發(fā)布時(shí)間：2017-09-26 03:23

  本文關(guān)鍵詞：晚期氧化蛋白產(chǎn)物誘導(dǎo)人角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究

  更多相關(guān)文章： AOPPs 細(xì)胞凋亡 HaCaT細(xì)胞 MAPK 氧化應(yīng)激

【摘要】：研究背景隨著生活水平的提高,糖尿病患者的數(shù)量迅速增長(zhǎng),糖尿病并發(fā)癥嚴(yán)重影響患者生存質(zhì)量。據(jù)調(diào)查,糖尿病患者中糖尿病足發(fā)病率高達(dá)25%,糖尿病足的一個(gè)主要并發(fā)癥即為糖尿病慢性創(chuàng)面。糖尿病慢性創(chuàng)面因其治療時(shí)間長(zhǎng)、治療花費(fèi)高、致殘率高等特點(diǎn)給糖尿病患者帶來(lái)很大困擾。糖尿病慢性創(chuàng)面的發(fā)病機(jī)制一直是相關(guān)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn),研究表明,氧化應(yīng)激在糖尿病患者創(chuàng)面延遲愈合或不愈合的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。氧化應(yīng)激水平升高的典型表現(xiàn)是機(jī)體內(nèi)活性氧自由基(reactive oxygen species, ROS)的增多。細(xì)胞內(nèi)ROS的兩個(gè)主要來(lái)源是NADPH氧化酶(NADPH oxidise, NOX)通路和線粒體呼吸鏈途徑。Claudia A. Benavente在針對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞的研究中發(fā)現(xiàn)經(jīng)NOX通路產(chǎn)生的過(guò)多的ROS可顯著誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。在人體內(nèi),NOX具有NOX1-4等多種亞基,其中,在人角質(zhì)形成細(xì)胞中,NOX4的激活對(duì)ROS的產(chǎn)生起著非常重要的作用。另一方面,細(xì)胞內(nèi)線粒體可以產(chǎn)生大量的ROS,過(guò)量的ROS也會(huì)造成線粒體損傷,這會(huì)導(dǎo)致線粒體膜完整性的破壞以及DNA損傷,進(jìn)而表現(xiàn)為線粒體膜電位(mitochondrial membrane potential, MMP)的下降以及DNA修復(fù)蛋白的表達(dá)升高。線粒體損傷可直接促進(jìn)細(xì)胞凋亡,而ROS也可以直接誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或通過(guò)激活MAP激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)通路誘導(dǎo)凋亡。近年來(lái),有研究指出氧化應(yīng)激水平升高可破壞創(chuàng)面局部微環(huán)境,而這種破壞作用可通過(guò)分布于全身的高濃度氧化應(yīng)激產(chǎn)物來(lái)實(shí)現(xiàn)。在糖尿病患者體內(nèi)已檢測(cè)出多種氧化應(yīng)激產(chǎn)物,其中就包括晚期氧化蛋白產(chǎn)物(advanced oxidation protein products, AOPPs)。已有研究證明,在糖尿病心血管并發(fā)癥、糖尿病視網(wǎng)膜病變、及糖尿病腎病等并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)制中,AOPPs通過(guò)誘導(dǎo)相關(guān)細(xì)胞凋亡參與疾病發(fā)生發(fā)展。Diwesh Chawla及Omur Tabak等研究證實(shí)患有糖尿病微血管并發(fā)癥的患者體內(nèi)的AOPPs水平較正常人高約2倍,較無(wú)并發(fā)癥患者高近1.5倍。但AOPPs與糖尿病慢性創(chuàng)面的關(guān)系還未有報(bào)道。我們前期預(yù)實(shí)驗(yàn)對(duì)慢性創(chuàng)面邊緣皮膚組織的AOPPs水平進(jìn)行了檢測(cè),實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與正常人皮膚組織相比,慢性創(chuàng)面邊緣皮膚組織中AOPPs含量明顯較高,約為正常皮膚組織的2.75倍。我們首次將AOPPs引入糖尿病慢性創(chuàng)面發(fā)病機(jī)制的研究中,為進(jìn)一步探究AOPPs所發(fā)揮的作用,我們選取了參與表皮再生的角質(zhì)形成細(xì)胞作為研究對(duì)象。希望通過(guò)本研究發(fā)現(xiàn)并探索AOPPs對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞的作用及其機(jī)制,從而為后續(xù)研究AOPPs對(duì)創(chuàng)面愈合的作用機(jī)制及其臨床應(yīng)用提供前期基礎(chǔ)。本研究利用人角質(zhì)形成細(xì)胞的替代細(xì)胞——HaCaT細(xì)胞-—進(jìn)行離體實(shí)驗(yàn)。HaCaT細(xì)胞是一種可在體外培養(yǎng)中保持永生化、非腫瘤化的人角質(zhì)形成細(xì)胞系,它完整保留了角質(zhì)形成細(xì)胞的分化能力,并與通過(guò)原代培養(yǎng)的細(xì)胞具有同等特性。