發(fā)布時(shí)間：2017-10-06 10:32

  本文關(guān)鍵詞：抵抗素對(duì)RAW264.7細(xì)胞NODs-NF-κB信號(hào)通路影響的研究

  更多相關(guān)文章： 抵抗素 NOD樣受體 炎癥 信號(hào)通路

【摘要】：目的：抵抗素是新近發(fā)現(xiàn)的一種新的脂肪細(xì)胞因子,可以促發(fā)胰島素抵抗和介導(dǎo)機(jī)體炎性反應(yīng)。由于尚未在體內(nèi)找到抵抗素的特異性受體,其在體內(nèi)一系列調(diào)節(jié)活動(dòng)的具體機(jī)制目前仍不清楚。NODs (NOD1、NOD2)是天然免疫系統(tǒng)中重要的受體之可以接受內(nèi)源性信號(hào)分子的調(diào)控從而誘導(dǎo)無菌炎癥。然而,NODs是否作為抵抗素的受體發(fā)揮作用,尚未見報(bào)道。因此,本試驗(yàn)期望通過研究抵抗素與NODs受體之間的關(guān)系,探究抵抗素是否通過NODs-NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路發(fā)揮其促炎作用。結(jié)果：(1)用不同濃度(50ng/mL、100 ng/mL、150 ng/mL、200 ng/mL)的抵抗素孵育RAW264.7細(xì)胞,培養(yǎng)至預(yù)定時(shí)間(0h、3h、6h、12h、 24 h)以后,立即收集細(xì)胞提取RNA和蛋白并收集細(xì)胞上清液,檢測(cè)NODs及其信號(hào)通路下游信號(hào)分子RIP2、IKKβ和NF-κB等的基因和蛋白表達(dá)水平,細(xì)胞上清液中TNF-α、IL-6和IL-1β等炎性細(xì)胞因子的含量。結(jié)果顯示,抵抗素可顯著上調(diào)RAW264.7細(xì)胞中NOD2、RIP2和IKKβ的基因表達(dá)水平,而對(duì)NOD1基因的表達(dá)沒有影響。并且,抵抗素顯著上調(diào)NOD2和RIP2蛋白的表達(dá)水平,明顯促進(jìn)NF-κB蛋白向細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移。抵抗素能顯著增加細(xì)胞上清液中’TNF-α、IL-6和IL-1β等炎性細(xì)胞因子的含量。(2)用20nM、50nM、80 nM的NOD2-siRNA轉(zhuǎn)染RAW264.7細(xì)胞,通過檢測(cè)NOD2基因和蛋白的表達(dá)水平,篩選轉(zhuǎn)染條件。結(jié)果顯示,80 nM的NOD2-siRNA致使細(xì)胞內(nèi)NOD2的mRNA水平下降了75%,在蛋白表達(dá)水平降低60%,符合試驗(yàn)預(yù)期。(3)以80 nM的NOD2-siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞,然后加入200 ng/mL的抵抗素孵育細(xì)胞,檢測(cè)NOD2及其下游分子的表達(dá)水平。結(jié)果顯示,NOD2-siRNA+抵抗素組的NOD2和RIP2基因和蛋白的表達(dá)水平相比于抵抗素組顯著降低；而IKKβ基因表達(dá)和NF-κB的核轉(zhuǎn)移過程沒有受到顯著影響。細(xì)胞上清液中TNF-α、IL-6和IL-1β等炎性細(xì)胞因子的含量沒有受到顯著影響。(4)先以25 μmol/L的小白菊內(nèi)酯孵育RAW264.7細(xì)胞1h,然后立即添加200ng/mL的抵抗素繼續(xù)培養(yǎng)24 h,收集細(xì)胞上清液并檢測(cè)IL-6、IL-1β和TNF-α的表達(dá)水平。結(jié)果顯示,IL-6、IL-1β和TNF-a的含量均顯著下降,表明由小白菊內(nèi)酯通過阻斷NF-κB的功能阻止抵抗素引起RAW264.7細(xì)胞炎癥因子如IL-6、IL-1β和TNF-α的釋放。結(jié)論：(1)抵抗素能促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞中NOD2基因和蛋白的表達(dá),而對(duì)NOD1的表達(dá)沒有影響。(2)在RAW264.7細(xì)胞中,抵抗素能通過促進(jìn)NOD2及其下游信號(hào)分子的表達(dá),活化NOD2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,發(fā)揮促炎作用,但NOD2不是抵抗素的受體。(3) NF-κB是RAW264.7細(xì)胞中抵抗素發(fā)揮促炎效應(yīng)的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子。
【關(guān)鍵詞】：抵抗素 NOD樣受體 炎癥 信號(hào)通路
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.1;R589.2
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 縮略詞表9-14
• 第一章 文獻(xiàn)綜述14-27
• 1 抵抗素在代謝與炎癥中的研究進(jìn)展14-22
• 1.1 抵抗素的結(jié)構(gòu)14-15
• 1.2 抵抗素的表達(dá)與調(diào)控15-16
• 1.3 抵抗素與胰島素抵抗、肥胖和2型糖尿病16-18
• 1.3.1 抵抗素介導(dǎo)的胰島素抵抗與糖代謝異常16-17
• 1.3.2 抵抗素介導(dǎo)的胰島素抵抗與脂代謝異常17-18
• 1.4 抵抗素與機(jī)體炎癥反應(yīng)18-19
• 1.4.1 抵抗素與炎癥疾病18
• 1.4.2 抵抗素與TNF-α、IL-6、IL-1β等炎性因子18-19
• 1.5 抵抗素受體及其信號(hào)通路的研究19-22
• 1.5.1 抵抗素與TLR419-20
• 1.5.2 抵抗素與ROR120
• 1.5.3 抵抗素與IGF-1R20-21
• 1.5.4 抵抗素與CAP121
• 1.5.5 抵抗素與Decorin21-22
• 2 NOD1和NOD2在代謝與炎癥中的進(jìn)展22-25
• 2.1 NODs受體的分布23
• 2.2 NODs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)23-24
• 2.3 NODs受體聯(lián)系肥胖、炎癥、胰島素抵抗24-25
• 2.4 NOD1、NOD2與其他疾病25
• 3 研究的目的和意義25-27
• 第二章 抵抗素對(duì)NOD1和NOD2基因表達(dá)的影響27-42
