本文關(guān)鍵詞：下丘腦背內(nèi)側(cè)核神經(jīng)肽Y對高脂飲食大鼠肝臟胰島素敏感性的影響

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【摘要】：研究背景正常情況下機體通過調(diào)控能量攝入和輸出平衡來維持機體能量穩(wěn)態(tài)。長期能量攝入超出能量輸出將導致過多的能量以脂質(zhì)的形式儲存于脂肪中,最終導致機體肥胖的發(fā)生。我國目前擁有超重者至少2-3億,其中肥胖患者2000-3000萬,這將為我國造成極大的經(jīng)濟社會負擔。因此,能夠提高肥胖及其相關(guān)疾病預防和改進相關(guān)治療措施是目前迫切需要解決的問題之一。中樞系統(tǒng)中的下丘腦在維持能量的平衡起著重要作用。下丘腦的核團有弓狀核(arcuate,ARC)、背內(nèi)側(cè)核(dorsomedial hypothalamus,DMH)、室旁核(paraventricular nucleus,PVN)、下丘腦外部(1ateral hypothalamus,LH)和腹正中核(ventromedial nucleus,VMN),這些不同核團在能量平衡的維持中發(fā)揮著不同的作用。神經(jīng)肽Y(neuropeptide Y,NPY)是下丘腦中所產(chǎn)生的一種重要的促進食欲的肽,在下丘腦中,NPY主要由ARC和DMH表達產(chǎn)生,相關(guān)研究已經(jīng)證明ARC和DMH中的NPY均在控制能量的平衡中發(fā)揮著重要作用,DMH中的NPY不僅能逆轉(zhuǎn)高脂飲食誘導的肥胖的發(fā)生,并且在腹股溝白色脂肪棕色化和維持機體葡萄糖穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮著重要作用。肥胖能引起機體出現(xiàn)高胰島素血癥和外周器官胰島素抵抗的發(fā)生。相關(guān)研究證實下丘腦DMH NPY基因的敲除會改善高脂飲食誘導的肥胖的發(fā)生,但下丘腦DMH NPY是否會通過對肥胖引起肝臟胰島素敏感性的影響來調(diào)節(jié)機體葡萄糖的穩(wěn)態(tài)還不清楚。本文主要研究下丘腦DMH NPY表達下調(diào)對高脂飲食大鼠肝臟胰島素敏感性的影響。通過對DMH NPY的研究或許為未來肥胖新的治療方法提供有力的證據(jù)。目的利用病毒載體建立大鼠下丘腦DMH NPY表達下調(diào)模型,同時應用高脂飼料誘導大鼠產(chǎn)生肥胖;探討下丘腦DMH NPY對高脂飲食大鼠體重、血糖、胰島素水平、甘油三酯、總膽固醇、胰島素抵抗指數(shù)和胰島素敏感指數(shù)的影響及胰島素相關(guān)信號通路中的胰島素受體底物1、磷脂酰肌醇3-激酶、蛋白激酶B、磷酸化的蛋白激酶B和葡萄糖合成激酶3的影響;肝臟蘇木精-伊紅染色法觀察肝臟病理形態(tài)的變化。材料與方法病毒載體由試劑公司合成組裝,AAVsh NPY為攜帶NPY基因表達下調(diào)的病毒載體,AAVsh CTL為攜帶空載體的病毒。根據(jù)Paxinos和Watson的大鼠腦圖譜,確定DMH核團三維坐標,其坐標為:前囟后2.3mm,矢狀縫兩側(cè)0.4mm,顱骨表面下7.6mm。雄性SD大鼠(Sprague Dawley rat)體重為130-160g適應性飼養(yǎng)1周后,隨機分為2組,一組給予雙側(cè)DMH注射AAVsh NPY,另外一組給予雙側(cè)DMH注射AAVsh CTL,注射量為0.5ul每邊(1*109 particles/site),以0.1ul/min的速度注入,5min注射完畢,注入后在原位置停留5min。病毒注入后,給予基礎(chǔ)飼料(normal control diet,NC)喂養(yǎng)4周后每組再隨機分為高脂飼料(high fat diet,HF)組和NC組;實驗期間,各組大鼠均自由攝食及飲水,溫度控制在(22±2)℃,相對濕度為(50±10)%,明暗周期為12h/12h。每天記錄進食量和飲水量,并每周測定大鼠體重。