發(fā)布時(shí)間：2017-10-02 07:23

  本文關(guān)鍵詞：局部分次照射人外周血漿中miRNA表達(dá)水平及其靶基因的分析

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【摘要】：背景在大規(guī)模輻射事故的醫(yī)學(xué)救援中,快速、特異、靈敏、準(zhǔn)確、無(wú)創(chuàng)性地利用生物指標(biāo)分析評(píng)估人員受照劑量,對(duì)于提高救援效率和救治效果有重要意義。目前,得到認(rèn)可和應(yīng)用的生物劑量估算方法主要是以染色體畸變分析為代表的細(xì)胞遺傳學(xué)方法,雖然穩(wěn)定性好,準(zhǔn)確性高,但分析時(shí)間較長(zhǎng),工作量大且繁瑣,影響放射損傷診斷的準(zhǔn)確性和效率。miRNA作為一種基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)因子,不僅可參與輻射誘導(dǎo)DNA損傷的調(diào)節(jié),而且電離輻射可誘導(dǎo)miRNA表達(dá)水平的改變,且具有劑量和時(shí)間依賴關(guān)系,提示miRNA具有成為輻射生物劑量指標(biāo)的可能。同時(shí),輻射可誘導(dǎo)miRNA靶基因蛋白表達(dá)的相應(yīng)變化,說(shuō)明miRNA可能是輻射應(yīng)激反應(yīng)中的中樞調(diào)節(jié)因子。目的研究證明,電離輻射可以引起miR-21、miR-221、miR-210以及miR-150表達(dá)的變化,且具有一定的劑量依賴性,說(shuō)明這些miRNA有可能作為電離輻射生物標(biāo)記物的潛在價(jià)值。以上結(jié)論均由動(dòng)物實(shí)驗(yàn)或體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)在全身照射模式下得出,而大部分核輻射事故為局部非均勻照射,因此,本研究在前期研究的基礎(chǔ)上,用局部照射患者為研究對(duì)象,模擬非均勻或局部輻射受照人員,分析在局部或非均勻照射條件下人血漿中miR-210-3p、miR-221-3p、miR-21-5p以及miR-150-5p的表達(dá)變化,同時(shí)分析其相關(guān)靶基因的表達(dá)變化以及淋巴細(xì)胞周期的變化和凋亡情況,為尋找新的非均勻輻射損傷的早期生物標(biāo)記物進(jìn)行初步探索。方法選取乳腺癌患者13例,放療期間5次采血：放療前(0Gy)、放療后2Gy、10Gy、20Gy、30Gy,治療結(jié)束24h后采血。同時(shí)選取無(wú)腫瘤等惡性疾病的健康女性(10例)為對(duì)照。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR (qRT-PCR)方法定量檢測(cè)所有受檢者血漿miR-210-3p、miR-221-3p、miR-21-5p以及miR-150-5p的表達(dá)水平；對(duì)表達(dá)變化有差異的miRNA進(jìn)行受試者特征曲線(ROC曲線)分析,并計(jì)算曲線下面積(AUC),靈敏度和特異度,利用“尤登指數(shù)”計(jì)算臨界值；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞中miRNA相關(guān)靶基因PTEN、p53在各劑量點(diǎn)的相對(duì)表達(dá);采用流式細(xì)胞術(shù)分析外周血淋巴細(xì)胞的細(xì)胞周期的改變以及凋亡情況。結(jié)果1.乳腺癌患者放療前與健康女性血漿中miR-210-3p、miR-221-3p、miR-21-5p、 miR-150-5p的表達(dá)沒(méi)有顯著性差異(Z=-1.599、1.319、0.857、1.648,p0.05)不同劑量(OGy,2Gy, 10Gy,20Gy,30Gy)照射后miR-210-3p、miR-221-3p、 miR-21-5p的表達(dá)沒(méi)有顯著性差異,miR-150-5p隨著照射劑量的增加,其表達(dá)水平整體呈現(xiàn)顯著下降的趨勢(shì)(x2=18.76,p=0.001),單次照射(2Gy)后與照射前(0Gy)表達(dá)水平稍微升高,但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(Z=-2.929,p0.05),累積照射10Gy、20Gy、30Gy后,表達(dá)水平分別為照射前的0.808(Z=11.23,p0.05)、0.605(Z=18.85,p0.05)、0.565(Z=22.85,p0.05)倍。ROC曲線分析表明,miR-150-5p的表達(dá)改變與照射劑量增加有關(guān),而在人表皮生長(zhǎng)因子受體2(HER2)、雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)的陰性組和陽(yáng)性組中,miR-150-5p表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。2.與放療前相比,不同劑量照射后p53相對(duì)表達(dá)水平并沒(méi)有顯著差異(t=1.198、0.050、1.912、1.770,p0.05),PTEN表達(dá)隨劑量的增加呈輕微下降趨勢(shì),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.514、0.674、0.225、0.997,p0.05)。3.與放療前相比,放療劑量累積20Gy后外周血淋巴細(xì)胞G0/G1期無(wú)明顯變化,G2/M期與S期增加,但差異并沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。與照射前相比,不同劑量照射后外周血淋巴細(xì)胞并沒(méi)有顯著凋亡。結(jié)論1、在本研究所選的4個(gè)miRNA中,電離輻射可誘導(dǎo)miR-150-5p表達(dá)顯著下調(diào),且存在一定的劑量效應(yīng)關(guān)系,可能具有作為非均勻輻射致?lián)p傷早期標(biāo)記物的潛在價(jià)值；2、局部照射條件下,miR-21與miR-221共同的靶基因PTEN表達(dá)小幅度下調(diào),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且個(gè)體差異較大；miR-150的靶基因p53基因蛋白未檢測(cè)到表達(dá)；3、外周血淋巴細(xì)胞G2/M期與S期增加,未發(fā)現(xiàn)淋巴細(xì)胞的凋亡,可能是因?yàn)殡婋x輻射所導(dǎo)致的DNA損傷得到了修復(fù)。
【關(guān)鍵詞】：miRNA 乳腺癌 放射治療 劑量效應(yīng) 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞周期
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R594.8
【目錄】：

