本文關(guān)鍵詞：硫辛酸胺在實驗性蛛網(wǎng)膜下腔出血早期腦損傷中的神經(jīng)保護(hù)作用及相關(guān)機制的實驗研究

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【摘要】：目的:硫辛酸(α-lipoic acid LA)是常見含有巰基的抗氧化劑,其在蛛網(wǎng)膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage SAH)模型中的神經(jīng)保護(hù)作用已經(jīng)被證實。硫辛酸胺(α-lipoic acid-plus LAP)是LA的衍生物,體外實驗中,LAP通過螯合溶酶體內(nèi)鐵抑制細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷這一觀點已經(jīng)證實。由于溶酶體內(nèi)特定的酸性環(huán)境,LAP(PKa=8.0)比LA(PKa=5.4)更容易地進(jìn)入溶酶體內(nèi),且與溶酶體內(nèi)自由鐵反應(yīng),然而LAP的神經(jīng)保護(hù)的機制還未完全闡述。因此,設(shè)計本實驗來評估LA,LAP兩者在SAH后早期腦損傷(early brain injury EBI)中神經(jīng)保護(hù)作用的差異,以及探討LAP產(chǎn)生神經(jīng)保護(hù)作用機制。方法:實驗1:42只健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠隨機分為7組,每組6只,假手術(shù)組,SAH+vehicle組,LA(100 mg/kg)組,LAP(50 mg/kg)組,LAP(100mg/kg)組,LAP(150 mg/kg)組和LAP(200 mg/kg)組。視交叉前池一次注入自體非肝素化動脈血0.3 ml構(gòu)建SAH活體大鼠模型。LA,LAP均通過胃管給藥,首次給藥在注血后的4小時,后連續(xù)三天,每天給藥一次。72小時后大鼠處死冰鹽水灌注取腦,經(jīng)脫水,固定和包埋切片,進(jìn)一步行溶酶體膜蛋白-1(Lysosomal-associated membrane protein-1 LAMP-1)/神經(jīng)元特異性核蛋白(Neuron-specific Nuclear Protein Neu N)和LAMP-1/膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein GFAP)免疫熒光共染來評估SAH后神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)的溶酶體數(shù)量及膜的穩(wěn)定性。實驗2:90只健康成年雄性SD大鼠隨機分為5組,每組18只,假手術(shù)組,SAH+vehicle組,LA(100 mg/kg)組,LAP(100mg/kg)組和LAP(150 mg/kg)組。72小時后灌注取腦,蛋白質(zhì)印跡(western-blot WB)和免疫熒光共染法分析腦組織中的組織蛋白酶B/D(Cathepsin B/D),凋亡蛋白-3(caspase-3),Bax,鐵蛋白(ferritin)和血紅素氧合酶-1(heme Oxygenase-1 HO-1)的表達(dá)情況。腦組織切片鐵染色評估鐵含量,干濕法測定水腫指數(shù),伊文氏藍(lán)(evansblue EB)來評價出血后的血腦屏障(blood brain barrier BBB)的通透性,末端標(biāo)記法(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated d UTP nick end labeling TUNEL)染色測定神經(jīng)細(xì)胞的凋亡,相關(guān)的試劑盒來測定新鮮腦組織中氧化應(yīng)激指標(biāo)。結(jié)果:實驗1:72小時后,通過比較各組之間的熒光強度,得出SAH組中LAMP-1在神經(jīng)元細(xì)胞質(zhì)中的表達(dá)較假手術(shù)組顯著減弱,與LA組相比,LAMP-1在LAP(100mg/kg)組中熒光強度最強;但在星型膠質(zhì)細(xì)胞中,我們發(fā)現(xiàn)假手術(shù)組,SAH組和干預(yù)組之間的熒光強度無明顯差異。因次,我們選擇LAP(100 mg/kg),LAP(150 mg/kg)兩個劑量行第二部分的實驗。實驗2:72小時后,與假手術(shù)組相比,我們觀察到Cathepsin B/D,caspase-3,Bax,ferritin和HO-1在腦組織中表達(dá)水平顯著上調(diào),LA,LAP不僅能顯著抑制上述蛋白的表達(dá),同時大鼠神經(jīng)功能缺陷,腦水腫含量,血腦屏障通透性,鐵沉積,皮層細(xì)胞的凋亡率和氧化應(yīng)激指標(biāo)都得到了明顯的改善,值得注意的是,高劑量LAP神經(jīng)保護(hù)效果最佳。結(jié)論:LAP在實驗性SAH后EBI中可以靶向作用于溶酶體內(nèi)鐵,穩(wěn)定溶酶體膜,抑制Cathepsins的釋放,阻斷Cathepsins介導(dǎo)的凋亡通路發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：硫辛酸胺 蛛網(wǎng)膜下腔出血 組織蛋白酶 溶酶體內(nèi)鐵 溶酶體膜通透性
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R743.35
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-13
• 參考文獻(xiàn)11-13
• 第一部分 硫辛酸胺干預(yù)蛛網(wǎng)膜下腔出血后神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)溶酶體膜穩(wěn)定性的實驗研究513-24
• 材料與方法13-18
• 結(jié)果18-21
• 討論21-22
• 結(jié)論22
• 參考文獻(xiàn)22-24
• 第二部分 硫辛酸胺靶向溶酶體內(nèi)鐵抑制組織蛋白酶介導(dǎo)的凋亡通路在大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后產(chǎn)生神經(jīng)保護(hù)作用機制的實驗研究24-51
• 材料和方法24-31
• 結(jié)果31-43
• 討論43-47
• 總結(jié)47-49
• 參考文獻(xiàn)49-51
• 綜述51-59
• 參考文獻(xiàn)55-59
• 中英文縮略詞表59-60
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文60-61
• 致謝61-62

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 趙旭東;史繼新;;蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣發(fā)病機制及治療的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報;2010年02期

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本文編號：881070