發(fā)布時間：2017-04-17 04:20

  本文關鍵詞：兔骨髓間充質干細胞復合小腸粘膜下層（SIS）構建組織工程化陰道模型的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：初步探索以骨髓間充質干細胞（BMSCs）為種子細胞復合SIS構建組織工程化陰道的可行性。 方法：2月齡日本大耳兔，體重1.5~2.5kg，雌性。體外分離、培養(yǎng)兔BMSCs共誘導成陰道上皮細胞（ECs）與平滑肌細胞（SMCs），并行5-BrdU標記；將制備的小腸粘膜下層（SIS）材料切割成1cm×1cm大小，在其同一表面先后種植兩種細胞，待細胞在SIS表面貼附后將其植入兔體內深筋膜上繼續(xù)培養(yǎng)，分別于術后第1、2、3、4周取材行組織學檢查和抗角蛋白（CK）、平滑肌肌動蛋白（SMA）免疫組織化學及免疫熒光檢查等。以了解上皮細胞、平滑肌細胞在材料上的增殖分化情況和復合物在體內的血管化情況及SIS的降解情況。 結果：種子細胞能夠滲透、生長于SIS材料中，并見多種組織結構形成。植入體內2周后可見細胞增殖開始出現(xiàn)分層，SIS開始降解，組織結構漸清晰，4周后SIS完全降解，并見大量微血管長入。通過5-BrdU標記細胞的免疫熒光觀察見部分細胞核呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光，示SIS支架材料上生長的細胞多為所植入細胞；抗CK，SMA免疫組織化學染色示移植細胞能夠在體內分化。 結論：利用BMSC誘導的細胞為種子細胞復合于SIS材料上繼續(xù)培養(yǎng)，可在體內能繼續(xù)增殖分化，并形成多層細胞結構，可用于組織工程化陰道的構建。
【關鍵詞】：骨髓間充質干細胞 組織工程化陰道 小腸粘膜下層
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-8
• 第1章 引言8-10
• 第2章 兔 BMSCs 原代培養(yǎng)與誘導分化10-21
• 2.1 材料10-12
• 2.1.1 主要試劑10
• 2.1.2 主要液體的配制方法10-11
• 2.1.3 儀器設備及耗材11-12
• 2.1.4 實驗動物12
• 2.2 實驗方法12-15
• 2.2.1 兔陰道平滑肌細胞（SMCs）及上皮細胞（ECs）的原代培養(yǎng)12
• 2.2.2 兔陰道上皮及平滑肌細胞傳代培養(yǎng)12-13
• 2.2.3 兔 BMSCs 的體外分離及原代培養(yǎng)13-14
• 2.2.4 兔 BMSCs 傳代培養(yǎng)14
• 2.2.5 兔 BMSCs 的體外向上皮細胞誘導分化14
• 2.2.6 兔 BMSCs 的體外向平滑肌細胞誘導分化14
• 2.2.7 誘導后的檢測方法14-15
• 2.2.8 細胞生長曲線15
• 2.3 實驗結果15-18
• 2.3.1 BMSCs 細胞形態(tài)學觀察15-16
• 2.3.2 誘導 BMSCs 向陰道平滑肌樣細胞分化16
• 2.3.3 誘導 BMSCs 向陰道上皮樣細胞分化16
• 2.3.4 兔 BMSCs 及誘導后細胞第 3 代生長曲線16-18
• 2.4 討論18-21
• 2.4.1 間充質干細胞（MSCs）18-19
• 2.4.2 骨髓間充質干細胞誘導分化為平滑肌細胞及上皮細胞19-21
• 第3章 SIS 制備21-24
• 3.1 實驗材料和主要試劑21
• 3.2 方法21
• 3.2.1 物理方法處理21
• 3.2.2 化學方法處理21
• 3.3 結果21-22
• 3.3.1 SIS 的大體標本觀察21
• 3.3.2 透射及掃描電鏡觀察21-22
• 3.4 討論22-24
• 第4章 初級組織工程化陰道的體外構建及體內皮下植入24-34
• 4.1 主要材料24
• 4.2 主要試劑24
• 4.3 主要儀器設備24
• 4.4 實驗方法24-26
• 4.4.1 種子細胞標記24-25
• 4.4.2 種子細胞的種植25
• 4.4.3 實驗分組25
• 4.4.4 陰道模型皮下植入的手術方法及標本的獲取25
• 4.4.5 HE 染色25-26
• 4.4.6 免疫熒光26
• 4.4.7 免疫組化檢測組織 SMA 及廣譜角蛋白（CK）26
• 4.5 結果觀察26-31
• 4.5.1 體外時支架（SIS）表面種植種子細胞后的免疫熒光觀察26-27
• 4.5.2 皮下植入的陰道模型的大體觀察27
• 4.5.3 皮下種植的 5-Brdu 標記細胞的免疫熒光觀察27
• 4.5.4 皮下植入培養(yǎng)組織 HE 染色觀察27
• 4.5.5 皮下植入培養(yǎng)免疫組化檢測27-28
• 4.5.6 SIS 材料內毛細血管數(shù)量的比較28
• 4.5.7 統(tǒng)計方法28-31
• 4.6 討論31-34
• 第5章 結論34-35
• 致謝35-36
• 參考文獻36-39
• 綜述39-48
• 參考文獻46-48

【參考文獻】

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  本文關鍵詞：兔骨髓間充質干細胞復合小腸粘膜下層（SIS）構建組織工程化陰道模型的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：312417