發(fā)布時(shí)間：2017-04-13 10:39

  本文關(guān)鍵詞：脫細(xì)胞同種異體氣管基質(zhì)衍生材料的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 脫細(xì)胞同種異體氣管基質(zhì)是目前組織工程氣管研究領(lǐng)域的發(fā)展方向。與傳統(tǒng)氣管替代物去抗原處理方法如化學(xué)固定法、深低溫冷藏法和低壓凍干法相比,去污劑-酶聯(lián)合法在去除氣管抗原及保留基質(zhì)生物力學(xué)性能方面更有優(yōu)勢(shì)。氣管基質(zhì)經(jīng)脫細(xì)胞處理后,具有以下特點(diǎn)：(1)氣管基質(zhì)的免疫原性消失或顯著下降,不會(huì)引起免疫排斥反應(yīng)；(2)能夠較好地保留其生物力學(xué)性能；(3)支持上皮細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和單個(gè)核細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖和分化。應(yīng)用脫氧膽酸鈉聯(lián)合酶獲得低免疫原性的脫細(xì)胞氣管基質(zhì),所需時(shí)間長(zhǎng),操作繁瑣,大大增加了基質(zhì)感染的風(fēng)險(xiǎn)。本課題通過(guò)研究不同濃度的TritonX-100(1%、2%、3%、4%)聯(lián)合核酸酶進(jìn)行脫細(xì)胞處理,以及對(duì)脫細(xì)胞氣管基質(zhì)進(jìn)行形態(tài)特征及生物力學(xué)分析和生物相容性評(píng)價(jià),遴選出最佳TritonX-100濃度,為體外構(gòu)建脫細(xì)胞同種異體組織工程氣管提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和技術(shù)可行性。 方法 1.脫細(xì)胞氣管基質(zhì)制備、形態(tài)學(xué)分析與生物力學(xué)檢測(cè)。 1.1兔脫細(xì)胞氣管基質(zhì)制備：新鮮未做任何處理的氣管作為對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組采用不同濃度TritonX-100(1%、2%、3%、4%)聯(lián)合核酸酶脫細(xì)胞法。A組、B組、C組、D組和E組分別代表對(duì)照組,1%、2%、3%、4%Triton脫細(xì)胞組。 1.2形態(tài)學(xué)分析：(1)HE染色；(2)DAPI染色；(3)軟骨細(xì)胞核計(jì)數(shù)；(4)DNA含量測(cè)定；(5)掃描電鏡觀察氣管內(nèi)外表面。 1.3生物力學(xué)：(1)氣管力學(xué)大體形態(tài)；(2)生物力學(xué)檢測(cè)。 2.脫細(xì)胞氣管基質(zhì)生物相容性評(píng)價(jià)。 2.1脫細(xì)胞氣管基質(zhì)植入大鼠體內(nèi),新鮮氣管植入組作為對(duì)照組,2%TritonX-100聯(lián)合核酸酶處理的氣管作為實(shí)驗(yàn)組。手術(shù)操作過(guò)程：①麻醉；②備皮；③消毒鋪單；④切開(kāi)皮膚及皮下組織；⑤植入；⑥縫合。 2.2肉眼及HE染色觀察氣管基質(zhì)的生物相容性。 結(jié)果 1.氣管形態(tài)學(xué)及生物力學(xué)檢測(cè)結(jié)果 1.1氣管大體觀察：A組氣管呈淡紅色,B組、C組、D組和E組氣管基質(zhì)呈白色,各組氣管形態(tài)、大小相似,呈管狀。 1.2HE染色：A組可見(jiàn)大量的氣管黏膜上皮細(xì)胞和軟骨細(xì)胞,B組、C組、D組和E組氣管上皮細(xì)胞消失,軟骨細(xì)胞隨著TritonX-100濃度增加而逐漸減少。A組軟骨細(xì)胞壁完整,B組軟骨細(xì)胞壁部分完整,C組、D組和E組軟骨細(xì)胞壁基本被破壞。 1.3DAPI染色：A組氣管可見(jiàn)氣管上皮細(xì)胞及軟骨細(xì)胞區(qū)域呈大量的藍(lán)色熒光,B組、C組、D組和E組氣管上皮細(xì)胞區(qū)域藍(lán)色熒光消失,軟骨細(xì)胞藍(lán)色熒光區(qū)域隨著TritonX-100濃度增加而減少。 1.4軟骨細(xì)胞核計(jì)數(shù)：A組、B組、C組、D組和E組的氣管軟骨細(xì)胞核數(shù)分別為89±7、74±7、46±6、40±5和32±5。B組、C組、D組和E組與A組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。實(shí)驗(yàn)組中軟骨細(xì)胞核數(shù)目隨著TritonX-100濃度增加而逐漸減少。 1.5DNA含量測(cè)定：A組、B組、C組、D組和E組的DNA含量分別為688.71±52.30、477.64±90.78、185.66±58.14、155.74±37.82和139.24±45.85。B組、C組、D組和E組與A組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。實(shí)驗(yàn)組中DNA含量隨著TritonX-100濃度增加而逐漸減少。 1.6掃描電鏡：A組氣管內(nèi)表面可見(jiàn)大量的氣管黏膜上皮細(xì)胞,表面鋪有纖毛,排列較為規(guī)則。B組和C組氣管內(nèi)表面呈溝槽狀分布,氣管上皮細(xì)胞消失,基底膜未破裂。D組和E組氣管內(nèi)表面氣管上皮細(xì)胞消失,局部氣管基底膜破裂。A組氣管外表面纖維組織致密,B組、C組、D組和E組氣管外表面纖維組織較為疏松。 1.7氣管力學(xué)大體形態(tài)：A組、B組、C組、D組和E組氣管長(zhǎng)度分別為5.05±0.129、5.02±0.168、4.97±0.106、5.03±0.115和4.98±0.112,各組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。A組、B組、C組、D組和E組氣管橫截面橫徑分別為0.72±0.056、0.710±0.073、0.71±0.079、0.72±0.069和0.67±0.033,各組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。A組、B組、C組、D組和E組氣管橫截面縱徑分別為0.61±0.072、0.61±0.095、0.60±0.071、0.58±0.058和0.62±0.053,各組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。A組、B組、C組、D組和E組氣管厚度分別為0.63±0.051、0.58±0.034、0.58±0.024、0.57±0.023和0.53±0.015,D、E組與A組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 1.8生物力學(xué)：A組、B組、C組、D組和E組氣管最大應(yīng)力分別為0.675±0.126、0.677±0.145、0.628±0.105、0.567±0.085和0.482±0.115,只有E組與A組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。A組、B組、C組、D組和E組氣管彈性模量分別為2.418±0.524、2.282±0.434、2.155±0.428、2.153±0.375和1.44±0.231,只有E組與A組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 2.脫細(xì)胞氣管基質(zhì)生物相容性評(píng)價(jià)。 2.1肉眼觀察：對(duì)照組氣管基質(zhì)降解明顯,局部有炎癥反應(yīng),實(shí)驗(yàn)組氣管基質(zhì)軟骨基本存在,生物相容性較好。 2.2HE染色：對(duì)照組可見(jiàn)氣管基質(zhì)基本消失,基質(zhì)周?chē)^多炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。實(shí)驗(yàn)組氣管基質(zhì)較完整,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較少。 結(jié)論 1.本課題采用不同濃度的TritonX-100(1%、2%、3%、4%)聯(lián)合核酸酶進(jìn)行脫細(xì)胞處理,采用HE染色、DAPI染色、軟骨細(xì)胞計(jì)數(shù)、DNA含量測(cè)定、掃描電鏡及生物力學(xué)進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示2%TritonX-100處理的脫細(xì)胞氣管基質(zhì)在形態(tài)學(xué)及生物力學(xué)方面具有明顯優(yōu)勢(shì)。 2.2%TritonX-100處理的脫細(xì)胞氣管植入大鼠體內(nèi),基質(zhì)無(wú)明顯降解,生物相容性良好,適合組織工程氣管的構(gòu)建。
【關(guān)鍵詞】：脫細(xì)胞基質(zhì) 氣管 形態(tài)學(xué) 生物力學(xué) 生物相容性
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R318.08
【目錄】：

