發(fā)布時間：2017-06-15 17:10

  本文關(guān)鍵詞：藍(lán)藻抗病毒蛋白CVN及衍生物抗甲型流感體內(nèi)外活性的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：甲型流感嚴(yán)重影響著人類的生活生產(chǎn)，每年可引起幾十萬人死亡。目前，臨床使用的抗流感專一性藥物匱乏，并且病毒表面抗原極易漂變和轉(zhuǎn)變，容易引起病毒的耐藥性，因此對抗流感病毒新藥的研發(fā)迫在眉睫。 藍(lán)藻抗病毒蛋白N（CVN）是1997年發(fā)現(xiàn)的具有抑制多種包膜病毒活性的蛋白質(zhì)，對甲型流感的抑制作用也不例外。但是CVN作為原核來源的小分子蛋白質(zhì)，具有許多成藥性的缺陷，為此本課題組最先在E. coli中高效可溶表達(dá)CVN的衍生物L(fēng)CVN和PEG_(20k)-LCVN，希望可以獲得毒性低，活性好，免疫原性小的潛在抗病毒藥物。因此制備后的CVN及衍生物的生物活性評價非常關(guān)鍵，既是對前期工作的反饋也是對后期藥物開發(fā)的指導(dǎo)。 本文從多個水平上評價CVN及衍生物的抗流感活性。分子水平上ELISA和血凝抑制實(shí)驗(yàn)同時說明CVN及衍生物可作用于不同病毒株表面糖蛋白HA，并且具有濃度依賴性。在細(xì)胞水平上，MTT法測定CVN，LCVN和PEG_(20k)-LCVN的細(xì)胞毒性依次降低。在抗病毒活性方面三種藥物均可抑制不同毒株的增殖，其中PEG_(20k)-LCVN抗病毒的選擇性指數(shù)最高。不同時間加藥法說明CVN及其衍生物對病毒有直接滅活作用，干擾病毒的吸附，主要作用于病毒感染早期。雞胚半體內(nèi)和小鼠體內(nèi)抗病毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，CVN及衍生物在活體內(nèi)也有抑制病毒的活性，延長死亡時間，增加死亡保護(hù)率，減弱肺組織病變，降低肺指數(shù)和肺內(nèi)病毒滴度。CVN及衍生物在體內(nèi)外具有良好的抗病毒作用，可作為抗流感病毒潛在藥物深入開發(fā)。
【關(guān)鍵詞】：藍(lán)藻抗病毒蛋白N 甲型流感病毒 聚乙二醇修飾 連接肽 血凝素 雞胚 小鼠
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R373.13
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-5
• 目錄5-7
• 第一章 前言7-18
• 1.1 甲型流感的研究現(xiàn)狀7-9
• 1.1.1 流感簡介7
• 1.1.2 甲型流感的結(jié)構(gòu)、分類與復(fù)制7-9
• 1.2 甲型流感藥物的研究現(xiàn)狀9-13
• 1.2.1 流感疫苗9-10
• 1.2.2 臨床用藥10-11
• 1.2.2.1 M2 離子通道阻滯劑10-11
• 1.2.2.2 NA 抑制劑11
• 1.2.3 基于不同靶點(diǎn)的潛在藥物11-13
• 1.2.3.1 HA 抑制劑11-12
• 1.2.3.2 RNA 聚合酶抑制劑12
• 1.2.3.3 siRNA 藥物12
• 1.2.3.4 唾液酸酶融合蛋白（DAS181）12-13
• 1.3 CVN 的研究現(xiàn)狀13-17
• 1.3.1 CVN 結(jié)構(gòu)13
• 1.3.2 CVN 活性及作用機(jī)理13-15
• 1.3.2.1 抗免疫缺陷病毒(HIV)13-14
• 1.3.2.2 抗埃博拉病毒（Ebola virus）14
• 1.3.2.3 抗流感病毒（Influenza virus）14
• 1.3.2.4 抗丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus，HCV）14
• 1.3.2.5 抗單純皰疹病毒（Herpes simplex virus，HSV）14-15
• 1.3.3 CVN 的制備方法15-17
• 1.3.3.1 原核表達(dá)15
• 1.3.3.2 真核表達(dá)15
• 1.3.3.3 課題組前期制備的 CVN 及衍生物15-17
• 1.4 本課題的研究目的與意義17
• 1.5 技術(shù)路線17-18
• 第二章 材料與方法18-26
