本文關(guān)鍵詞：缺氧對(duì)多孔鉭-人成骨細(xì)胞復(fù)合物細(xì)胞增殖、分泌功能及成骨基因表達(dá)的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的本研究通過(guò)觀察缺氧對(duì)接種于多孔鉭支架材料上的成骨細(xì)胞形態(tài)學(xué)、增殖能力、分泌功能以及相關(guān)成骨細(xì)胞因子的影響,對(duì)比常氧和缺氧下成骨細(xì)胞功能的差異,證實(shí)缺氧對(duì)成骨細(xì)胞增殖、分泌功能的抑制作用,探討多孔鉭支架在模擬人體體內(nèi)缺氧微環(huán)境下的生物相容性及在修復(fù)骨缺損、骨再生的作用,為進(jìn)一步體內(nèi)實(shí)驗(yàn)及臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1大體及掃描電鏡觀察多孔鉭支架形態(tài)特征。成骨細(xì)胞的培養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)分組:選用MG63成骨細(xì)胞進(jìn)行分離培養(yǎng)、傳代及鑒定。將生長(zhǎng)狀態(tài)良好的第3代成骨細(xì)胞以1×106/L-1細(xì)胞濃度接種于多孔鉭支架復(fù)合培養(yǎng)。設(shè)2%氧濃度環(huán)境作為缺氧模型,20%氧濃度環(huán)境作為常氧模型。設(shè)缺氧組(缺氧下成骨細(xì)胞單純培養(yǎng))和缺氧鉭組(缺氧下成骨細(xì)胞與多孔鉭共培養(yǎng))作為實(shí)驗(yàn)組,與常氧對(duì)照組(常氧下成骨細(xì)胞單純培養(yǎng))作對(duì)比。2成骨細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察:倒置相差顯微鏡觀察每日常氧及缺氧狀態(tài)下成骨細(xì)胞生長(zhǎng);掃描電鏡觀察成骨細(xì)胞與多孔鉭材料附著;透射電鏡觀察常氧和缺氧下成骨細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變;3 CCK-8法檢測(cè)各組成骨細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。4 ELISA法檢測(cè)各組成骨細(xì)胞COL-Ⅰ、OC分泌水平。5免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)各組成骨細(xì)胞COL-Ⅰ、OC表達(dá)。6實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)各組多孔鉭材料對(duì)成骨細(xì)胞COL-Ⅰ、OC基因表達(dá)。結(jié)果1多孔鉭表面及斷面可見(jiàn)分布均勻的蜂窩狀孔隙,孔徑針尖大。掃描電鏡下材料表面及斷面分布均勻直徑約400~600μm的微孔結(jié)構(gòu),內(nèi)部孔隙相互連通�？紫稙槿S立體的連通結(jié)構(gòu),其結(jié)構(gòu)類似于松質(zhì)骨構(gòu)架。2倒置相差顯微鏡顯示常氧下成骨細(xì)胞生長(zhǎng)良好,細(xì)胞形態(tài)及大小均正常;短期缺氧細(xì)胞形態(tài)及數(shù)量未明顯改變,第4d細(xì)胞數(shù)量較常氧下略少,第7d細(xì)胞未鋪滿瓶底,部分細(xì)胞脫落;掃描電鏡顯示:成骨細(xì)胞在多孔鉭支架微孔內(nèi)黏附、生長(zhǎng)并分泌細(xì)胞外基質(zhì);透射電鏡下顯示:常氧下多孔鉭-成骨細(xì)胞復(fù)合物細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)大量細(xì)胞器,核仁較大,大量分泌小泡,染色質(zhì)豐富。缺氧下多孔鉭-成骨細(xì)胞復(fù)合物細(xì)胞胞膜絨毛狀小突起增多,細(xì)胞核固縮,染色質(zhì)凝結(jié),線粒體嵴腫脹。3 CCK-8法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖:缺氧下成骨細(xì)胞增殖能力較常氧下各組成骨細(xì)胞顯著降低(P0.05),常氧鉭組成骨細(xì)胞增殖能力高于常氧對(duì)照組;缺氧鉭組、缺氧組成骨細(xì)胞增殖能力較常氧對(duì)照組顯著減弱,隨缺氧程度加深多孔鉭-成骨細(xì)胞復(fù)合物細(xì)胞增殖能力逐漸減弱(P0.05)。4 ELISA法檢測(cè)各組成骨細(xì)胞COL-Ⅰ、OC分泌水平:缺氧鉭組、缺氧組成骨細(xì)胞COL-Ⅰ、OC分泌水平較常氧組顯著降低(P0.05);第7d缺氧鉭組COL-Ⅰ分泌水平較缺氧組升高。5d、7d缺氧鉭組成骨細(xì)胞OC分泌水平較缺氧組升高。5免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)各組成骨細(xì)胞COL-Ⅰ、OC的表達(dá)情況:缺氧組、缺氧鉭組成骨細(xì)胞COL-Ⅰ、OC表達(dá)較常氧對(duì)照組顯著降低(P0.05)。6 RT-QPCR檢測(cè)各組成骨細(xì)胞COL-Ⅰ和OC基因表達(dá)情況:缺氧組、缺氧鉭組成骨細(xì)胞COL-Ⅰ、OC基因相對(duì)表達(dá)量較常氧對(duì)照組明顯降低(P0.05)。結(jié)論1多孔鉭-成骨細(xì)胞復(fù)合物在不同缺氧條件下(3%PO2、2%PO2、1%PO2)伴隨時(shí)間的延長(zhǎng)及缺氧程度的加重,缺氧均可使各組成骨細(xì)胞的增殖能力減弱,其中以2%PO2、1%PO2效果最顯著。