發(fā)布時間：2020-06-07 00:43

【摘要】：癲癇是一種神經(jīng)元高度同步化異常放電的腦部疾病,在本團(tuán)隊對慢性癲癇小鼠模型的腦組織外顯子芯片掃描中,意外發(fā)現(xiàn)支架蛋白Frmpd2。支架蛋白Frmpd2含有3個PDZ結(jié)構(gòu)域與1個Ferm結(jié)構(gòu)域,體外研究表明Frmpd2位于上皮細(xì)胞的基底外側(cè)膜區(qū)域,與細(xì)胞間緊密連接密切相關(guān)。但Frmpd2在體內(nèi)的表達(dá)與功能仍未知。在此,我們發(fā)現(xiàn)Frmpd2特異表達(dá)于成年海馬、皮質(zhì)神經(jīng)元的突觸后膜區(qū)域。在顳葉癲癇患者,海人酸、戊四氮點燃的慢性癲癇小鼠模型中,Frmpd2表達(dá)水平顯著升高。海人酸、戊四氮點燃的慢性癲癇小鼠模型的行為學(xué)、場電位數(shù)據(jù)提示,Frmpd2顯著增強癲癇小鼠的發(fā)作易感性,延長發(fā)作時間,增加發(fā)作次數(shù)。另外,Frmpd2顯著增強海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元自發(fā)性動作電位的發(fā)放頻率,并調(diào)控N-methyl-d-aspartic acid谷氨酸受體(NMDAR)的微小興奮性突觸電流(mEPSC)的幅值與頻率。其mEPSC幅值的改變,可能是由于Frmpd2的PDZ2結(jié)構(gòu)域,結(jié)合NMDAR的NR2A亞基胞內(nèi)C端,繼而將NR2A亞基錨定于細(xì)胞質(zhì)膜,促使細(xì)胞質(zhì)膜NR2A亞基增多。同時,其mEPSC頻率的改變,可能是由于Frmpd2的Ferm結(jié)構(gòu)域結(jié)合骨架蛋白F-actin,促使成熟樹突棘數(shù)量增多,并為NMDAR錨定在樹突棘的突觸后區(qū)域提供了形態(tài)基礎(chǔ)。綜上所述,Frmpd2通過其PDZ2結(jié)構(gòu)域,將NMDAR的NR2A亞基錨定于質(zhì)膜,增強突觸NMDAR興奮性傳遞,同時通過其Ferm結(jié)構(gòu)域,促進(jìn)成熟樹突棘數(shù)量增多,最終有效調(diào)控海馬神經(jīng)元的興奮性,增強癲癇易感性。
【圖文】：

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文1.6 數(shù)據(jù)處理用 Quantity One 軟件測定條帶的光密度值（OD），用 Image Pro Plus 6.0 觀察熒光共定位，用 Graphpad Prism6.0 軟件進(jìn)行繪圖。2 結(jié)果2.1 Frmpd2 在全身各組織以及全腦的表達(dá)及分布Frmpd2 主要分布于成年小鼠的腦，眼，肺，睪丸等組織（圖 1.1A），在成年小鼠的全腦各區(qū)域都有表達(dá)，如皮質(zhì)，海馬，小腦等（圖 1.1B,C）。Frmpd2 主要表達(dá)于海馬的 CA1 錐體細(xì)胞層，CA1 區(qū)，齒狀回也可見表達(dá)，另外在側(cè)腦室的室管膜細(xì)胞中也可見 Frmpd2 表達(dá)（圖 1.1C）。

圖 1.3 Frmpd2 在 TLE 患者術(shù)后及癲癇動物模型腦組織中表達(dá)異常Figure 1.3 Frmpd2 expression of brain tissues of TLE patients and epileptic mouse model（A-B）比較對照組腦組織(n=12)與 TLE 患者術(shù)后腦組織(n=20)的 Frmpd2 表達(dá)水平。（C-F）戊四氮（n=10-11）、海人酸（n=8-11）癲癇模型的海馬及顳葉皮質(zhì)中 Frmpd2 表達(dá)水平變化。標(biāo)尺，20μm。*p< 0.05， **p< 0.01。(A-B) Frmpd2 expression of temporal neocortex of TLE patients(n=20) and control patients(n=12)by immunoblot (A) and immunofluorescence staining(B). (C-D) Frmpd2 expression in thehippocampus(C-D) and neocortex(C) in the PTZ kindling mice. n=10-11 in each group(C). (E-F)Frmpd2 expression in the hippocampus(E-F) and neocortex(E) were compared between theKA-treated mice and control mice without SRS. n=8-11 in each group. Bar, 20μm.*p< 0.05, **p<0.01.2.2 慢病毒轉(zhuǎn)染檢測海馬區(qū)給予慢病毒載體注射第 2 周后，免疫熒光結(jié)果顯示，，在海馬 CA1-CA2區(qū)域有 GFP 自發(fā)綠色熒光（圖 1.4A），提示病毒在海馬 CA1-CA2 區(qū)域轉(zhuǎn)染成功。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R742.1

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本文編號：2700538