RANKL/RANK/OPG系統(tǒng)的失衡已被大量文獻(xiàn)證實(shí)與THA術(shù)后無菌性松動(dòng)引起的假體周圍骨溶解密切相關(guān),但感染松動(dòng)引起的假體周圍骨溶解其發(fā)病機(jī)制則鮮見報(bào)道。本研究擬通過檢測(cè)RANKL/RANK/OPG信號(hào)通路在體外細(xì)胞和界膜組織中的表達(dá)情況,探討RANKL/RANK/OPG系統(tǒng)是否與感染松動(dòng)引起假體周圍骨溶解的發(fā)病相關(guān)。第一章RANK在巨噬細(xì)胞中的表達(dá)目的：探討凝血酶和UHMWPE顆粒處理后巨噬細(xì)胞中RANK mRNA的表達(dá)差異。方法：用佛波酯將U937單核細(xì)胞誘導(dǎo)為巨噬細(xì)胞,通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、免疫學(xué)標(biāo)志檢查及體外吞噬功能檢測(cè)等方法鑒定是否成功。將UHMWPE顆粒用球磨機(jī)研磨后進(jìn)行其直徑、性質(zhì)和內(nèi)毒素含量檢測(cè)。將誘導(dǎo)成功的巨噬細(xì)胞分別與凝血酶和制備好的UHMWPE顆粒共同培養(yǎng),MTT法檢測(cè)凝血酶和UHMWPE顆粒對(duì)巨噬細(xì)胞的最佳濃度。將巨噬細(xì)胞分為細(xì)胞+凝血酶組、細(xì)胞+UHMWPE顆粒組和單純細(xì)胞組（對(duì)照組）,實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)RANK mRNA在三種巨噬細(xì)胞中的表達(dá)差異。結(jié)果：U937單核細(xì)胞經(jīng)佛波酯處理后能成功被誘導(dǎo)為巨噬細(xì)胞,具備巨噬細(xì)胞的形態(tài)特征、表達(dá)特異的分化抗原... 

【文章來源】：中南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

不同濃度的UHMWPE顆粒對(duì)巨嘆細(xì)

MTT法測(cè)得各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的細(xì)胞存活率(％)見表1-1、表1-2及圖1-7、圖1-8。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，Img/ml UHMWPE顆粒組巨唾細(xì)胞存活率最低(PcO.Ol)，其他兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〉0.05) ； 50U/ml凝血酶細(xì)胞存活率最高（P<0.05)。因此，本研究在隨后的實(shí)驗(yàn)中選擇0.1 mg/mlUHMWPE顆粒和50 U/ml凝血酶與巨睡細(xì)胞共培養(yǎng)。表1-1不同濃度的UHMWPE顆粒對(duì)巨唆細(xì)胞細(xì)胞活性的影響（i±s)組別 細(xì)胞存活率（％)對(duì)照組 100O.Olmg/ml UHMWPE 85.60±7.920.1 mg/ml UHMWPE 89.22±7.281 mg/ml UHMWPE 62.04士4.20表1-1不同農(nóng)度的凝血酶對(duì)巨銀細(xì)胞細(xì)胞活性的影響（x± S)組別 細(xì)胞存活率（％)對(duì)照組 10010 U/ml 凝血酶 121.12±3.7150 U/ml 凝血酶 127.52±4.02100 u/ml 凝血酶 84.68±3.4015

基因的Ct值，用法進(jìn)行換算后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，得到目的基因的相對(duì)表達(dá)量（RQ值），結(jié)果如圖1-9及表1-3。經(jīng)UHMWPE顆粒處理后的巨噬細(xì)胞，其RANK mRNA表達(dá)水平RQ值(5.46±1.28 )明顯高于凝血酶處理組（1.69±0.40)和對(duì)照組（單純細(xì)胞組）(0.11±0.03)，P<0.01o同時(shí)凝血酶處理組RANK mRNA表達(dá)水平也明顯高于對(duì)照組（PO.Ol)，表明經(jīng)凝血酶、顆粒處理后巨唾細(xì)胞中RANK mRNA特異性高表達(dá)，特別是經(jīng)UHMWPE顆粒處理后的巨隨細(xì)胞。表1-3經(jīng)不同處理后巨嗟細(xì)胞中RANK mRNA的表達(dá)水平組別 RANK mRNA的RQ值凝血酶處理組 1.69±0.40顆粒處理組 5.46±1.28對(duì)照組 0.11±0.0316

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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