• 1 材料與方法27-35
• 1.1 材料27-28
• 1.1.1 細(xì)胞及主要試劑27-28
• 1.1.2 主要儀器28
• 1.2 試驗(yàn)方法28-35
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)28-29
• 1.2.2 試驗(yàn)分組29
• 1.2.3 試驗(yàn)處理和樣品收集29
• 1.2.4 NOD1、NOD2、RIP2、IKKβ等基因表達(dá)水平的檢測(cè)29-33
• 1.2.5 NOD1、NOD2、RIP2和NF-κB的蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)33-34
• 1.2.6 IL-6、TNF-α和IL-1β等細(xì)胞因子水平的檢測(cè)34
• 1.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析34-35
• 2. 試驗(yàn)結(jié)果35-39
• 2.1 RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果35
• 2.2 RNA電泳結(jié)果35-36
• 2.3 NOD1、NOD2、RIP2及IKKβ mRNA水平檢測(cè)結(jié)果36-38
• 2.3.1 不同濃度抵抗素對(duì)NOD1和NOD2基因表達(dá)水平影響的結(jié)果36-37
• 2.3.2 不同時(shí)間點(diǎn)NOD1、NOD2、RIP2及IKKβ mRNA水平檢測(cè)結(jié)果37-38
• 2.4 NOD1和NOD2蛋白的免疫印跡結(jié)果38-39
• 2.4.1 不同濃度抵抗素作用下NOD1和NOD2蛋白免疫印跡結(jié)果38
• 2.4.2 抵抗素作用不同時(shí)間NOD1、NOD2、RIP2和NF-κB免疫印跡結(jié)果38-39
• 2.5 細(xì)胞上清液IL-6、IL-1β和TNF-α水平的檢測(cè)結(jié)果39
• 3 討論39-40
• 4 小結(jié)40-42
• 第三章 NOD2-siRNA轉(zhuǎn)染條件的篩選42-49
• 1 材料與方法42-44
• 1.1 試驗(yàn)材料42
• 1.2 試驗(yàn)方法42-44
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)42
• 1.2.2 siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞42-43
• 1.2.3 試驗(yàn)分組43
• 1.2.4 篩選方法43
• 1.2.5 熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效果43
• 1.2.6 沉默效率檢測(cè)43-44
• 1.2.7 NOD2基因沉默效果持續(xù)時(shí)間的檢測(cè)44
• 1.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析44
• 2 試驗(yàn)結(jié)果44-47
• 2.1 帶熒光標(biāo)記的siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞觀測(cè)結(jié)果44-45
• 2.2 不同濃度NOD2-siRNA轉(zhuǎn)染下NOD2基因的表達(dá)水平檢測(cè)45-46
• 2.3 不同濃度NOD2-siRNA轉(zhuǎn)染下的NOD2蛋白表達(dá)的檢測(cè)結(jié)果46
• 2.4 NOD2-siRNA沉默效果持續(xù)時(shí)間結(jié)果46-47
• 2.4.1 NOD2基因水平的檢測(cè)結(jié)果46-47
• 2.4.2 NOD2蛋白水平的檢測(cè)結(jié)果47
• 3 討論47-48
• 4 小結(jié)48-49
• 第四章 抵抗素對(duì)NOD2-NF-κB信號(hào)通路的影響49-57
• 1 材料與方法49-51
• 1.1 試驗(yàn)材料49
• 1.2 試驗(yàn)方法49-51
• 1.2.1 NOD2基因沉默后抵抗素對(duì)其下游信號(hào)分子表達(dá)的影響49-50
• 1.2.2 NF-κB核轉(zhuǎn)移在抵抗素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用50-51
• 1.2.3 NOD2、RIP2及IKKβ基因表達(dá)水平的檢測(cè)51
• 1.2.4 NOD2、RIP2和NF-κB蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)51
• 1.2.5 細(xì)胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α水平的檢測(cè)51
• 1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析51
• 2 試驗(yàn)結(jié)果51-54
• 2.1 轉(zhuǎn)染后抵抗素對(duì)NOD2及其下游分子表達(dá)的影響的檢測(cè)結(jié)果51-54
• 2.1.1 轉(zhuǎn)染后抵抗素對(duì)NOD2及其下游分子基因表達(dá)影響的檢測(cè)結(jié)果51-52
• 2.1.2 轉(zhuǎn)染后抵抗素對(duì)NOD2其下游分子蛋白表達(dá)影響的檢測(cè)結(jié)果52-53
• 2.1.3 轉(zhuǎn)染后抵抗素對(duì)IL-6、IL-1β和TNF-α表達(dá)的檢測(cè)結(jié)果53-54
• 2.2 NF-κB核轉(zhuǎn)移在抵抗素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用的研究結(jié)果54
• 3 討論54-56
• 3.1 關(guān)于抵抗素受體及抵抗素對(duì)NOD2-NF-κB信號(hào)通路的影響54-55
• 3.2 NF-κB核轉(zhuǎn)移在抵抗素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用55-56
• 4 小結(jié)56-57
• 結(jié)論57-58
• 參考文獻(xiàn)58-67
• 致謝67-68
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文68