• 本課題受以下科研基金資助2-3
• 中文摘要3-6
• ABSTRACT6-11
• 符號(hào)說(shuō)明11-12
• 前言12-13
• 第一部分 脫細(xì)胞氣管基質(zhì)衍生材料制備、形態(tài)學(xué)分析及生物力學(xué)檢測(cè)13-20
• 1.材料和試劑配制13-14
• 2.方法14-17
• 3.結(jié)果17-20
• 第二部分 脫細(xì)胞氣管基質(zhì)衍生材料生物相容性評(píng)價(jià)20-23
• 1.材料和試劑配制20-21
• 2.方法21-22
• 3.結(jié)果22-23
• 討論23-27
• 參考文獻(xiàn)27-31
• 結(jié)論31-32
• 附圖32-36
• 文獻(xiàn)綜述一36-44
• 參考文獻(xiàn)41-44
• 文獻(xiàn)綜述二44-52
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 文獻(xiàn)綜述三52-61
• 參考文獻(xiàn)57-61
• 論著一61-72
• 參考文獻(xiàn)67-69
• 附圖69-72
• 致謝72-73
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄73-75

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 李尚濱;于慶平;張文浩;霍然;;同種異體氣管軟骨脫細(xì)胞基質(zhì)構(gòu)建組織工程化氣管的初步研究[J];中華損傷與修復(fù)雜志(電子版);2009年06期

  本文關(guān)鍵詞：脫細(xì)胞同種異體氣管基質(zhì)衍生材料的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：303393