這些特點(diǎn)使得它可代替原代培養(yǎng)細(xì)胞被普遍應(yīng)用于相關(guān)研究領(lǐng)域。在此研究中,我們利用體外配制的AOPPs以不同的作用時(shí)間或不同的藥物濃度刺激正常的HaCaT細(xì)胞,檢測(cè)HaCaT細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞凋亡相關(guān)標(biāo)記物的表達(dá),從而探索AOPPs對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞的影響及揭示創(chuàng)面不愈合的潛在反應(yīng)機(jī)制。研究方法1、氧化修飾蛋白AOPP-HSA的制備：PBS溶液溶解人血清白蛋白(Human serum albumin, HSA)配成濃度為20mg/mL的HSA溶液,再將其與40mmol/L的次氯酸鈉溶液等體積混合,室溫放置30min進(jìn)行反應(yīng)。將制備好的AOPP-HSA放入透析袋中,浸沒(méi)于PBS溶液中,4℃下透析24h,除去游離的次氯酸鈉。透析后的AOPP-HSA用微孔濾膜(孔徑0.22μm)過(guò)濾除菌后,再用Detoxi-Gel內(nèi)毒素去除膠過(guò)濾除去內(nèi)毒素。將制備好的AOPP-HSA放入-80℃冰箱保存。以氯氨T為標(biāo)準(zhǔn)品,在酸性條件下,測(cè)340nm的OD值(光吸收度),用以檢測(cè)配制AOPP-HSA中AOPPs的含量。用BCA試劑盒測(cè)AOPP-HSA蛋白濃度。2、 HaCaT細(xì)胞的培養(yǎng)：細(xì)胞購(gòu)自中科院上海細(xì)胞庫(kù),胰蛋白酶消化游離HaCaT細(xì)胞。培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入適量DMEM高糖完全培養(yǎng)基(糖濃度4.5g/L,含10%胎牛血清及1%青/鏈霉素雙抗),將HaCaT細(xì)胞傳代培養(yǎng),在37℃、含5%C02的細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)。顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,每2-3天更新一次培養(yǎng)液,當(dāng)細(xì)胞濃度達(dá)到90%時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。3、細(xì)胞活性的測(cè)定：用MTT [Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽]法測(cè)定AOPP-HSA作用后HaCaT細(xì)胞活性。將HaCaT細(xì)胞接種于96孔板內(nèi),分別用50、100、200、400μg/ml的AOPP-HSA或未經(jīng)修飾的HSA或DMEM高糖完全培養(yǎng)基200μL培養(yǎng)24h。更換新鮮培養(yǎng)基后,加入10%5mg/mL MTT溶液(溶劑為DMEM完全培養(yǎng)基)培養(yǎng)4h。棄去孔內(nèi)液體,每孔加入150uL DMSO,振蕩溶解甲瓚(MTT結(jié)晶物),檢測(cè)測(cè)樣品在490nm的OD值,以測(cè)定樣品中活細(xì)胞含量。4、 FACS法檢測(cè)細(xì)胞凋亡：將HaCaT細(xì)胞以80%的濃度接種于六孔板中,用50、100、200μg/mL的AOPP-HSA、200μg/mL未經(jīng)修飾的HSA或DMEM完全培養(yǎng)基培養(yǎng)24h；另用1000μg/mL的AOPP-HSA培養(yǎng)0、15min、30min、45min、1h、2h、6h、12h或24h。利用Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒,將處理好的細(xì)胞分別重懸于500μL Binding Bufffer中,加入5μL Annexin V-FITC及3μL PI,避光反應(yīng)10min,用FACSCanto II流式細(xì)胞儀進(jìn)行FL-1 (Annexin V-FITC)及FL-3 (PI)通道的細(xì)胞凋亡檢測(cè)。5、線粒體膜電位的檢測(cè)：用JC-1 (5,5',6,6'-tetrachloro-1,1',3,3'-tetraethylbenzimidazol-carbocyanine iodide)染色法檢測(cè)AOPPs作用后HaCaT細(xì)胞線粒體膜電位(mitochondrial membrane potential, MMP, △ψm)的變化。將HaCaT細(xì)胞接種于共聚焦培養(yǎng)皿中,用50、100、200μg/mL的AOPP-HSA、200μg/mL未經(jīng)修飾的HSA或DMEM完全培養(yǎng)基細(xì)胞培養(yǎng)24h。在每個(gè)皿中加入5μg/mL的JC-1染料,37℃培養(yǎng)20min,用PBS溶液潤(rùn)洗細(xì)胞,去除游離JC-1染料。用Olympus FluoView FV10i共聚焦激光掃描顯微鏡觀察HaCaT細(xì)胞,檢測(cè)藥物處理后細(xì)胞MMP變化。6、活性氧ROS的測(cè)定：用DCFH-DA熒光探針(二氯熒光黃雙乙酸鹽,2',7'-dichloro-fluorescin diacetate)測(cè)定細(xì)胞內(nèi)活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。