發(fā)布時(shí)間：2017-09-28 17:32

  本文關(guān)鍵詞：GPR124在糖尿病腎病足細(xì)胞損傷中的保護(hù)作用

  更多相關(guān)文章： 糖尿病腎病 足細(xì)胞 GPR124 Hippo信號(hào)通路 自噬

【摘要】：背景：糖尿病腎病(Diabetic Nephropathy, DN)是糖尿病患者最主要的微血管病變之一,并且是導(dǎo)致終末期腎病的主要因素。腎小球足細(xì)胞是一種高度分化、具有獨(dú)特結(jié)構(gòu)和功能的上皮細(xì)胞,是構(gòu)成腎小球?yàn)V過(guò)屏障的關(guān)鍵組成部分。研究表明足細(xì)胞損傷是糖尿病腎病重要的細(xì)胞事件,是導(dǎo)致腎臟損傷的起始因素。多種因素參與了糖尿病腎病足細(xì)胞損傷,包括氧化應(yīng)激、高血糖、脂質(zhì)代謝紊亂及炎性反應(yīng)等,然而針對(duì)目前機(jī)制所采取的治療措施均未能阻滯糖尿病腎病的發(fā)展進(jìn)程,因此進(jìn)一步明確糖尿病腎病足細(xì)胞損傷的的發(fā)病機(jī)制并尋找新的藥物靶點(diǎn)是目前亟待解決的問(wèn)題。G蛋白偶聯(lián)受體(G-protein Coupled Receptor, GPCR)是目前發(fā)現(xiàn)最大的一類受體超家族,其成員超過(guò)1000個(gè)。GPCR在多種重要的生理功能中扮演重要角色,這包括視覺(jué)、味覺(jué)、嗅覺(jué)、情緒的調(diào)控、免疫系統(tǒng)的激活和腫瘤的生長(zhǎng)等。根據(jù)氨基酸序列的同源性和功能差異GPCR可分為以下五大亞家族：Glutamate GPCRs, Rhodopsin GPCRs, Adhesion GPCRs, Frizzled/Taste2 GPCRs, Secretin GPCRs. GPCR是最重要的藥物靶點(diǎn),其功能研究一直是生物學(xué)與藥物研發(fā)的研究熱點(diǎn)。近年來(lái),越來(lái)越多的研究表明多種GPCR在糖尿病腎病發(fā)病過(guò)程中起到關(guān)鍵作用,如血管緊張素Ⅱ受體(ATR)、前列腺素E2 (PGE2)受體(EP)、內(nèi)皮素-1(ET-1)受體(ETAR)及腺苷受體(A2R)等,而相應(yīng)的EP阻滯藥、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、ETAR拮抗劑等均能夠延緩糖尿病腎病的進(jìn)展,因此作用于GPCR的藥物已經(jīng)成為糖尿病腎病的重要治療策略。GPR124是一種孤兒受體,從屬于Adhesion GPCRs亞家族。GPR124包含1331個(gè)氨基酸的開(kāi)放閱讀框,其中僅胞外N末端區(qū)域就占有760個(gè)氨基酸。主要結(jié)構(gòu)包含GPS,HormR, Ig, LRRCT, PDZ, RGD,7TMo目前關(guān)于GPR124的研究大多報(bào)道了其在大腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能。文獻(xiàn)報(bào)道Gpr124的缺失擾亂了TGF-p通路的激活過(guò)程,并且出現(xiàn)了血管內(nèi)皮組織中大量VEGF指示基因表達(dá)上調(diào)；內(nèi)皮中GPR124調(diào)節(jié)血管生成,遷移和血腦屏障標(biāo)記蛋白Glutl的生成,并且推測(cè)Glutl可能為GPR124下游位點(diǎn)；另外,GPR124可作為Wnt7特異性共激活子,在其誘導(dǎo)的經(jīng)典P-catenin通路中起著關(guān)鍵的作用。以上的這些因子均在DN的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。這些實(shí)驗(yàn)研究提示我們GPR124或許參與到糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展。目的：1.研究GPR124在糖尿病腎病足細(xì)胞損傷中的變化及作用。2.檢測(cè)GPR124在其它足細(xì)胞疾病中的表達(dá)變化,明確GPR124是否是足細(xì)胞病的共有靶標(biāo)。方法及結(jié)果：首先對(duì)GPR124在小鼠主要器官,腎臟各細(xì)胞及在不同種屬間的表達(dá)情況進(jìn)行了表征。然后,本文用Western blot, Real time RT-PCR及免疫組織化學(xué)的方法證明了在鏈脲佐菌素(Streptozocin, STZ)誘導(dǎo)的糖尿腎病模型中GPR124表達(dá)下調(diào)。