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料18-19
• 2.1.1 主要儀器與設(shè)備18
• 2.1.2 病毒，細(xì)胞，雞胚及小鼠18
• 2.1.3 主要試劑與試劑盒18
• 2.1.4 主要試劑配方18-19
• 2.1.5 藥物19
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法19-26
• 2.2.1 ELISA 鑒定 CVN 及衍生物與 HA 蛋白的相互作用19
• 2.2.2 紅細(xì)胞血凝抑制實(shí)驗(yàn)19-20
• 2.2.2.1 測定病毒血凝單位19-20
• 2.2.2.2 鑒定藥物抑制血凝作用20
• 2.2.3 細(xì)胞水平檢測 CVN 及衍生物抗 IAV 的活性20-21
• 2.2.3.1 藥物細(xì)胞毒性測定20
• 2.2.3.2 病毒滴定和測定 EC5020
• 2.2.3.3 免疫熒光觀察藥物抗病毒的作用20-21
• 2.2.3.4 不同加藥方式檢測 CVN, LCVN 抑制流感復(fù)制的階段21
• 2.2.4 CVN 及衍生物抗甲型流感病毒半體內(nèi)雞胚水平的實(shí)驗(yàn)研究21-22
• 2.2.4.1 雞胚培養(yǎng)與病毒接種21-22
• 2.2.4.2 雞胚尿囊液中病毒血凝效價的滴定22
• 2.2.5 CVN 及衍生物在小鼠體內(nèi)抗甲型流感的實(shí)驗(yàn)研究22-26
• 2.2.5.1 流感病毒鼠肺適應(yīng)株的建立22-23
• 2.2.5.2 小鼠死亡率實(shí)驗(yàn)23
• 2.2.5.3 鼠肺組織病毒檢測與病變觀察23-26
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-39
• 3.1 CVN 及衍生物與 HA 蛋白的相互作用26-27
• 3.2 CVN 及衍生物抑制紅細(xì)胞凝集27
• 3.3 細(xì)胞水平上 CVN 及衍生物在 MDCK 抗 IAV 的作用27-30
• 3.3.1 CVN 及衍生物的細(xì)胞毒性27-28
• 3.3.2 CVN 及衍生物對四株流感病毒的半數(shù)有效濃度28-29
• 3.3.3 CVN 及衍生物的抗流感病毒的免疫熒光觀察29-30
• 3.3.4 CVN 及 LCVN 在不同加藥時間對流感病毒增殖的影響30
• 3.4 CVN 及衍生物在雞胚半體內(nèi)中的抗 IAV 活性30-32
• 3.4.1 病毒 EID5030-31
• 3.4.2 加藥后雞胚尿囊中病毒血凝滴度31-32
• 3.5 鼠肺適應(yīng)株及其半數(shù)致死率(LD50)32-33
• 3.5.1 適應(yīng)株的建立32-33
• 3.5.2 傳代株 LD5033
• 3.6 死亡保護(hù)實(shí)驗(yàn)33-36
• 3.6.1 小鼠體重變化33-34
• 3.6.2 CVN 及 LCVN 對感染小鼠死亡保護(hù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果34-36
• 3.7 肺指數(shù)變化36
• 3.8 肺中病毒量檢測36-37
• 3.9 肺組織切片與染色37-39
• 第五章 討論39-43
• 總結(jié)與展望43-44
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 附錄1 碩士期間發(fā)表論文48-49
• 致謝49

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 劉宗濤;于紅;尹延梅;李丹;張文卿;;重組藍(lán)藻抗病毒蛋白N的純化復(fù)性及其抗單純皰疹病毒1型活性的研究[J];中國海洋藥物;2008年03期

2 安立冰;劉宗濤;于紅;;重組藍(lán)藻抗病毒蛋白N抗單純皰疹病毒2型作用的實(shí)驗(yàn)研究[J];社區(qū)醫(yī)學(xué)雜志;2008年13期

  本文關(guān)鍵詞：藍(lán)藻抗病毒蛋白CVN及衍生物抗甲型流感體內(nèi)外活性的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：453020