病毒注射1、2周后,分別隨機取AAVsh NPY組大鼠處死5只然后取腦,4周后處死AAVsh CTL和AAVsh NPY各組5只取腦,檢測病毒注入情況;16周末隔夜禁食后稱體重,尾靜脈測血糖,斷頭處死大鼠取血,離心后-20℃保存,迅速分離肝臟組織及鼠腦組織一部分置于液氮保存待測,一部分放于多聚甲醛中以做石蠟包塊。酶聯(lián)免疫吸附測定法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測測定血清胰島素(insulin,INS)、血清總膽固醇(Total cholesterol,TC)和甘油三酯(Triglyceride,TG)的水平,并根據(jù)血糖值和血清INS水平計算胰島素抵抗指數(shù)(Homeostasis model assessment-Insulin resistance,HOMA-IR)(HOMA-IR=空腹血糖(FBG,mmol/L)×空腹血清胰島素(FINS,m U/L)/22.5)和胰島素敏感指數(shù)(Insulin sensitive index,ISI)(ISI=1/(FBG×FINS)),q RT-PCR法檢測肝臟組織胰島素受體底物1(Insulin receptor substrate 1,IRS-1)、磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)的m RNA表達水平,蛋白質(zhì)印跡法(Western blot,WB)檢測胰島素信號通路中蛋白激酶B(Protein kinase B,Akt)、磷酸化的蛋白激酶B(Phosphorylated protein kinase B,p-Akt)和葡萄糖合成激酶3(Glycogen Synthase Kinase3,GSK3)蛋白的表達。肝臟蘇木精-伊紅染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)觀察肝臟病理形態(tài)的改變。結(jié)果1.與NC組比,HF組的GLU值、血清INS、TC、TG水平和HOMA-IR均出現(xiàn)明顯的升高(P0.05),而ISI出現(xiàn)了降低(P0.05),IRS-1和PI3K的m RNA水平在HF組出現(xiàn)了明顯的降低(P0.05),GSK3、p-Akt蛋白表達水平在HF組出現(xiàn)了下降(P0.05);肝臟組織HE染色HF組出現(xiàn)了脂肪變性;而Akt的蛋白表達水平在各組無明顯變化(P0.05)。2.與AAVsh CTL組相比,AAVsh NPY組的GLU值、血清INS、TC、TG水平和HOMA-IR均出現(xiàn)明顯的降低(P0.05),而ISI出現(xiàn)明顯的升高(P0.05),IRS-1和PI3K的m RNA水平在AAVsh NPY組出現(xiàn)了明顯的升高(P0.05),GSK3、p-Akt蛋白表達水平在AAVsh NPY組出現(xiàn)了明顯的升高(P0.05);HE染色AAVsh NPY+HF組肝臟脂肪變性較輕。結(jié)論下丘腦DMH NPY表達下調(diào)可改善高脂喂養(yǎng)大鼠的肝臟胰島素的敏感性,可能涉及PI3K/Akt胰島素信號傳導通路。
【關(guān)鍵詞】：下丘腦DMH 胰島素抵抗 高脂飲食 肝臟 NPY
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R589.2
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 中英文縮略詞12-14
• 引言14-16
• 材料與方法16-31
• 結(jié)果31-42
• 討論42-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻47-50
• 綜述 NPY在能量平衡中的作用的研究進展50-66
• 參考文獻60-66
• 個人簡介和獲獎情況及在校期間發(fā)表的論文66-67
• 致謝67

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本文編號：970516