本文關(guān)鍵詞：瘦素對兔膝關(guān)節(jié)軟骨損傷修復(fù)的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的通過軟骨細(xì)胞海藻酸鈣支架共培養(yǎng),觀察軟骨細(xì)胞在支架材料上的生物行為。將支架植入兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損模型,定期膝關(guān)節(jié)局部注射10ng/ml的瘦素,觀察、缺損處的修復(fù)狀況,進(jìn)而探討瘦素對兔膝關(guān)節(jié)軟骨損傷是否具有一定的修復(fù)作用。方法1.軟骨細(xì)胞分離與培養(yǎng):2只健康4周齡新西蘭兔膝關(guān)節(jié)軟骨,將軟骨細(xì)胞分離及擴(kuò)增、傳代。光鏡下軟骨細(xì)胞呈星形、多角形,鋪路石樣生長,HE染色觀察軟骨細(xì)胞形態(tài),免疫組化染色觀察Ⅱ型膠原分泌情況。2.海藻酸鈉與氯化鈣混合后得到的三維支架,將傳代的軟骨細(xì)胞培養(yǎng)于其中。顯微鏡下觀察細(xì)胞生長增殖狀況,并做HE染色及免疫組化染色。3.用成年新西蘭大白兔制備兔膝關(guān)節(jié)缺損模型。4.將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為3組:對照組:每5日經(jīng)兔膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射1ml生理氯化鈉;支架組:經(jīng)兔膝關(guān)節(jié)缺損腔內(nèi)植入修整好的含有軟骨細(xì)胞的三維支架,并每5日注射生理氯化鈉1ml;實(shí)驗(yàn)組:三維支架植入后,每5日局部注射1ml的10ng/ml瘦素。實(shí)驗(yàn)中注意隨機(jī)分組,實(shí)驗(yàn)個(gè)體缺損部位相同,分別于術(shù)后12周處死取材,觀察缺損區(qū)軟骨生長修復(fù)情況,并用HE染色、Masson染色、免疫組化染色及PCR定量分析檢驗(yàn)修復(fù)情況。以評價(jià)瘦素對三維支架植入對軟骨缺損的修復(fù)作用。結(jié)果1.分離下來的軟骨細(xì)胞呈圓形或橢圓形,經(jīng)24小時(shí)后逐漸貼壁,72小時(shí)后大部分已經(jīng)貼壁。2.傳代后的軟骨細(xì)胞HE染色鏡下觀察呈三角形、多角形或梭形,細(xì)胞核明顯,呈圓形或橢圓形,HE染色顯示軟骨細(xì)胞形態(tài)良好。免疫組化染色觀察結(jié)果見細(xì)胞及基質(zhì)呈棕黃色,細(xì)胞密集處顏色較深,表現(xiàn)出其特有活性。3.將混懸的軟骨細(xì)胞、海藻酸鈉、氯化鈣混合,制備出了三維支架,支架內(nèi)培養(yǎng)的細(xì)胞未見明顯的凋亡與裂解,且細(xì)胞活性良好,HE及免疫組化檢查結(jié)果說明三維培養(yǎng)的細(xì)胞適合植入。4.植入關(guān)節(jié)腔內(nèi)后,未見明顯炎癥反應(yīng)及免疫排斥反應(yīng),支架軟硬適宜,不會(huì)損傷關(guān)節(jié)軟骨,且后期材料降解完全,無關(guān)節(jié)殘留,表現(xiàn)出良好的組織相容性。5.植入修整后的三維支架并每日注射瘦素,促進(jìn)了Ⅱ型膠原及IGF-1的生成,對缺損處的修復(fù)有明顯促進(jìn)作用。6.實(shí)驗(yàn)組:膝關(guān)節(jié)缺損處表面平整較光滑,與其他兩組相比,PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)檢測IGF-1分泌明顯高于其他兩組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;對照組:缺損處未見明顯修復(fù),膝關(guān)節(jié)粘連、關(guān)節(jié)軟骨破壞較重,可見明顯骨性關(guān)節(jié)炎表現(xiàn);支架組:缺損處軟骨較光滑,但低于實(shí)驗(yàn)組,膝關(guān)節(jié)未見骨性關(guān)節(jié)炎表現(xiàn)。7.組織病理學(xué)檢查顯示,實(shí)驗(yàn)組纖維及瘢痕組織較少,Ⅱ型膠原染色顯示數(shù)量高于其他兩組,HE染色顯示少量成纖維細(xì)胞,核較小,排列相對規(guī)則。對照組纖維組織多,排列紊亂,軟骨細(xì)胞少,核大,排列不規(guī)律。支架組軟骨細(xì)胞細(xì)胞核、成纖維細(xì)胞數(shù)量及結(jié)構(gòu)介于兩者之間。結(jié)論1.藻酸鈣支架與軟骨細(xì)胞共培養(yǎng),軟骨細(xì)胞可以很好的在支架材料的表面和內(nèi)部黏附、生長及增殖,細(xì)胞活性良好,未見明顯細(xì)胞毒性。2.實(shí)驗(yàn)過程中藻酸鈣支架材料在兔體內(nèi)引起的炎癥反應(yīng)輕微,血管化良好,材料降解吸收緩慢,具有良好的組織相容性。3.本實(shí)驗(yàn)條件下10ng/ml的瘦素,可促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖、Ⅱ型膠原及IGF-1的分泌,局部定期注射可促進(jìn)兔膝關(guān)節(jié)軟骨損傷的修復(fù)。