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 郭炫,范桂香,施秉銀,王剛,王林川,羅玉珍,苗艾蓮;2型糖尿病患者抵抗素相關(guān)因素分析及回歸方程的建立[J];檢驗(yàn)醫(yī)學(xué);2005年05期

2 池海誼;馮憑;;抵抗素在肥胖與2型糖尿病間作用的研究現(xiàn)狀[J];內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志;2006年03期

3 李志臻;黎鋒;嚴(yán)勵(lì);李芳萍;李焱;程樺;傅祖植;;抵抗素誘導(dǎo)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞功能異常[J];中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2006年03期

4 成興波;范慶濤;;2型糖尿病合并高血壓患者抵抗素與動(dòng)脈粥樣硬化的相關(guān)性研究[J];標(biāo)記免疫分析與臨床;2006年04期

5 陳亞寧;抵抗素的結(jié)構(gòu)和生理作用的研究情況[J];陜西醫(yī)學(xué)雜志;2002年06期

6 周少玲;抵抗素的研究現(xiàn)狀[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(內(nèi)分泌學(xué)分冊(cè));2003年03期

7 周詠明,張浩;抵抗素基因表達(dá)的調(diào)控及機(jī)制[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).內(nèi)分泌學(xué)分冊(cè);2003年05期

8 李芳萍;抵抗素的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(內(nèi)科學(xué)分冊(cè));2003年03期

9 戴巧定;抵抗素——肥胖和2型糖尿病的共同發(fā)病基礎(chǔ)[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(內(nèi)科學(xué)分冊(cè));2003年07期

10 莊向華,許愛梅,周建博,董硯虎;抵抗素研究新進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(社會(huì)醫(yī)學(xué)分冊(cè));2003年04期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 沈永明;管衛(wèi);;抵抗素與臨床疾病關(guān)系的研究進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

2 毛紅仙;汪大望;鄭景晨;胡素銀;吳俊琪;;血漿抵抗素與2型糖尿病的相關(guān)性研究[A];2005年浙江省內(nèi)分泌學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

3 盛春華;杜珍武;卜麗莎;高申;楊紹娟;張桂珍;;人抵抗素對(duì)脂肪細(xì)胞增殖與分化作用的定量研究[A];第十二屆中國(guó)體視學(xué)與圖像分析學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2008年

4 趙明輝;張春明;王彥;王德芝;韓佩珍;;抵抗素合成肽抗體的制備及其初步應(yīng)用[A];第三屆（2005年）同位素技術(shù)與應(yīng)用學(xué)術(shù)研討會(huì)會(huì)議文集[C];2005年

