3混合酸熱酸蝕處理,Al_2O_3砂粒噴砂+HF/HNO_3混合酸熱酸蝕處理和未處理光滑的氧化鋯陶瓷片表面分別具有不同的表面形貌,Al_2O_3砂粒噴砂+HF/HNO_3混合酸熱酸蝕組氧化鋯片的表面形貌最為粗糙,HF/HNO_3混合酸熱酸蝕組次之,未處理組表面形貌較為光滑。2成骨細(xì)胞在三組氧化鋯片表面均能生長,但成骨細(xì)胞在三組氧化鋯片表面的生長狀況存在差異。3成骨細(xì)胞在經(jīng)HF/HNO_3混合酸熱酸蝕處理和Al_2O_3砂粒噴砂+HF/HNO_3混合酸熱酸蝕處理的氧化鋯片表面增殖、分化情況優(yōu)于未經(jīng)粗化處理的氧化鋯片表面,且經(jīng)Al_2O_3砂粒噴砂+HF/HNO_3混合酸熱酸蝕處理的氧化鋯片表面更加有利于成骨細(xì)胞的增殖和分化。
【關(guān)鍵詞】：氧化鋯 熱酸蝕 Al_2O_3噴砂 成骨細(xì)胞 MTT ALP
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R783.1
【目錄】：

• 摘要4-8
• ABSTRACT8-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-19
• 結(jié)果19-21
• 附圖21-27
• 附表27-28
• 討論28-33
• 結(jié)論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-36
• 綜述 氧化鋯生物材料的研究現(xiàn)狀36-51
• 參考文獻(xiàn)44-51
• 致謝51-52
• 個人簡歷52

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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8 王勇平;廖q，

本文編號：313390