本文關(guān)鍵詞：I型膠原的提取及其組裝和表征，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《第三軍醫(yī)大學(xué)》 2003年

細(xì)胞因子在天皰瘡棘層松解和抗體產(chǎn)生中的作用

王鷹  

【摘要】： 目的：天皰瘡是一種自身抗體介導(dǎo)的器官特異性、自身免疫性大皰性皮膚病，以出現(xiàn)針對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞表面橋粒成分的特異性IgG抗體引起棘層細(xì)胞松解為特征。近年研究發(fā)現(xiàn)天皰瘡發(fā)病中同時(shí)存在細(xì)胞免疫和體液免疫紊亂，天皰瘡患者皮損局部細(xì)胞因子水平增高，有明顯的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。B細(xì)胞產(chǎn)生自身抗體需要HLA-II限制性的CD4+T細(xì)胞的輔助，局部浸潤(rùn)細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子表型提示Th2細(xì)胞在天皰瘡發(fā)病中起了重要作用。本實(shí)驗(yàn)借助體外建立的天皰瘡器官模型，選取IL-2、IFN-γ(Th1型細(xì)胞因子)和IL-10(Th2型細(xì)胞因子)作為研究對(duì)象，觀察它們?cè)诩瑢铀山夂虰細(xì)胞抗體產(chǎn)生中的作用，為深入研究細(xì)胞免疫在天皰瘡發(fā)病中的作用及其生物學(xué)治療奠定基礎(chǔ)。 方法：用硫酸銨鹽析沉淀法和DEAE-32纖維素離子交換層析法純化天皰瘡患者血清，得到純化的天皰瘡抗體，加入正常人表皮片培養(yǎng)體系中，，建立天皰瘡體外器官培養(yǎng)模型。在此基礎(chǔ)上，單獨(dú)或共同加入不同濃度的IL-2、IFN-γ、IL-10，取培養(yǎng)24、48、72小時(shí)的皮片，組織病理H.E.染色觀察棘層松解程度；分離正常人PBMC與純化的天皰瘡抗原EC1-2、EC4共同培養(yǎng)，同時(shí)加入不同濃度的IL-2、IFN-γ、IL-10，7天后取培養(yǎng)上清進(jìn)行ELISPOT和間接ELISA法檢測(cè)其中的天皰瘡抗體量。 結(jié)果：1、天皰瘡器官培養(yǎng)模型組織病理可見棘細(xì)胞間隙增寬、表皮內(nèi)裂隙形成、棘層松解和表皮內(nèi)水皰形成等典型的天皰瘡病理改變，隨加入天皰瘡抗體濃度的增加棘層松解的程度也加重；2、IL-2、IFN-γ濃度接近正常體內(nèi)濃度時(shí)引起棘層松解的程度與無(wú)干預(yù)因素時(shí)接近；隨濃度增加、培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)表現(xiàn)出逐漸加強(qiáng)的促進(jìn)棘層松解的作用，與IL-2相比，IFN-γ促進(jìn)棘層松解的作用較輕，出現(xiàn)時(shí)間較晚；IL-10濃度接近正常體內(nèi)濃度時(shí)表皮片棘層松解的程度比無(wú)干預(yù)因素時(shí)輕；隨濃度增加IL-10表現(xiàn)出逐漸加強(qiáng)的抑制棘層松解的作用，這種抑制作用在天皰瘡抗體濃度較高時(shí)有所減弱，隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)仍表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用；3、IL-2和IFN-γ對(duì)促進(jìn)棘層松解沒(méi)有明顯的協(xié)同作用，IL-10能明顯抑制IFN-γ促進(jìn)棘層松解的作用，低濃度的IL-10有協(xié)同IL-2促進(jìn)棘層松解的作用，高濃度的IL-10則表現(xiàn)出明顯抑制IL-2促進(jìn)棘層松解的作用；4、IL-2、IFN-γ、IL-10均有刺激B細(xì)胞產(chǎn)生天皰瘡抗體的能力，IL-2、IL-10表現(xiàn)出隨濃度增加而增強(qiáng)的促進(jìn)B細(xì)胞抗體分泌的作用，IL-10濃度高于一定值后其促進(jìn)作用不再增強(qiáng)，IFN-γ不表現(xiàn)促進(jìn)B細(xì)胞抗體分泌的作用。 WP=8 結(jié)論：1、純化的天皰瘡抗體加入培養(yǎng)的表皮片中，可引起表皮的棘層松解和表皮內(nèi)水皰形成，天皰瘡抗體的濃度和作用時(shí)間與表皮棘層松解的程度成正相關(guān)，體外天皰瘡器官模型可以很好地模擬天皰瘡的病理改變；2、IL-10有隨濃度增加而增強(qiáng)的抑制Pab引起的棘層松解的作用，IL-2和IFN-γ有隨濃度增加而增強(qiáng)的促進(jìn)Pab引起的棘層松解的作用，且IFN-γ的作用受IL-10的抑制，低濃度的IL-10有協(xié)同IL-2促進(jìn)棘層松解的作用，高濃度時(shí)則發(fā)揮抑制作用；3、IL-2和IL-10具有隨濃度增加而增強(qiáng)的促進(jìn)B細(xì)胞抗體產(chǎn)生的作用，但I(xiàn)L-10濃度高于一定值后促進(jìn)作用不再增強(qiáng)，IFN-γ沒(méi)有明顯的促進(jìn)B細(xì)胞分泌IgG的作用；4、天皰瘡是一種Th1/Th2混合失調(diào)性疾病，Th2型細(xì)胞因子在天皰瘡棘層松解和抗體產(chǎn)生中具有重要的調(diào)節(jié)作用，Th2細(xì)胞在天皰瘡發(fā)病早期階段起重要作用。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號(hào)】：R758.6
【目錄】：

英文縮寫注釋3-5

英文摘要5-7

中文摘要7-9

論文正文：細(xì)胞因子在天皰瘡棘層松解和抗體產(chǎn)生中的作用9-53

前言9-10

第一部分 細(xì)胞因子在天皰瘡棘層松解中的作用10-23

材料與方法10-13

結(jié)果13-19

討論19-23

第二部分 細(xì)胞因子在天皰瘡抗體產(chǎn)生中的作用23-35

材料與方法23-27

結(jié)果27-31

討論31-34

結(jié)論34-35

致謝35-36

圖片36-48

參考文獻(xiàn)48-53

文獻(xiàn)綜述天皰瘡發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展53-61

參考文獻(xiàn)58-61

研究生期間發(fā)表論文61

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本文編號(hào)：221461