將HaCaT細(xì)胞接種于96孔板中,用10μmol/L的DCFH-DA探針(溶劑為DMEM不完全培養(yǎng)基)避光孵育30min,潤(rùn)洗細(xì)胞去除未結(jié)合探針,用50、100、200μg/mL的AOPP-HSA、200μg/mL未經(jīng)修飾的HSA或DMEM完全培養(yǎng)基刺激2h,另用200μg/mL的AOPP-HSA刺激5min、15min、30min、45min、60min、120min,潤(rùn)洗細(xì)胞,用酶標(biāo)儀檢測(cè)熒光強(qiáng)度(激發(fā)波長(zhǎng)488nm,發(fā)射波長(zhǎng)525nm)。再將HaCaT細(xì)胞接種于共聚焦皿中,用10μM的DCFH-DA探針避光孵育20min,潤(rùn)洗細(xì)胞去除未結(jié)合探針,用50、100、200、μg/mL的AOPP-HSA、200μg/mL未經(jīng)修飾的HSA或DMEM完全培養(yǎng)基刺激2h,潤(rùn)洗細(xì)胞,用Olympus FluoView FV10i共聚焦激光掃描顯微鏡觀察熒光強(qiáng)度變化。7、Western blot檢測(cè)目的蛋白表達(dá)：RIPA細(xì)胞裂解液處理并收集HaCaT細(xì)胞,低溫高速離心提取細(xì)胞蛋白,與SDS上樣緩沖液充分混合。用聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)方法,以12%濃度凝膠電泳分離蛋白樣品,再將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上。用一抗及二抗孵育后,用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)蛋白條帶發(fā)光強(qiáng)度。所用的抗體如下：兔抗NOX4單克隆抗體,兔抗GADPH、PARP、Bcl-2、Bax、caspase3、cleaved caspase3、cleaved caspase9、 p38、p-p38、ERK1/2、p-ERK1/2多克隆抗體,小鼠抗caspase9多克隆抗體,羊抗小鼠HRP(辣根過(guò)氧化物酶)抗體,羊抗兔HRP抗體。8、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：所有實(shí)驗(yàn)均至少重復(fù)3次,每個(gè)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。多個(gè)樣本均數(shù)的比較采用One-Way ANOVA(單項(xiàng)方差分析)方法,在做兩兩比較時(shí)采用Bonferroni's法。P0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有統(tǒng)計(jì)結(jié)果應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 13.0完成。研究結(jié)果：1、 AOPPs誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞凋亡MTT細(xì)胞活性檢測(cè)結(jié)果示,在400 μg/mL AOPP-HSA作用下HaCaT細(xì)胞存活率在46.72±0.64%,而0-200 μg/mL AOPP-HSA作用下HaCaT細(xì)胞存活率大于85%。因此,為探究AOPPs對(duì)HaCaT細(xì)胞凋亡的影響,實(shí)驗(yàn)采用50,100及200 μg/mL濃度的AOPP-HSA對(duì)細(xì)胞刺激24h或用100μg/mL AOPP-HSA刺激細(xì)胞0、15min、30min、45min、1h、2h、6h、12h及24h,并用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果示,NC組(DMEM完全培養(yǎng)基處理組,下同)HaCaT細(xì)胞凋亡率為2.70±0.12%,HSA組(未修飾的HSA處理組,下同)HaCaT細(xì)胞凋亡率為2.45±0.47%,50ug/mL AOPP-HSA組HaCaT細(xì)胞凋亡率為18.59±3.52%,100μg/mL AOPP-HSA組HaCaT細(xì)胞凋亡率為20.81±3.14%,200μg/mLAOPP-HSA組HaCaT細(xì)胞凋亡率為22.92±4.14%。與未修飾的HSA及DMEM完全培養(yǎng)基相比,AOPP-HSA可顯著誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞凋亡(P0.05),且隨AOPP-HSA作用濃度的升高,凋亡率升高(P0.05)；100μg/mL AOPP-HSA作用于HaCaT細(xì)胞后,12h及24h細(xì)胞凋亡率顯著升高(P0.05),且24h凋亡率(11.77±3.80%)高于12h凋亡率(20.88±2.93%)。2、 AOPPs使HaCaT細(xì)胞線粒體膜電位下降正常細(xì)胞中MMP維持在相對(duì)高水平,JC-1在線粒體內(nèi)聚集成聚合物(紅色熒光),當(dāng)細(xì)胞凋亡時(shí),MMP降低,JC-1以單體形式(綠色熒光)存在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。本實(shí)驗(yàn)中,MMP檢測(cè)結(jié)果提示,與NC組及HSA組相比,AOPP-HSA處理組HaCaT細(xì)胞紅色熒光減低、綠色熒光增多；隨著AOPP-HSA濃度升高,HaCaT細(xì)胞紅色熒光亮度隨之降低、綠色熒光隨之增強(qiáng)。