本文關(guān)鍵詞： 誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞 分化 神經(jīng)干細(xì)胞　出處：《中國病理生理雜志》2015年01期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的:整體比較2種促進(jìn)誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞(induced pluripotent stem cells,i PSC)向神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells,NSC)分化的方法,確定一種穩(wěn)定、高效的獲得NSC的方法,并對NSC進(jìn)行系統(tǒng)鑒定。方法:方法A:SB431542和drosomophorin的濃度均為5μmmol/L,誘導(dǎo)初始密度100%;方法 B:SB431542的濃度為5 mmol/L,drosomophorin的濃度為1 mmol/L,誘導(dǎo)初始密度為40%。比較及鑒定方法:鏡下觀察誘導(dǎo)獲得NSC的狀態(tài);realtime PCR比較神經(jīng)干細(xì)胞相關(guān)基因Pax6、nestin、Sox1、Sox2等表達(dá)量;流式細(xì)胞術(shù)分析誘導(dǎo)第16天Pax6陽性率;免疫熒光定性分析神經(jīng)干細(xì)胞相關(guān)蛋白的表達(dá)及其自發(fā)分化的能力。結(jié)果:方法 A獲得的NSC懸起后成球趨勢明顯,圓形,透明;方法 B誘導(dǎo)獲得NSC形狀不規(guī)則,色灰暗。Real-time PCR結(jié)果證明方法 A誘導(dǎo)獲得的細(xì)胞神經(jīng)干細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)量高于方法 B。流式細(xì)胞術(shù)分析證明第16天,PAX6的陽性率,方法 A高于方法 B。經(jīng)鑒定,方法 A獲得的神經(jīng)干細(xì)胞高表達(dá)Pax6、nestin、Sox2等基因自發(fā)分化30 d,形成明顯的神經(jīng)纖維束,表達(dá)TUJ-1、MAP2及GFAP等神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞的特異性標(biāo)志物。結(jié)論:方法 A整體優(yōu)于方法 B,我們推薦方法 A作為誘導(dǎo)i PSC向神經(jīng)干細(xì)胞分化的方法。
[Abstract]:Objective: to compare two kinds of induced pluripotent stem cells for promoting inducible pluripotent stem cells. The method of differentiation into neural stem cells of neural stem cells was used to determine a stable and efficient method for obtaining NSC. Methods: the concentrations of drosomophorin and A: SB431542 were 5 渭 mol / L, and the initial induction density was 100 渭 mol / L; Methods the concentration of B: SB431542 was 5 mmol / L drosomophorin for 1 mmol/L. The initial density of induction was 40. Comparison and identification methods: the state of NSC was observed under microscope. Realtime PCR was used to compare the expression of neural stem cell related gene Pax6nestinine, Sox1, Sox2 and so on. The positive rate of Pax6 was analyzed by flow cytometry on the 16th day after induction. Results: after suspension of NSC obtained by A, the globular tendency was obvious, round and transparent. Methods the shape of NSC was irregular induced by B. The results of gray and dark. Real-time PCR showed that the expression of neural stem cell related genes induced by method A was higher than that by B. flow cytometry on the 16th day. The positive rate of PAX6 was higher in method A than that in method B. the neural stem cells obtained by method A were highly expressed in Pax6netin Sox2 gene for 30 days. The specific markers of neurons and glial cells, such as TUJ-1MAP2 and GFAP, were expressed in the formation of obvious nerve fiber bundles. Conclusion: method A is superior to method B. We recommend method A as a method to induce I PSC to differentiate into neural stem cells.
【作者單位】： 山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所;濟南大學(xué)-山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院;山東大學(xué)附屬濟南市中心醫(yī)院中心實驗室;山東省移植與組織工程研究中心;
【基金】：973計劃資助項目(No.2012CB966503;No.2012CB966504) 國家青年科學(xué)基金資助項目(No.81200950)
【分類號】：R329
【正文快照】： 神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells,NSC)可用于建立神經(jīng)系統(tǒng)疾病的細(xì)胞模型,因此在神經(jīng)系統(tǒng)疾病的機制及治療的研究中日趨重要[1]。神經(jīng)干細(xì)胞獲得有以下幾個途徑:(1)從流產(chǎn)的胎兒腦組織中分離[2],體外擴增,但該來源有限,且受到倫理約束;(2)人胚胎干細(xì)胞(human embryonic stem cel

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本文編號：1443387