發(fā)布時(shí)間：2017-09-30 16:23

  本文關(guān)鍵詞：沙棘籽蛋白對2型糖尿病模型小鼠體內(nèi)降血糖與炎癥因子的干預(yù)作用

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【摘要】：沙棘(Hippohae rhamnoides L.)是一種天然的藥食同源性植物,屬于胡禿子科(Elaeagnaceae)沙棘屬(Hippophae),沙棘的根、莖、葉、花、果實(shí)均含有豐富的營養(yǎng)和生物活性物質(zhì)。此外,沙棘籽蛋白質(zhì)含量豐富,是一種很好的植物蛋白資源。沙棘資源廣泛分布于歐亞地區(qū),我國是沙棘資源最豐富的國家,主要分布于西南、西北和華北等地。本文以沙棘籽為原料,采用石油醚脫脂、乙醇去黃酮與原花青素,堿提酸沉的方法制備沙棘籽蛋白,同時(shí)研究了沙棘籽蛋白對糖尿病小鼠的降血糖作用、對炎癥因子的干預(yù)作用以及對相關(guān)基因表達(dá)的影響,并對其功效、機(jī)制進(jìn)行了探索,為沙棘籽蛋白產(chǎn)品的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。本研究以沙棘籽為原料制備沙棘籽蛋白,蛋白質(zhì)全自動測定儀測定沙棘籽蛋白含量及其得率。氨基酸全自動分析儀測定沙棘籽蛋白氨基酸成分。利用高脂飲食結(jié)合化學(xué)試劑誘導(dǎo)得到2型糖尿病小鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?以沙棘籽蛋白、沙棘多糖和沙棘原花青素進(jìn)行灌胃處理4周,研究其對糖尿病小鼠體重(BW)、空腹血糖(FBG)、血脂、血清胰島素(SIN)的影響以及對糖尿病小鼠胰島素抵抗的改善作用；用酶聯(lián)免疫雙抗體夾心法檢測小鼠血清C反應(yīng)蛋白(CRP)、腫瘤壞死因子-a (TNF-α)核因子-κB (NF-κB)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)水平,檢測小鼠肝臟AMP激活的蛋白激酶(AMP-activated protein kinase, AMPK)、沉默信息調(diào)節(jié)因子1 (Silent information regulator 1, Sirtl)活性；用半定量RT-PCR (sqRT-PCR)的方法研究沙棘籽蛋白對糖尿病小鼠肝臟葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase, G-6-P),糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β, GSK-3β)、肉堿棕櫚酰基轉(zhuǎn)移酶-1(carnitine palmitoyl transferase 1-α, CPT1-a)、糖原磷酸化酶(glycogen phosphorylase, GP)基因表達(dá)的影響。結(jié)果顯示,采用堿提酸沉的方法制備沙棘籽蛋白的含量為70.1%,總提取率為36.5%,氨基酸種類齊全,必需氨基酸組成比例均勻。動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,沙棘籽蛋白、沙棘多糖和沙棘原花青素處理組小鼠空腹血糖、總甘油三脂(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)均顯著低于模型組(p0.05),高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、胰島素敏感指數(shù)顯著高于模型組(p0.05),血清胰島素水平和胰島素抵抗指數(shù)(IRI)顯著低于模型組(p0.05)；沙棘籽蛋白、沙棘多糖和沙棘原花青素處理組小鼠血清炎癥因子水平均顯著低于模型組(p0.05),小鼠肝臟AMPK、 Sirtl活性均顯著高于模型組(p0.05)。各組小鼠RT-PCR結(jié)果顯示,沙棘籽蛋白、沙棘多糖和沙棘原花青素各劑量組G-6-P, GSK-3β, CPT1-α和GP mRNA表達(dá)水平均低于模型組。本研究結(jié)果表明,沙棘籽蛋白具有降低2型糖尿病小鼠的體重的功效,具有改善小鼠高血脂和高血糖癥狀的功效。Elisa實(shí)驗(yàn)證明,沙棘籽蛋白能夠改善2型糖尿病小鼠胰島素抵抗及炎癥因子水平,提高AMPK、Sirt1活性的功效.sqRT-PCR結(jié)果顯示沙棘籽蛋白能夠抑制G-6-P、GsK-3β、cPT1-α和GP等基因的表達(dá)。其作用機(jī)制可能與增強(qiáng)AMPK、Sirt1活性,抑制G-6-P、GsK-3β、cPT1-α和GP等基因表達(dá)有關(guān)。說明沙棘籽蛋白能夠有效預(yù)防和控制2型糖尿病的發(fā)生。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病 沙棘 降血糖 抗炎
【學(xué)位授予單位】：合肥工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：TS201.21;R587.1
【目錄】：