這些結(jié)果提示,AOPPs可使HaCaT細(xì)胞MMP下降。3、AOPPs刺激HaCaT細(xì)胞內(nèi)caspase家族及PARP-1蛋白的表達(dá)細(xì)胞凋亡過(guò)程中,有許多蛋白的表達(dá)發(fā)生變化,比如Bcl-2家族、caspase家族及PARP-1 。為探究AOPPs刺激后的HaCaT細(xì)胞凋亡過(guò)程中這些蛋白是否參與反應(yīng),我們利用Western blot檢測(cè)相關(guān)目的蛋白的表達(dá)情況。檢測(cè)結(jié)果顯示：AOPP-HSA作用后30min, PARP-1的表達(dá)開(kāi)始增加,其表達(dá)高峰出現(xiàn)在2h(是藥物作用前表達(dá)量的9.67倍,P0.05)。AOPP-HSA作用后15min,促凋亡蛋白Bax表達(dá)開(kāi)始增加,而抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)開(kāi)始減少,Bax/Bcl-2比值在24h達(dá)到最大值(16.71±1.42)。Caspas 9及Caspase 3前體在AOPPs作用后2h開(kāi)始減少,同時(shí)活化的cleaved caspase 9及cleaved caspase 3表達(dá)開(kāi)始增加(P0.05)。隨著AOPP-HSA濃度的增力, PARP-1, cleaved caspase 9, cleaved caspase 3及Bax的表達(dá)逐漸增多,而B(niǎo)cl-2的表達(dá)逐漸減少(P0.05)。4. AOPPs通過(guò)NADPH氧化酶途徑促進(jìn)HaCaT細(xì)胞中ROS的生成已有相關(guān)研究證明氧化應(yīng)激反應(yīng)下,細(xì)胞內(nèi)過(guò)多的ROS可促進(jìn)HaCaT細(xì)胞凋亡。為明確作為氧化蛋白產(chǎn)物的AOPPs能否促進(jìn)HaCaT細(xì)胞內(nèi)ROS的生成,我們對(duì)AOPPs作用后的HaCaT細(xì)胞進(jìn)行了胞內(nèi)ROS水平的檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果顯示,隨著AOPP-HSA作用時(shí)間的延長(zhǎng)或濃度的升高,HaCaT細(xì)胞內(nèi)ROS水平隨之增高(P0.05)。NADPH氧化酶(NOX)是ROS產(chǎn)生的主要來(lái)源之一,我們分別用NAC(N-acetylcysteine, ROS清除劑)、DPI (diphenylene iodonium,NOX抑制劑)及Apopcynin (NOX抑制劑)預(yù)先作用于HaCaT細(xì)胞,隨后檢測(cè)AOPPs對(duì)細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生的影響。結(jié)果顯示,NAC, DPI及Apopcynin均可以顯著抑制胞內(nèi)ROS生成,這一結(jié)果提示AOPPs可能通過(guò)NOX途徑促進(jìn)HaCaT細(xì)胞內(nèi)ROS的生成(P0.05)。5, AOPPs通過(guò)NOX4—ROS—MAPK—caspase cascade—PARP-1通路誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞凋亡Western blot檢測(cè)結(jié)果示,AOPPs刺激后,HaCaT細(xì)胞內(nèi)NOX4蛋白表達(dá)自30min起開(kāi)始增加、2h時(shí)達(dá)到高峰(藥物作用前的10.42倍,P0.05),p-ERK1/2及p-p38 MAPK從1h開(kāi)始逐漸增加；且這三種目的蛋白隨AOPPs-HSA濃度升高表達(dá)逐漸增強(qiáng)(P0.05)。為進(jìn)一步明確NOX4-ROS-MAPK-caspase cascade-PARP-1通路在HaCaT細(xì)胞凋亡中的作用,我們分別用U0126 (ERK上游抑制劑)、SB203580 (p38 MAPK抑制劑)、Z-VAD-fink (caspase廣譜抑制劑)、NAC、DPI及Apocynin對(duì)細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理,western blot檢測(cè)終末目的蛋白PARP-1的表達(dá)。結(jié)果顯示,在這些抑制劑的保護(hù)作用下,AOPPs刺激后的HaCaT細(xì)胞凋亡率明顯降低(P0.05)、細(xì)胞表達(dá)的PARP-1蛋白顯著減少(P0.05)。結(jié)論：1.AOPPs可誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞凋亡。2.AOPPs主要通過(guò)NOX途徑誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞產(chǎn)生大量ROS3. AOPPs通過(guò)NOX4-ROS-MAPK-caspase cascade-PARP-1通路促進(jìn)HaCaT細(xì)胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：AOPPs 細(xì)胞凋亡 HaCaT細(xì)胞 MAPK 氧化應(yīng)激
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R587.1
【目錄】：

