發(fā)布時(shí)間：2019-05-27 20:02

【摘要】：背景:目前,小鼠神經(jīng)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)技術(shù)已被眾多科研平臺(tái)熟練掌握,但是各科研平臺(tái)在培養(yǎng)腦源性神經(jīng)干細(xì)胞時(shí)所使用的腦組織有很大差異。胎齡14 d(E14)小鼠腦組織被廣泛用于培養(yǎng)胎鼠神經(jīng)干細(xì)胞,而對(duì)于此時(shí)胎鼠不同腦組織中所含神經(jīng)干細(xì)胞的詳細(xì)比例及其間有無(wú)差異,目前研究較少。目的:比較E14小鼠全腦、大腦皮質(zhì)和前腦組織中神經(jīng)干細(xì)胞和神經(jīng)元所占比例及差異,為后期優(yōu)化分離高純度神經(jīng)干細(xì)胞提供直接量化數(shù)據(jù)和前期研究基礎(chǔ)。方法:分離E14小鼠全腦、大腦皮質(zhì)和前腦組織,加入胰酶消化成單細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)3.0-4.0 h,然后通過(guò)細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn),用DAPI標(biāo)記總細(xì)胞,神經(jīng)干細(xì)胞特異性抗原Nestin標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞,神經(jīng)元特異性抗原Tuj1標(biāo)記神經(jīng)元,統(tǒng)計(jì)分析Nestin~+/DAPI和Tuj1~+/DAPI所占比例。另外,通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)E14小鼠全腦、大腦皮質(zhì)和前腦組織中Nestin和Tuj1 mR NA的表達(dá)水平。結(jié)果與結(jié)論:(1)細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示,E14小鼠全腦、大腦皮質(zhì)和前腦組織中均有大量Nestin~+和Tuj1~+細(xì)胞存在;小鼠前腦組織中Nestin~+細(xì)胞所占比例最高,明顯高于全腦(P0.01)和大腦皮質(zhì)(P0.05);而前腦組織中Tuj1~+細(xì)胞比例明顯低于全腦(P0.05)和大腦皮質(zhì)(P0.001)。該結(jié)果表明,與全腦和大腦皮質(zhì)相比,前腦組織中神經(jīng)干細(xì)胞所占比例最高,神經(jīng)元所占比例最低;(2)Real time PCR結(jié)果顯示,E14小鼠前腦組織中Nestin mR NA表達(dá)水平最高,明顯高于全腦組織(P0.05),略高于大腦皮質(zhì)(P0.05),說(shuō)明前腦組織中有較多神經(jīng)干細(xì)胞存在;而Tuj1 mR NA的表達(dá)水平明顯低于全腦組織(P0.05)和大腦皮質(zhì)組織(P0.05),說(shuō)明前腦組織中有較少神經(jīng)元存在;(3)綜合以上結(jié)果,與全腦和大腦皮質(zhì)相比,分離、消化E14小鼠前腦組織所獲得的神經(jīng)干細(xì)胞比例最高,是后期培養(yǎng)優(yōu)質(zhì)神經(jīng)干細(xì)胞的重要前提。
[Abstract]:Background: at present, the in vitro culture technology of mouse neural stem cells has been skillfully mastered by many scientific research platforms, but the brain tissue used by each scientific research platform in the culture of brain-derived neural stem cells is very different. The brain tissue of 14-day-old (E14) mice is widely used to culture fetal rat neural stem cells, but there are few studies on the detailed proportion of neural stem cells in different brain tissues of fetal rats at this time and whether there is any difference between them. Aim: to compare the proportion and difference of neural stem cells and neurons in the whole brain, cerebral cortex and forebrain of E14 mice, and to provide direct quantitative data and preliminary research basis for the optimal isolation of high purity neural stem cells in the later stage. Methods: the whole brain, cerebral cortex and forebrain of E14 mice were isolated and digested into single cells with trypsin. The cells were cultured for 3.0 h and 4.0 h, and then the total cells were labeled with DAPI. Neural stem cell specific antigen Nestin labeled neural stem cell and neuron specific antigen Tuj1 labeled neuron. The proportion of Nestin~ / DAPI and Tuj1~ / DAPI was statistically analyzed. In addition, the expression of Nestin and Tuj1 mR NA in the whole brain, cerebral cortex and forebrain of E14 mice was detected by real-time fluorescence quantitative PCR. Results and conclusion: (1) the results of cellular immunofluorescence showed that there were a large number of Nestin~ and Tuj1~ cells in the whole brain, cerebral cortex and forebrain of E14 mice. The proportion of Nestin~ cells in forebrain tissue of mice was the highest, which was significantly higher than that in whole brain (P 0.01) and cerebral cortex (P 0.05), while the proportion of Tuj1~ cells in forebrain tissue was significantly lower than that in whole brain (P 0.05) and cerebral cortex (P0.001). The results showed that compared with the whole brain and cerebral cortex, the proportion of neural stem cells in forebrain tissue was the highest and the proportion of neurons was the lowest. (2) the results of) Real time PCR showed that the expression level of Nestin mR NA in forebrain tissue of E14 mice was the highest, which was significantly higher than that of whole brain tissue (P 0.05) and slightly higher than that of cerebral cortex (P 0.05), which indicated that there were more neural stem cells in the forebrain tissue of E14 mice. The expression level of Tuj1 mR NA was significantly lower than that of whole brain tissue (P 0.05) and cerebral cortex tissue (P 0.05), indicating that there were fewer neurons in the anterior brain tissue. (3) compared with the whole brain and cerebral cortex, the proportion of neural stem cells obtained by isolating and digesting the anterior brain tissue of E14 mice was the highest, which was an important prerequisite for the later culture of high quality neural stem cells.
【作者單位】： 昆明醫(yī)科大學(xué)分子臨床醫(yī)學(xué)研究院;深圳市寶安區(qū)人民醫(yī)院;澳大利亞莫納什大學(xué)免疫與干細(xì)胞研究中心;
【基金】：云南省高端人才引進(jìn)計(jì)劃(20080A004) 云南省干細(xì)胞和再生醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(2015DG027)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R318

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2486442