本文關鍵詞：Parkin介導的線粒體自噬在棕櫚酸鈉誘導下腎小管損傷中的作用

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【摘要】：目的:探討脂肪酸介導的腎小管損傷的潛在機制——Parkin介導的線粒體自噬。方法:(1)人體實驗實驗組:早期慢性腎臟病合并高脂血癥患者腎臟標本。病理類型:膜性腎病、IgA腎病。對照組:因外傷手術需切除部分腎臟(無基礎腎臟疾病及不伴高脂血癥)的患者腎臟組織。腎臟組織中Parkin、Beclin1及LC3蛋白表達水平采用免疫組化和免疫熒光染色方法。(2)動物實驗隨機分配20只雄性SD大鼠為兩組:正常對照組(n=10),普通飼料喂養(yǎng);高脂組(n=10),高脂飼料喂養(yǎng)。12周后檢測血清膽固醇、甘油三酯水平。采用免疫組化、免疫熒光及Western blot技術檢測Parkin、LC3II/I、Beclin1等蛋白表達。(3)細胞實驗體外培養(yǎng)人腎小管上皮細胞(human proximal tubular epithelial cell line,HK-2),采用慢病毒GFP-LC3(MOI=60)轉(zhuǎn)染HK-2細胞,使HK-2細胞株穩(wěn)定表達GFP-LC3,用棕櫚酸鈉(一種飽和的脂肪酸)刺激hk-2,采用westernblot及細胞免疫熒光技術來檢測parkin、beclin1及l(fā)c3在hk-2細胞內(nèi)的表達;采用mdc檢測細胞內(nèi)酸性液泡;采用dcfh-da染色檢測細胞內(nèi)ros水平;jc-1技術用于檢測hk-2細胞內(nèi)線粒體膜電位;采用線粒體示蹤劑(mitochondriatracer)檢測細胞內(nèi)線粒體形態(tài);采用tunel檢測凋亡水平。轉(zhuǎn)染si-parkin敲低hk-2細胞內(nèi)parkin表達,觀察pa處理下hk-2細胞內(nèi)線粒體膜電位,慢病毒gfp-lc3與線粒體共定位以及細胞凋亡水平。采用氧自由基清除劑tempol預處理hk-2,檢測棕櫚酸鈉處理組或未處理組細胞內(nèi)凋亡水平。數(shù)據(jù)結(jié)果以均數(shù)±標準差(x±s)表示,數(shù)據(jù)采用spss21.0軟件處理,兩組資料比較采用t檢驗,多組資料比較采用單因素方差分析,p值0.05為差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)果:(1)早期慢性腎臟病合并高脂血癥(chronickidneydisease,ckd)患者腎臟parkin、beclin1及l(fā)c3蛋白表達較因外傷無腎臟基礎疾病無高脂血癥的對照組患者腎臟中表達明顯增高。(2)高脂喂養(yǎng)組大鼠腎臟parkin、beclin1及l(fā)c3的表達較正常飲食組明顯增高(p0.05)。(3)高脂喂養(yǎng)組血清膽固醇、甘油三酯表達水平較正常飲食組明顯增加(p0.05)。(4)pa誘導下hk-2細胞內(nèi)parkin、beclin1及l(fā)c3的表達呈劑量依賴性增加,mdc水平、ros及細胞凋亡較對照組明顯增加,線粒體膜電位下降,gfp-lc3和parkin的共定位增加,gfp-lc3和線粒體共定位增加,線粒體和parkin的共定位增加。(5)敲低parkin表達水平,pa誘導下hk-2細胞內(nèi)gfp-lc3與線粒體共定位、線粒體膜電位較未敲低組減少,ROS水平及細胞凋亡較siParkin未轉(zhuǎn)染組明顯增加。(6)采用氧自由基清除劑Tempol抑制細胞內(nèi)活性氧的堆積,能緩解棕櫚酸鈉誘導的HK-2細胞的凋亡。結(jié)論:線粒體自噬通過調(diào)節(jié)氧化應激通路,減輕高脂誘導的腎小管上皮細胞凋亡。
【關鍵詞】：Parkin 線粒體自噬 凋亡 氧化應激 棕櫚酸鈉
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R692;R589.2
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-5
• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11-13
• 1 材料、試劑和儀器13-16
• 2 實驗方法16-23
• 3 結(jié)果23-32
• 4 討論32-35
• 全文總結(jié)35-36
• 參考文獻36-40
• 文獻綜述40-50
• 參考文獻45-50
• 致謝50-51
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文51

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Jessica A Williams;Sharon Manley;Wen-Xing Ding;;New advances in molecular mechanisms and emerging therapeutic targets in alcoholic liver diseases[J];World Journal of Gastroenterology;2014年36期

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本文編號：978997