• 摘要3-10
• ABSTRACT10-21
• 前言21-26
• 參考文獻(xiàn)24-26
• 第一章 AOPPS誘導(dǎo)HACAT細(xì)胞凋亡的研究26-49
• 第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料26-29
• 第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法29-37
• 第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-44
• 第四節(jié) 討論44-47
• 參考文獻(xiàn)47-49
• 第二章 AOPPS刺激HACAT細(xì)胞內(nèi)活性氧產(chǎn)生通路的研究49-65
• 第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料49-52
• 第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法52-55
• 第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果55-61
• 第四節(jié) 討論61-62
• 參考文獻(xiàn)62-65
• 第三章 不同層面阻斷劑對(duì)AOPPS在HACAT細(xì)胞內(nèi)作用的影響65-78
• 第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料65-68
• 第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法68-71
• 第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果71-75
• 第四節(jié) 討論75-77
• 參考文獻(xiàn)77-78
• 全文總結(jié)78-79
• 縮略語(yǔ)詞匯表79-80
• 攻讀學(xué)位期間成果80-81
• 致謝81-82

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10 周建大,羅成群,陳勇,夏昆,陳道瑾;硅納米載體轉(zhuǎn)染成人角質(zhì)形成細(xì)胞的初步研究[J];中國(guó)醫(yī)師雜志;2005年10期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 鐘華;郝飛;夏汝山;翟志芳;張瑛;鐘白玉;唐書(shū)謙;;人角質(zhì)形成細(xì)胞中半胱氨酰白三烯受體的表達(dá)和功能研究[A];2008全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