2嚴(yán)重缺氧可導(dǎo)致鉭-成骨細(xì)胞復(fù)合物成骨細(xì)胞出現(xiàn)線粒體腫脹、線粒體嵴減少或消失,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆粒等超微結(jié)構(gòu)病變。3缺氧可抑制成骨細(xì)胞分泌細(xì)胞外基質(zhì)COL-Ⅰ和OC,但當(dāng)多孔鉭-成骨細(xì)胞復(fù)合培養(yǎng)時(shí),多孔鉭3D空間結(jié)構(gòu)可使成骨細(xì)胞COL-Ⅰ和OC分泌功能降低有所緩解。4缺氧可使鉭-成骨細(xì)胞復(fù)合物成骨細(xì)胞COL-Ⅰ和OC m RNA及蛋白表達(dá)均降低。提示:構(gòu)建骨組織工程支架材料時(shí),特別是當(dāng)應(yīng)用于體內(nèi)骨缺損修復(fù)時(shí)要考慮到損傷區(qū)域氧分壓,適宜的氧分壓及氧濃度將有利于成骨細(xì)胞的生長(zhǎng)。
【關(guān)鍵詞】：多孔鉭材料 成骨細(xì)胞 Ⅰ型膠原 骨鈣素 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R318.08;R687
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 引言11-13
• 第1章 實(shí)驗(yàn)研究13-45
• 1.1 材料與方法13-22
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞及材料13-15
• 1.1.2 多孔鉭的理化性質(zhì)15
• 1.1.3 MG63細(xì)胞的體外培養(yǎng)和鑒定15-16
• 1.1.4 缺氧裝置選擇和缺氧濃度的設(shè)定16
• 1.1.5 成骨細(xì)胞常氧及缺氧條件下形態(tài)學(xué)觀察16
• 1.1.6 成骨細(xì)胞常氧及缺氧條件下與多孔鉭支架復(fù)合培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)觀察16-17
• 1.1.7 CCK-8 法檢測(cè)缺氧對(duì)多孔鉭-成骨細(xì)胞復(fù)合物細(xì)胞增殖影響17-18
• 1.1.8 ELISA法檢測(cè)缺氧對(duì)多孔鉭-成骨細(xì)胞復(fù)合物細(xì)胞COL-Ⅰ、OC分泌水平18-19
• 1.1.9 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)缺氧對(duì)多孔鉭-成骨細(xì)胞復(fù)合物細(xì)胞COL-Ⅰ、OC表達(dá)19
• 1.1.10 RT-QPCR檢測(cè)缺氧對(duì)多孔鉭-成骨細(xì)胞復(fù)合物細(xì)胞COL-Ⅰ、OC基因表達(dá)19-22
• 1.2 結(jié)果22-34
• 1.2.1 多孔鉭的制備及理化性質(zhì)22-23
• 1.2.2 成骨細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察及鑒定23-24
• 1.2.3 缺氧條件下多孔鉭對(duì)各組成骨細(xì)胞增殖影響24-27
• 1.2.4 多孔鉭-人成骨細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察27-28
• 1.2.5 ELISA法檢測(cè)缺氧對(duì)多孔鉭-成骨細(xì)胞復(fù)合物細(xì)胞COL-Ⅰ、OCN分泌的影響28-30
• 1.2.6 免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)缺氧對(duì)多孔鉭- 成骨細(xì)胞復(fù)合物細(xì)胞COL-Ⅰ、OC蛋白表達(dá)的影響30-32
• 1.2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)缺氧對(duì)多孔鉭- 成骨細(xì)胞復(fù)合物細(xì)胞COL-Ⅰ、OC基因表達(dá)的影響32-34
• 1.3 討論34-41
• 1.3.1 多孔鉭材料物理特性及種子細(xì)胞的選擇34-36
• 1.3.2 缺氧對(duì)多孔鉭-人成骨細(xì)胞復(fù)合物細(xì)胞增殖、分泌的影響。36-39
• 1.3.3 缺氧對(duì)多孔鉭-成軟骨細(xì)胞復(fù)合物Col-Ⅰ和OC mRNA蛋白及基因表達(dá)的影響39-41
• 1.4 本章小結(jié)41
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 第2章 綜述 缺氧和酸中毒對(duì)成骨細(xì)胞增殖、分化功能的影響研究進(jìn)展45-50
• 2.1 氧分壓和成骨細(xì)胞45-47
• 2.1.1 缺氧的因素45-46
• 2.1.2 缺氧對(duì)成骨細(xì)胞增殖分化的影響46-47
• 2.2 酸堿平衡和成骨細(xì)胞47-48
• 2.2.1 酸中毒的成因47
• 2.2.2 酸中毒對(duì)成骨細(xì)胞增殖分化的影響47-48
• 2.3 總結(jié)與展望48
• 參考文獻(xiàn)48-50
• 結(jié)論50-51
• 致謝51-52
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介52-53
• 作者簡(jiǎn)介53-54
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集54

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

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本文編號(hào)：310953