本文關(guān)鍵詞：Parkin介導(dǎo)的線粒體自噬在棕櫚酸鈉誘導(dǎo)下腎小管損傷中的作用

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【摘要】：目的:探討脂肪酸介導(dǎo)的腎小管損傷的潛在機(jī)制——Parkin介導(dǎo)的線粒體自噬。方法:(1)人體實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)組:早期慢性腎臟病合并高脂血癥患者腎臟標(biāo)本。病理類型:膜性腎病、IgA腎病。對(duì)照組:因外傷手術(shù)需切除部分腎臟(無基礎(chǔ)腎臟疾病及不伴高脂血癥)的患者腎臟組織。腎臟組織中Parkin、Beclin1及LC3蛋白表達(dá)水平采用免疫組化和免疫熒光染色方法。(2)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分配20只雄性SD大鼠為兩組:正常對(duì)照組(n=10),普通飼料喂養(yǎng);高脂組(n=10),高脂飼料喂養(yǎng)。12周后檢測(cè)血清膽固醇、甘油三酯水平。采用免疫組化、免疫熒光及Western blot技術(shù)檢測(cè)Parkin、LC3II/I、Beclin1等蛋白表達(dá)。(3)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)體外培養(yǎng)人腎小管上皮細(xì)胞(human proximal tubular epithelial cell line,HK-2),采用慢病毒GFP-LC3(MOI=60)轉(zhuǎn)染HK-2細(xì)胞,使HK-2細(xì)胞株穩(wěn)定表達(dá)GFP-LC3,用棕櫚酸鈉(一種飽和的脂肪酸)刺激hk-2,采用westernblot及細(xì)胞免疫熒光技術(shù)來檢測(cè)parkin、beclin1及l(fā)c3在hk-2細(xì)胞內(nèi)的表達(dá);采用mdc檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)酸性液泡;采用dcfh-da染色檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ros水平;jc-1技術(shù)用于檢測(cè)hk-2細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位;采用線粒體示蹤劑(mitochondriatracer)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)線粒體形態(tài);采用tunel檢測(cè)凋亡水平。轉(zhuǎn)染si-parkin敲低hk-2細(xì)胞內(nèi)parkin表達(dá),觀察pa處理下hk-2細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位,慢病毒gfp-lc3與線粒體共定位以及細(xì)胞凋亡水平。采用氧自由基清除劑tempol預(yù)處理hk-2,檢測(cè)棕櫚酸鈉處理組或未處理組細(xì)胞內(nèi)凋亡水平。數(shù)據(jù)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,數(shù)據(jù)采用spss21.0軟件處理,兩組資料比較采用t檢驗(yàn),多組資料比較采用單因素方差分析,p值0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:(1)早期慢性腎臟病合并高脂血癥(chronickidneydisease,ckd)患者腎臟parkin、beclin1及l(fā)c3蛋白表達(dá)較因外傷無腎臟基礎(chǔ)疾病無高脂血癥的對(duì)照組患者腎臟中表達(dá)明顯增高。(2)高脂喂養(yǎng)組大鼠腎臟parkin、beclin1及l(fā)c3的表達(dá)較正常飲食組明顯增高(p0.05)。(3)高脂喂養(yǎng)組血清膽固醇、甘油三酯表達(dá)水平較正常飲食組明顯增加(p0.05)。(4)pa誘導(dǎo)下hk-2細(xì)胞內(nèi)parkin、beclin1及l(fā)c3的表達(dá)呈劑量依賴性增加,mdc水平、ros及細(xì)胞凋亡較對(duì)照組明顯增加,線粒體膜電位下降,gfp-lc3和parkin的共定位增加,gfp-lc3和線粒體共定位增加,線粒體和parkin的共定位增加。(5)敲低parkin表達(dá)水平,pa誘導(dǎo)下hk-2細(xì)胞內(nèi)gfp-lc3與線粒體共定位、線粒體膜電位較未敲低組減少,ROS水平及細(xì)胞凋亡較siParkin未轉(zhuǎn)染組明顯增加。(6)采用氧自由基清除劑Tempol抑制細(xì)胞內(nèi)活性氧的堆積,能緩解棕櫚酸鈉誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞的凋亡。結(jié)論:線粒體自噬通過調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激通路,減輕高脂誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：Parkin 線粒體自噬 凋亡 氧化應(yīng)激 棕櫚酸鈉
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R692;R589.2
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照4-5
• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11-13
• 1 材料、試劑和儀器13-16
• 2 實(shí)驗(yàn)方法16-23
• 3 結(jié)果23-32
• 4 討論32-35
• 全文總結(jié)35-36
• 參考文獻(xiàn)36-40
• 文獻(xiàn)綜述40-50
• 參考文獻(xiàn)45-50
• 致謝50-51
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文51

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Jessica A Williams;Sharon Manley;Wen-Xing Ding;;New advances in molecular mechanisms and emerging therapeutic targets in alcoholic liver diseases[J];World Journal of Gastroenterology;2014年36期

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本文編號(hào)：978997