本文關鍵詞：五味子醇甲對高糖誘導的人臍靜脈內(nèi)皮細胞舒張功能障礙的保護作用

  更多相關文章： 人臍靜脈內(nèi)皮細胞 五味子醇甲 RhoA eNOS NO p-MYPT1

【摘要】：目的:體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs),建立高糖損傷模型,用不同濃度的五味子醇甲在高糖刺激前對細胞進行預處理,觀察HUVECs的形態(tài),測定RhoA蛋白活性并檢測內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)的活性及一氧化氮(NO)的分泌水平,探討五味子醇甲對高糖誘導的人臍靜脈內(nèi)皮細胞舒張功能障礙修復的可能機制及其干預作用機制。方法:選取人臍靜脈內(nèi)皮細胞株為研究對象,細胞傳代12h貼壁后,分為5組:1)正常對照組:葡萄糖終濃度為5.5mmol/L;2)高糖組:葡萄糖終濃度為30mmol/L;3)高糖+低劑量五味子醇甲組(5μmol/L);4)高糖+中劑量五味子醇甲組(10μmol/L);5)高糖+高劑量五味子醇甲組(20μmol/L)。藥物在高糖處理前24小時加入培養(yǎng)基對細胞進行預處理,高糖處理48h后收集細胞及上清,光鏡下觀察各組細胞形態(tài)變化;免疫細胞化學檢測磷酸化肌球蛋白磷酸酯酶靶點亞單位1(p-MYPT1)的表達水平;RhoA活性檢測試劑盒測定RhoA活性;一氧化氮合酶(NOS)活性檢測試劑盒測定eNOS活性;硝酸還原法測定NO濃度。結果:1本實驗中GTP-RhoA及p-MYPT1代表了RhoA/Rho激酶被活化。在正常的人臍靜脈內(nèi)皮細胞中,p-MYPT1以基礎水平表達在細胞漿中,經(jīng)過高糖48h刺激后,細胞質(zhì)著染棕黃色,表達信號明顯增強,不同濃度五味子醇甲預處理后,p-MYPT1表達信號逐漸下降至接近正常水平。Western blotting結果顯示:正常對照組可檢測到少量GTP-RhoA,高糖刺激后GTP-RhoA水平較正常對照組增加(P0.01),5μmol/L的五味子醇甲預處理組與高糖組的GTP-RhoA水平無顯著差異(P0.05),而五味子醇甲預處理組(10μmol/L及20μmol/L)顯著減少了GTP-RhoA水平(P0.01),兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),其中20μmol/L的五味子醇甲預處理組與正常組的GTP-RhoA水平無明顯差異(P0.05)。結果表明:高糖可提高HUVECs的RhoA活性及增加p-MYPT1的表達,用一定濃度范圍內(nèi)的五味子醇甲對細胞預處理后,可降低RhoA活性,減少p-MYPT1的表達;2與正常對照組相比,高糖組NO的分泌量及eNOS活性明顯下降,且均有統(tǒng)計學差異(P0.01);5μmol/L五味子醇甲預處理組與高糖組相比較,NO分泌量及eNOS活性均無明顯差別(P0.05);而五味子醇甲預處理組(10μmol/L和20μmol/L)的NO分泌量及eNOS活性較高糖組明顯升高(P0.01),呈藥物濃度依賴性,兩組間差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),此外20μmol/L的五味子醇甲預處理組的NO分泌量及eNOS活性與正常對照組相比,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結果表明:高糖抑制了HUVECs的eNOS活性,減少了NO的分泌,對細胞進行五味子醇甲預處理后,在一定范圍內(nèi)可濃度依賴地提高高糖損傷后細胞的eNOS活性,促進其分泌NO。結論:1高糖所致的內(nèi)皮細胞功能紊亂可能與RhoA/Rho激酶活性升高、eNOS活性降低、NO分泌量減少有關。2五味子醇甲可能通過降低RhoA/Rho激酶系統(tǒng)活性、提高eNOS活性及NO分泌量,緩解高糖誘導的人臍靜脈內(nèi)皮細胞舒張功能障礙,改善內(nèi)皮細胞功能,20μmol/L的五味子醇甲對細胞的保護作用最為明顯。
【關鍵詞】：人臍靜脈內(nèi)皮細胞 五味子醇甲 RhoA eNOS NO p-MYPT1
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R587.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文縮寫9-10
• 前言10-12
• 材料與方法12-19
• 結果19-21
• 附圖21-26
• 附表26-27
• 討論27-30
• 結論30-31
• 參考文獻31-34
• 綜述 血管內(nèi)皮功能紊亂與糖尿病勃起功能障礙34-45
• 參考文獻40-45
• 致謝45-46
• 個人簡歷46

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本文編號：957283