• 英文縮略詞表6-7
• 摘要7-10
• ABSTRACT10-13
• 第一章 緒論13-28
• 一、microRNA簡(jiǎn)介13-14
• 二、電離輻射的生物學(xué)效應(yīng)14-15
• 三、miRNA與電離輻射15-26
• 1. 電離輻射誘導(dǎo)miRNA表達(dá)的變化15-19
• 2. miRNA參與輻射后DNA損傷的調(diào)控19-20
• 3. miRNA參與電離輻射誘導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)控20-22
• 4. miRNA參與其他輻射生物學(xué)效應(yīng)22-26
• 四、立題依據(jù)26-28
• 第二章 材料與方法28-36
• 一、試劑、儀器設(shè)備及研究對(duì)象28-31
• 1. 主要試劑28
• 2. 儀器設(shè)備28-29
• 3. 研究對(duì)象29-31
• 二、研究方法31-35
• 1. 血漿中miRNA的測(cè)定31-33
• 2. 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)相關(guān)靶基因33-34
• 3. 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡34
• 4. 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞周期34-35
• 三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析35-36
• 第三章 研究結(jié)果36-44
• 一、乳腺癌放射治療患者血漿中miRNAs的表達(dá)水平的變化36-40
• 1. miRNAs提取效率的評(píng)估36
• 2. 不同劑量照射后miRNAs的差異表達(dá)36-38
• 3. 受試者特征曲線(ROC曲線)分析38-40
• 4. 小結(jié)40
• 二、miRNAs相關(guān)靶基因表達(dá)改變的分析40
• 三、局部照射條件下外周血淋巴細(xì)胞周期的改變及細(xì)胞凋亡40-44
• 1. 局部照射對(duì)外周血淋巴細(xì)胞細(xì)胞周期的影響40-41
• 2. 局部照射對(duì)外周血淋巴細(xì)胞凋亡的影響41-43
• 3. 小結(jié)43-44
• 第四章 討論44-52
• 一、放療患者外周淋巴血血漿中miRNA表達(dá)的變化45-47
• 二、miRNA相關(guān)靶基因表達(dá)變化47-49
• 1. p53表達(dá)變化的分析47-48
• 2. PTEN表達(dá)變化的分析48-49
• 三、局部照射對(duì)外周血淋巴細(xì)胞細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的影響49-50
• 1. 細(xì)胞周期變化的分析49-50
• 2. 細(xì)胞凋亡分析50
• 四、總結(jié)50-52
• 第五章 結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-63
• 致謝63-64
• 作者簡(jiǎn)介64-65
• 知情同意書65-66

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 王瑜;付潔;宋海峰;;輻射相關(guān)microRNA研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通訊;2014年03期

2 孫凱;張曉檳;鄧海軍;鐘育波;雷尚通;區(qū)文_";吳承堂;;X線輻射劑量對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞中microRNA-221和p57~(kip2)表達(dá)的影響[J];腫瘤防治研究;2013年10期

3 狄英波;薛茗方;劉雅娟;孫穎;劉姍姍;張桂英;趙剛;;miR-21在輻射敏感性不同的3種乳腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)差異及意義[J];中國(guó)婦幼保健;2013年09期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 張曉檳;反義microRNA-221對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞放射敏感性的影響及相關(guān)機(jī)制[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：958287