2 鐘華;郝飛;夏汝山;鐘白玉;唐書(shū)謙;翟志芳;張瑛;;人角質(zhì)形成細(xì)胞中半胱氨酰白三烯受體的表達(dá)和功能[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第14次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

3 方圣;郭慶;曾凡欽;李伯友;;人角質(zhì)形成細(xì)胞蛋白質(zhì)雙向電泳技術(shù)的建立和優(yōu)化[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第14次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

4 王曉艷;杜娟;張建中;;過(guò)氧化氫對(duì)正常人角質(zhì)形成細(xì)胞的氧化損傷研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第14次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

5 王菲菲;李紅文;吳景蘭;鄭乃剛;王一菱;;維生素C和維生素PP對(duì)原代培養(yǎng)人角質(zhì)形成細(xì)胞的效應(yīng)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第14次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

6 王麗華;彭代智;劉敬;周新;王勇;何升東;何斌;鄭必祥;董征學(xué);;不同質(zhì)粒導(dǎo)入人角質(zhì)形成細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)燒傷外科學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

7 王麗華;彭代智;劉敬;周新;王勇;何升東;何斌;鄭必祥;董征學(xué);;不同質(zhì)粒導(dǎo)入人角質(zhì)形成細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[A];第八屆西南五省一市燒傷整形學(xué)術(shù)會(huì)議暨貴州省醫(yī)學(xué)會(huì)燒傷整形分會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2010年

8 王懿娜;方紅;吳煒;彭國(guó)平;;UVB誘導(dǎo)人角質(zhì)形成細(xì)胞衰老的作用與端粒酶表達(dá)無(wú)關(guān)[A];2009年浙江省皮膚病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

9 王懿娜;方紅;吳煒;彭國(guó)平;;UVB誘導(dǎo)人角質(zhì)形成細(xì)胞衰老的作用與端粒酶表達(dá)無(wú)關(guān)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

10 周慨武;羅奇志;黃麗華;宋華培;豐海能;趙雄飛;;無(wú)血清、無(wú)滋養(yǎng)層培養(yǎng)的人角質(zhì)形成細(xì)胞生物學(xué)特征[A];全國(guó)危重?zé)齻颊咴缙趶?fù)蘇對(duì)策專題研討會(huì)論文匯編[C];2005年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 張中橋;人角質(zhì)形成細(xì)胞研究有進(jìn)展[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2005年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 馬翠玲;HPV16E6/E7對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞的生物學(xué)特性及其生長(zhǎng)調(diào)控因子的影響[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2000年

2 王平;中波紫外線輻射損傷人角質(zhì)形成細(xì)胞的分子機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2005年

3 王勇;CCL20基因修飾人角質(zhì)形成細(xì)胞的克隆篩選及相關(guān)干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳志勇;633nm低能量紅光刺激活性氧增加對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞增殖的影響研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2015年

2 段小冬;銀、銅離子對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞增殖的影響及機(jī)制探索[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 孫百慧;晚期氧化蛋白產(chǎn)物誘導(dǎo)人角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

4 陳瀟;5-氮雜胞苷對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)型一氧化氮合酶表達(dá)的影響[D];中南大學(xué);2008年

5 李薇;長(zhǎng)波紫外線對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的形態(tài)、數(shù)目及誘導(dǎo)型一氧化氮合酶表達(dá)的影響[D];中南大學(xué);2007年

6 趙陽(yáng);重組人表皮生長(zhǎng)因子對(duì)體外培養(yǎng)人角質(zhì)形成細(xì)胞增殖的影響[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2005年

7 趙丹;水楊酸對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞絲聚蛋白和激肽釋放酶7表達(dá)的影響[D];大連醫(yī)科大學(xué);2012年

8 李坦君;輔酶Q10對(duì)UVB損傷人角質(zhì)形成細(xì)胞保護(hù)作用研究[D];暨南大學(xué);2005年

9 韓飛;抗菌肽LL-37對(duì)中波紫外線輻射人角質(zhì)形成細(xì)胞核因子-κB的影響[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2013年

10 余斌;IP-10及納米脂質(zhì)體槲皮素對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞的效應(yīng)[D];鄭州大學(xué);2013年

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