• 致謝7-8
• 摘要8-10
• ABSTRACT10-17
• 第一章 緒論17-24
• 1.1 糖尿病研究進(jìn)展、現(xiàn)狀、成果17-18
• 1.2 沙棘簡介18-21
• 1.2.1 沙棘籽蛋白簡介及研究進(jìn)展19-20
• 1.2.2 沙棘多糖簡介及研究進(jìn)展20
• 1.2.3 沙棘原花青素簡介及研究進(jìn)展20-21
• 1.3 糖尿病與炎癥反應(yīng)的關(guān)系21
• 1.4 糖尿病與相關(guān)酶活性的關(guān)系21-22
• 1.5 本課題研究的目的及意義22-24
• 第二章 沙棘籽蛋白的制備、含量測定及成分分析24-32
• 2.1 材料與儀器24-25
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料24
• 2.1.2 主要試劑24
• 2.1.3 主要儀器24-25
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法25-28
• 2.2.1 沙棘籽蛋白質(zhì)制備25
• 2.2.2 沙棘籽蛋白含量測定25-26
• 2.2.3 沙棘籽蛋白氨基酸測定方法26-27
• 2.2.4 沙棘籽蛋白黃酮含量測定27
• 2.2.5 沙棘籽蛋白原花青素含量測定27-28
• 2.2.6 結(jié)果處理28
• 2.3 結(jié)果與分析28-30
• 2.3.1 沙棘籽蛋白含量及成品中蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)算與分析28
• 2.3.2 沙棘籽蛋白氨基酸測定結(jié)果28-29
• 2.3.3 沙棘籽蛋白原花青素含量測定29-30
• 2.3.4 沙棘籽蛋白原花青素含量測定30
• 2.4 本章小結(jié)30-32
• 第三章 沙棘籽蛋白對2型糖尿病小鼠胰島素抵抗及血脂的影響32-46
• 3.1 材料與儀器32-33
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)動物與材料32
• 3.1.2 主要試劑32
• 3.1.3 主要儀器32-33
• 3.1.4 實(shí)驗(yàn)器具33
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法33-39
• 3.2.1 2型糖尿病模型的建立33
• 3.2.2 成模小鼠分組及灌胃處理方案33-34
• 3.2.3 小鼠體重和空腹血糖測定34
• 3.2.4 小鼠血清和臟器采集34-35
• 3.2.5 胰島素抵抗相關(guān)指標(biāo)測定35
• 3.2.6 小鼠血脂測定35-39
• 3.2.7 數(shù)據(jù)處理39
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析39-44
• 3.3.1 SSP對糖尿病小鼠體重的影響39-40
• 3.3.2 SSP、SPR、SPO對糖尿病小鼠血糖的影響40-41
• 3.3.3 處理后實(shí)驗(yàn)小鼠胰島素抵抗指標(biāo)41-42
• 3.3.4 SSP、SPR、SPO對糖尿病小鼠臟器指數(shù)的影響42-43
• 3.3.5 SSP、SPR和SPO對糖尿病小鼠血脂水平影響43-44
• 3.4 本章小結(jié)44-46
• 第四章 沙棘籽蛋白對2型糖尿病模型小鼠炎癥因子的干預(yù)作用及相關(guān)基因表達(dá)的影響46-59
• 4.1 材料與儀器46-47
• 4.1.1 材料46
• 4.1.2 主要儀器46
• 4.1.3 主要試劑46-47
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法47-50
• 4.2.1 小鼠血清C反應(yīng)蛋白含量測定47
• 4.2.2 小鼠血清IL-6含量測定47
• 4.2.3 小鼠血清TNF-α含量測定47-48
• 4.2.4 小鼠血清NF-κB含量測定48
• 4.2.5 小鼠肝臟組織AMPK活性測定48
• 4.2.6 小鼠肝臟組織SIRT1活性測定48-49
• 4.2.7 基因引物序列設(shè)計(jì)49
• 4.2.8 肝臟組織總RNA提取49
• 4.2.9 cDNA合成49-50
• 4.2.10 RT-PCR50
• 4.2.11 瓊脂糖凝膠電泳50
• 4.2.12 數(shù)據(jù)處理50
• 4.3 結(jié)果與分析50-57
• 4.3.1 SSP對糖尿病小鼠血清CRP因子水平的影響50-51
• 4.3.2 SSP對糖尿病小鼠血清IL-6因子水平的影響51-52
• 4.3.3 SSP對糖尿病小鼠血清TNF-α因子水平的影響52-53
• 4.3.4 SSP對糖尿病小鼠血清NF-κB因子水平的影響53-54
• 4.3.5 SSP對糖尿病小鼠肝臟組織AMPK水平的影響54-55
• 4.3.6 SSP對糖尿病小鼠肝臟組織SIRT1水平的影響55-56
• 4.3.7 SSP對糖尿病小鼠肝臟相關(guān)基因表達(dá)的影響56-57
• 4.4 本章小結(jié)57-59
• 第五章 結(jié)論與展望59-60
• 5.1 結(jié)論59
• 5.1.1 沙棘籽蛋白的制備方法59
• 5.1.2 SSP降血糖、降血脂及對血清炎癥因子的影響59
• 5.1.3 SSP對糖尿病小鼠肝臟相關(guān)蛋白活性及基因表達(dá)的影響59
• 5.2 展望59-60
• 參考文獻(xiàn)60-67
• 攻讀碩士學(xué)位期間的學(xué)術(shù)活動及成果情況67

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1 張鞍靈,倪榮環(huán);沙棘屬植物化學(xué)與醫(yī)療保健功能[J];西部糧油科技;2001年06期

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1 顧恒;張浩;陳雛;雍正平;;青藏高原沙棘屬藥用植物的品質(zhì)評價(jià)研究[A];第八屆全國藥用植物及植物藥學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2009年

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2 溫江波;青藏高原東緣西藏沙棘、肋果沙棘遺傳多樣性[D];西北師范大學(xué);2010年

3 周香艷;沙棘核DNA含量與雜交種起源的相關(guān)性研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

4 嚴(yán)容;沙棘屬自然雜交種雜交起源及母本來源的分子證據(jù)[D];西北師范大學(xué);2009年

5 張玉娜;沙棘屬植物自然雜交帶的生殖隔離狀況的研究[D];西北師范大學(xué);2009年

6 趙小潔;沙棘屬種群和物種對增強(qiáng)UV-B輻射的光合生理生態(tài)響應(yīng)[D];蘭州大學(xué);2008年

7 陳紋;沙棘屬幾個(gè)中國特有類群的遺傳多樣性研究[D];西北師范大學(xué);2004年

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本文編號：949224