【關(guān)鍵詞】：瘦素 藻酸鈣支架 軟骨細(xì)胞 修復(fù) Ⅱ型膠原 IGF-1
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R687;R318.08
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 引言11-13
• 第1章 軟骨細(xì)胞的獲取與平面培養(yǎng)13-23
• 1.1 前言13
• 1.2 材料與方法13-16
• 1.2.1 主要儀器和實(shí)驗(yàn)試劑13-15
• 1.2.2 實(shí)驗(yàn)步驟15
• 1.2.3 軟骨細(xì)胞HE染色檢查步驟15-16
• 1.2.4 免疫組化染色步驟16
• 1.3 結(jié)果16-18
• 1.3.1 平面培養(yǎng)下軟骨細(xì)胞的形態(tài)觀察16-17
• 1.3.2 軟骨細(xì)胞的HE染色檢查結(jié)果17-18
• 1.3.3 平面培養(yǎng)軟骨細(xì)胞的Ⅱ型膠原免疫組化染色檢查結(jié)果18
• 1.4 討論18-20
• 1.4.1 關(guān)節(jié)軟骨的結(jié)構(gòu)18-19
• 1.4.2 軟骨細(xì)胞和基質(zhì)的作用及其影響因素19-20
• 1.4.3 軟骨細(xì)胞移植的可行性20
• 1.5 本章小結(jié)20-21
• 參考文獻(xiàn)21-23
• 第2章 藻酸鈣支架的制備及細(xì)胞共培養(yǎng)23-29
• 2.1 前言23
• 2.2 材料與方法23-25
• 2.2.1 儀器和實(shí)驗(yàn)試劑23-24
• 2.2.2 藻酸鈣支架的制備24-25
• 2.2.3 支架HE染色步驟25
• 2.2.4 支架免疫組織化學(xué)染色25
• 2.3 結(jié)果25-27
• 2.3.1 藻酸鈣支架穩(wěn)定性觀察25-26
• 2.3.2 三維培養(yǎng)軟骨細(xì)胞的HE染色檢查結(jié)果26-27
• 2.3.3 支架的免疫組織化學(xué)染色檢查結(jié)果27
• 2.4 討論27-28
• 2.4.1 海藻酸鹽的應(yīng)用及其支架內(nèi)的細(xì)胞培養(yǎng)27-28
• 2.5 本章小結(jié)28
• 參考文獻(xiàn)28-29
• 第3章 藻酸鈣支架植入及瘦素對軟骨損傷修復(fù)的作用29-43
• 3.1 前言29
• 3.2 材料與方法29-35
• 3.2.1 主要儀器和實(shí)驗(yàn)試劑29-30
• 3.2.2 兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損模型的制備30-31
• 3.2.3 軟骨組織的HE染色31-32
• 3.2.4 Masson染色32
• 3.2.5 Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色32
• 3.2.6 多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）法測定IGF-1 基因表達(dá)32-34
• 3.2.7 瘦素對兔軟骨損傷修復(fù)實(shí)驗(yàn)流程圖34-35
• 3.3 結(jié)果35-38
• 3.3.1 膝關(guān)節(jié)缺損模型修復(fù)狀況的大體觀察35
• 3.3.2 軟骨缺損處HE染色檢查結(jié)果35-36
• 3.3.3 軟骨缺損處Masson染色檢查結(jié)果36-37
• 3.3.4 軟骨缺損處Ⅱ型膠原免疫組化染色結(jié)果37
• 3.3.5 RT-PCR法檢測IGF-1 基因表達(dá)結(jié)果37-38
• 3.4 討論38-41
• 3.4.1 影響瘦素修復(fù)的關(guān)節(jié)軟骨自身因素38-39
• 3.4.2 瘦素對支架材料修復(fù)作用的影響39-40
• 3.4.3 瘦素對IGF-1 的作用及對修復(fù)的影響40-41
• 3.5 本章小結(jié)41
• 參考文獻(xiàn)41-43
• 第4章 綜述43-55
• 4.1 課題的背景和意義43-44
• 4.2 組織工程學(xué)與支架材料44-45
• 4.3 關(guān)節(jié)軟骨和軟骨下?lián)p傷的自我修復(fù)45-46
• 4.4 瘦素對骨及軟骨的作用46-51
• 4.4.1 瘦素受體46
• 4.4.2 瘦素對骨的影響46-48
• 4.4.3 瘦素對軟骨的影響48-51
• 參考文獻(xiàn)51-55
• 結(jié)論55-56
• 致謝56-57
• 導(dǎo)師簡介57-58
• 作者簡介58-59
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集59

  本文關(guān)鍵詞：瘦素對兔膝關(guān)節(jié)軟骨損傷修復(fù)的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：288623