5 李燕;汪翼;李倩;;抵抗素對(duì)幼年大鼠血管內(nèi)皮分泌功能的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十四次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

6 毛紅仙;汪大望;胡素銀;鄭景晨;吳俊琪;徐瑞龍;;瘦素與抵抗素及2型糖尿病的相關(guān)性分析[A];2005年浙江省內(nèi)分泌學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

7 盛春華;杜珍武;卜麗莎;高中;楊紹娟;張桂珍;;人抵抗素對(duì)肌細(xì)胞胰島素敏感性影響的定量研究[A];第十二屆中國(guó)體視學(xué)與圖像分析學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2008年

8 姜長(zhǎng)濤;李茵;郭玲;張振民;徐國(guó)恒;汪南平;朱毅;王憲;;同型半胱氨酸上調(diào)脂肪組織抵抗素的表達(dá)及其機(jī)制[A];第六屆海峽兩岸心血管科學(xué)研討會(huì)論文摘要集[C];2007年

9 徐永慶;黃友敏;;抵抗素和血栓調(diào)節(jié)蛋白與急性腦梗死的關(guān)系研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2008年

10 魏愛生;麥偉華;葉建紅;劉天;王甫能;陳蘋;郎江明;;2型糖尿病痰(濕)熱互結(jié)證與抵抗素的相關(guān)性研究[A];內(nèi)分泌代謝病中西醫(yī)結(jié)合研究——臨床與基礎(chǔ)[C];2010年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 張濤;糖尿病研究捷報(bào)頻傳[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

2 王艷紅;美發(fā)現(xiàn)與糖尿病和肥胖癥有關(guān)的蛋白質(zhì)[N];中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2001年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 文鳳云;MiRNA調(diào)控抵抗素誘導(dǎo)的胰島素抵抗及脂肪異位沉積作用機(jī)制研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

2 盛春華;人抵抗素體外基因轉(zhuǎn)染對(duì)葡萄糖攝取的影響及其機(jī)制[D];吉林大學(xué);2008年

3 張凌云;2型糖尿病患者抵抗素基因多態(tài)性與非酒精性脂肪肝的關(guān)系[D];山東大學(xué);2012年

4 李燕;抵抗素對(duì)血管內(nèi)皮功能的作用及不同干預(yù)方法保護(hù)內(nèi)皮功能的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2008年

5 徐克群;抵抗素在急性胰腺炎發(fā)病機(jī)制中的作用及羅格列酮防治作用的研究[D];蘇州大學(xué);2009年

6 胡文蘭;抵抗素與炎癥及動(dòng)脈粥樣硬化[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2007年

7 余安;抵抗素對(duì)肝細(xì)胞SIRT1功能調(diào)控研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

8 金正賢;抵抗素基因轉(zhuǎn)染對(duì)轉(zhuǎn)錄因子Sp1及PPARγ mRNA表達(dá)影響的體外研究[D];吉林大學(xué);2008年

9 陳大慶;創(chuàng)傷性腦損傷大鼠RSTN基因表達(dá)特征及RSTN對(duì)創(chuàng)傷后胰島素敏感性的影響作用[D];華中科技大學(xué);2012年

10 姜玲玲;非酒精性脂肪性肝病危險(xiǎn)因素的調(diào)查以及脂肪激素對(duì)疾病發(fā)展作用的研究[D];浙江大學(xué);2006年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 蔡禹希;抵抗素調(diào)控血管內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)葡萄糖和胰島素轉(zhuǎn)運(yùn)的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 劉一炫;抵抗素對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠肥厚心肌腺苷酸活化蛋白激酶信號(hào)通路的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

3 何文慧;脂聯(lián)素、Apelin、抵抗素在子癇前期發(fā)病中的作用及相關(guān)性分析[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

4 張娜;抵抗素通過誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激損傷胰島素信號(hào)通路并促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡[D];遼寧醫(yī)學(xué)院;2015年

5 霍晴;脂聯(lián)素、抵抗素和Apelin在脂肪變肝細(xì)胞中的表達(dá)及意義[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

6 寧俊超;血漿抵抗素與慢性心力衰竭及其相關(guān)因素分析[D];大連醫(yī)科大學(xué);2015年

7 蔣韞;抵抗素誘導(dǎo)小鼠高血壓及其分子機(jī)理的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

8 孫鵬飛;抵抗素樣分子β在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性中的作用[D];山東大學(xué);2016年

9 李強(qiáng);抵抗素調(diào)控血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

10 范國(guó)輝;抵抗素基因rs1862513位點(diǎn)不同基因型下血漿抵抗素水平變化與同期體重、腰圍變化間的關(guān)系研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

，

本文編號(hào)：982322