【摘要】：目的:以各級別腦膠質(zhì)瘤組織和U251、U87腦膠質(zhì)瘤細胞株為研究對象,檢測RWDD3(RWD domain containing 3)與miR-375(microRNA-375)在腦膠質(zhì)瘤組織及細胞中的表達及二者的相關(guān)性,進而探討miR-375、RWDD3對腦膠質(zhì)瘤生物學(xué)行為的作用,為腦膠質(zhì)瘤的診斷及防治提供新的思路。方法:1.研究RWDD3在腦膠質(zhì)瘤中的表達及其對腦膠質(zhì)瘤生物學(xué)作用的影響a.采用Western Blot及Real time PCR技術(shù)分別檢測各級別腦膠質(zhì)瘤組織、正常腦組織及U251、U87腦膠質(zhì)瘤細胞株中RWDD3的蛋白及mRNA表達水平;b.在U251、U87腦膠質(zhì)瘤細胞株中轉(zhuǎn)染RWDD3-shRNA,采用Western Blot及Real time PCR技術(shù)分別檢測RWDD3的蛋白及mRNA表達水平;采用CCK-8實驗檢測細胞增殖能力的變化;采用Transwell實驗檢測細胞侵襲能力的變化;采用流式細胞術(shù)檢測細胞周期的改變及細胞凋亡的變化;2.研究miR-375與RWDD3的相關(guān)性及其通過調(diào)控RWDD3影響腦膠質(zhì)瘤生物學(xué)作用a.在U251、U87腦膠質(zhì)瘤細胞株中轉(zhuǎn)染miR-375 mimics,采用Real time PCR技術(shù)檢測miR-375的表達水平;采用Western Blot及Real time PCR技術(shù)分別檢測RWDD3的蛋白及mRNA表達水平;采用CCK-8實驗檢測細胞增殖能力的變化;采用Transwell實驗及細胞劃痕實驗檢測細胞遷移能力的變化;b.在U251、U87腦膠質(zhì)瘤細胞株中共轉(zhuǎn)染pcDNA3.0/RWDD3及miR-375mimics,采用Western Blot及Real time PCR技術(shù)分別檢測RWDD3的蛋白及mRNA表達水平;采用CCK-8實驗檢測細胞增殖能力的變化;采用Transwell實驗及細胞劃痕實驗檢測細胞遷移能力的變化;結(jié)果:1.RWDD3在腦膠質(zhì)瘤中的表達水平及其對腦膠質(zhì)瘤生物學(xué)作用的影響a.RWDD3的蛋白及mRNA表達水平與腦膠質(zhì)瘤級別呈正相關(guān);腦膠質(zhì)瘤U251及U87細胞株較人腦膠質(zhì)細胞株HEB中RWDD3表達增高;b.在腦膠質(zhì)瘤U251及U87細胞株中轉(zhuǎn)染RWDD3-shRNA后,較空白對照組及陰性對照組,RWDD3蛋白及mRNA水平明顯下降;腦膠質(zhì)瘤細胞增殖及侵襲能力均被明顯抑制;凋亡能力則被增強;G0/G1期細胞增多;2.miR-375與RWDD3的相關(guān)性及其通過調(diào)控RWDD3影響腦膠質(zhì)瘤生物學(xué)作用a.在腦膠質(zhì)瘤U251及U87細胞株中轉(zhuǎn)染miR-375 mimics后,較空白對照組及陰性對照組,mi R-375表達水平明顯上調(diào);RWDD3蛋白及mRNA水平明顯下調(diào);腦膠質(zhì)瘤細胞增殖及遷移能力均被抑制;b.在腦膠質(zhì)瘤U251及U87細胞株中共轉(zhuǎn)染pcDNA3.0/RWDD3及miR-375mimics后,較空白對照組及陰性對照組,RWDD3蛋白及mRNA水平明顯上調(diào),腦膠質(zhì)瘤細胞增殖及遷移能力均被增強;結(jié)論:miR-375可通過調(diào)控RWDD3的表達影響膠質(zhì)瘤細胞的增殖及遷移能力。miR-375及RWDD3可為膠質(zhì)瘤的分子靶向治療提供新的思路。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R739.41
【圖文】：

PCR 檢測高、低級別膠質(zhì)瘤及正常腦組織中的 RWe expression level of RWDD3 in gliomas and normal b級別的腦膠質(zhì)瘤組織和 10 例正常腦組織進3 mRNA 表達水平，結(jié)果顯示高級別膠質(zhì)瘤級別膠質(zhì)瘤組織和正常腦組織（*P < 0.05）lot檢測RWDD3在人腦膠質(zhì)瘤組織樣本中

圖 1 Real time-PCR 檢測高、低級別膠質(zhì)瘤及正常腦組織中的 RWDD3 的表達水平Fig .1 The expression level of RWDD3 in gliomas and normal brain tissues對 72 例不同級別的腦膠質(zhì)瘤組織和 10 例正常腦組織進行實時熒光定量PCR 檢測 RWDD3 mRNA 表達水平，結(jié)果顯示高級別膠質(zhì)瘤組織中 RWDD3 表達水平明顯高于低級別膠質(zhì)瘤組織和正常腦組織（*P < 0.05）3.1.2 Western Blot檢測RWDD3在人腦膠質(zhì)瘤組織樣本中蛋白的表達

第 3 章 實驗結(jié)果級別的腦膠質(zhì)瘤組織和 10 例正常腦組織進表達水平，結(jié)果顯示高級別膠質(zhì)瘤組織中 RW瘤組織和正常腦組織（***P < 0.001）PCR檢測RWDD3在腦膠質(zhì)瘤細胞株中m

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 范陽華;祝新根;葉敏華;廖長春;肖兵;汲乾坤;郭華;吳雷;;靶向RWDD3基因shRNA慢病毒載體的構(gòu)建及功能鑒定[J];西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2016年01期

2 范陽華;祝新根;呂世剛;吳淼經(jīng);柴毅;葉敏華;肖兵;吳雷;;慢病毒介導(dǎo)的RWDD3沉默對人膠質(zhì)瘤U251細胞增殖和侵襲的影響[J];中國病理生理雜志;2015年09期

3 范陽華;葉敏華;吳雷;何偉;廖長春;汲乾坤;祝新根;;人腦膠質(zhì)瘤中RSUME的SUMO化與HIF-1α/VEGF通路的相關(guān)性[J];西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2015年04期

本文編號：2762768