在體外實(shí)驗(yàn)中,本文用高糖(High Glucose, HG)糖基化終末期產(chǎn)物(Advanced Glycation End Products, AGE) 、腫瘤壞死因子(Tumor Necrosis Factor, TNF-a)等體外腎臟疾病環(huán)境下,培養(yǎng)足細(xì)胞同樣發(fā)現(xiàn)GPR124表達(dá)下調(diào)。通過(guò)Cre-LoxP系統(tǒng)建立了足細(xì)胞特異性敲除的小鼠模型,通過(guò)擴(kuò)增基因產(chǎn)物片段大小的差異來(lái)篩選出純合子,并且用免疫熒光的方法證明了模型建立成功。然后我們建立了STZ誘導(dǎo)的DN模型,通過(guò)PAS染色發(fā)現(xiàn)足細(xì)胞特異性敲除GPR124能夠加重腎損傷。為進(jìn)一步明確機(jī)制,我們構(gòu)建了過(guò)表達(dá)GPR124的腺病毒載體,發(fā)現(xiàn)GPR124過(guò)表達(dá)后,在HG狀態(tài)下足細(xì)胞的自噬水平增強(qiáng)。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)GPR124過(guò)表達(dá)在HG狀態(tài)下可下調(diào)YAP的表達(dá)及磷酸化水平,這提示我們GPR124參與到Hippo通路轉(zhuǎn)導(dǎo)中。最后,為表明GPR124的表達(dá)變化與其它足細(xì)胞疾病的關(guān)系,我們通過(guò)免疫組化的方式檢測(cè)了足細(xì)胞疾病中GPR124的表達(dá)情況,同時(shí)我們構(gòu)建了ADR誘導(dǎo)的局灶節(jié)段性腎小球硬化(FSGS)模型,Western blot及Real time RT-PCR的結(jié)果顯示GPR124在FSGS小鼠腎臟組織中表達(dá)降低。與體內(nèi)結(jié)果一致,體外培養(yǎng)的足細(xì)胞在ADR的刺激下,GPR124的表達(dá)下調(diào)。結(jié)論：1.GPR124在DN,FSGS等足細(xì)胞疾病中表達(dá)明顯下調(diào),足細(xì)胞特異性敲除GPR124加重STZ誘導(dǎo)的腎臟損傷,以上結(jié)果表明GPR124的表達(dá)調(diào)控參與到了足細(xì)胞疾病發(fā)生過(guò)程,其表達(dá)下調(diào)是導(dǎo)致足細(xì)胞損傷的重要因素。2.GPR124過(guò)表達(dá)可通過(guò)下調(diào)YAP表達(dá)水平增強(qiáng)自噬功能,進(jìn)一步發(fā)揮對(duì)足細(xì)胞及腎臟的保護(hù)作用,這一結(jié)果提示GPR124是YAP-Autophagy信號(hào)通路的關(guān)鍵組成部分。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病腎病 足細(xì)胞 GPR124 Hippo信號(hào)通路 自噬
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.2
【目錄】：

• 中文摘要7-10
• ABSTRACT10-13
• 符號(hào)說(shuō)明13-15
• 前言15-19
• 實(shí)驗(yàn)材料19-26
• 一、實(shí)驗(yàn)樣本19
• 二、藥品與試劑19-21
• 三、藥品及試劑配制方法21-24
• 四、實(shí)驗(yàn)器材24-26
• 實(shí)驗(yàn)方法26-36
• 一、動(dòng)物模型26-28
• 二、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)28-29
• 三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理29-30
• 四、具體操作步驟30-36
• 第一部分：GPR124在糖尿病腎病模型中的表達(dá)變化及作用36-49
• 一、實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-44
• 二、討論44-48
• 三、結(jié)論48-49
• 第二部分：GPR124在其他足細(xì)胞疾病中的表達(dá)變化49-55
• 一、實(shí)驗(yàn)結(jié)果49-53
• 二、討論53-54
• 三、結(jié)論54-55
• 參考文獻(xiàn)55-60
• 致謝60-61
• 攻讀碩士學(xué)位期間參與發(fā)表的論文、著作61-62
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表62

【相似文獻(xiàn)】

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7 姜e，

本文編號(hào)：937158