本文關鍵詞：1、Pdcd4對脂肪來源干細胞的調(diào)控及其在飲食誘導肥胖中的作用 2、Pdcd4在氧化低密度脂蛋白和高脂飲食誘導應激顆粒形成中的作用研究

  更多相關文章： Pdcd4 ADSC 干性 米色脂肪細胞 白色脂肪細胞 Pdcd4 應激顆粒 巨噬細胞 氧化低密度脂蛋白 高脂飲食

【摘要】：目的隨著人們生活水平的改善以及生活方式的變化,肥胖的發(fā)病率逐漸增高,已經(jīng)發(fā)展成嚴重危害人類健康的疾病。肥胖作為一個全球性疾病,越來越受到人們的重視。肥胖與多種疾病的發(fā)病密切相關,可以增加II型糖尿病、心血管疾病和多種癌癥等疾病的患病風險。機體能量過�？梢云茐闹窘M織穩(wěn)態(tài)及代謝平衡,導致肥胖及胰島素抵抗,進而引發(fā)上述疾病。脂肪組織在調(diào)節(jié)機體能量平衡方面起著至關重要的作用。因此,維持脂肪組織穩(wěn)態(tài)和能量代謝平衡是控制肥胖及相關疾病的重要措施。機體內(nèi)脂肪組織分為白色脂肪組織(White adipose tissues, WAT)和棕色脂肪組織(Brown adipose tissues, BAT)。WAT主要負責能量的貯存和代謝的平衡。當機體能量過剩,而白色脂肪細胞的增殖分化又受抑時,體內(nèi)過多的脂肪會引起脂肪細胞的肥大,導致WAT尤其是內(nèi)臟WAT的病理性肥大,進而導致WAT炎癥,出現(xiàn)胰島素抵抗和代謝綜合征。相反,BAT主要是以產(chǎn)熱方式消耗能量,對于維持機體的體溫和能量平衡起重要作用。在寒冷或者高脂飲食的情況下,BAT通過棕色脂肪細胞線粒體內(nèi)膜上的解耦聯(lián)蛋白1 (Uncoupling protein 1, UCP1)介導的解耦聯(lián)作用產(chǎn)生熱量,消耗能量,具有抗肥胖作用。近年有研究發(fā)現(xiàn),在適當?shù)拇碳l件下,皮下WAT中會出現(xiàn)一種類似棕色脂肪細胞的細胞,被稱為棕色樣脂肪細胞或者米色脂肪細胞。這類細胞能夠表達棕色脂肪細胞特異性的標志物UCP1,其基因表達譜不同于典型的白色脂肪細胞或者棕色脂肪細胞,但作用與棕色脂肪細胞類似,可以通過UCP1的解耦聯(lián)作用產(chǎn)熱并消耗大量能量,起著控制肥胖、糖尿病和代謝性疾病的作用。脂肪來源干細胞(Adipose-derived stem cell, ADSC)是存在于脂肪組織中的間充質(zhì)干細胞(Mesenchymal stem cells, MSC),具有干細胞獨有的自我更新能力及多向分化潛能,又稱干性。ADSC作為脂肪組織的基質(zhì)細胞,主要通過平衡其自我更新的能力和分裂分化來維持脂肪組織的穩(wěn)態(tài)。脂肪組織內(nèi)的ADSC又稱前脂肪細胞,適當條件下可增殖分化成成熟的脂肪細胞,參與維持脂肪組織穩(wěn)態(tài)及代謝平衡。ADSC的增殖能力以及其分化為白色或棕色脂肪細胞的潛能直接決定了脂肪組織的代謝穩(wěn)態(tài)以及肥胖的形成與否。因此,尋找控制ADSC增殖與成脂分化方向的基因或者蛋白靶點,也將成為干預治療肥胖的新策略,為肥胖相關疾病的治療提供一個全新的思路。程序性細胞死亡基因4 (Programmed cell death 4, Pdcd4)最初被發(fā)現(xiàn)是一個在誘導凋亡時上調(diào)的基因,現(xiàn)在更多地認為它是一個腫瘤抑制因子,通過影響轉(zhuǎn)錄和翻譯來抑制基因的表達。近期有研究提出,Pdcd4基因能夠參與多種炎癥和代謝性疾病。我們前期的研究發(fā)現(xiàn),Pdcd4基因缺失(Pdcd4-/-)小鼠可以抵抗高脂飲食誘導的肥胖形成,其能量消耗顯著高于高脂喂養(yǎng)的野生型(Wild type, WT)小鼠,其附睪處WAT的脂肪細胞亦呈現(xiàn)正常大小,未出現(xiàn)病理性肥大。我們發(fā)現(xiàn)Pdcd4缺失可通過上調(diào)脂質(zhì)調(diào)節(jié)因子肝X受體-a (Liver X receptor, LXR-a),參與調(diào)節(jié)WAT的脂質(zhì)代謝和穩(wěn)態(tài)。根據(jù)前文所述,ADSC是維持脂肪組織穩(wěn)態(tài)的重要基質(zhì)細胞,那么Pdcd4是否可以通過影響ADSC的功能,進而影響飲食誘導的肥胖,目前尚不明確。為此,我們做了以下研究,分別將來自WT和Pdcd4-/-小鼠的ADSC進行體外培養(yǎng),檢測兩種來源的ADSC在干性標志、增殖能力和成脂分化等方面的不同,并進一步探討其內(nèi)在機制；同時利用動物體內(nèi)實驗對相關結(jié)論進行了驗證。方法一、Pdcd4缺失對ADSC干細胞相關標志的影響1. ADSC的提取和培養(yǎng)分離WT和Pdcd4-/-小鼠附睪處脂肪組織,剪碎后加入相應體積的膠原酶,37℃搖床45 min后觀察消化情況并終止消化,過濾離心即得到含有ADSC的基質(zhì)血管成分(Stromal vascular fraction, SVF)。用培養(yǎng)基重懸細胞,接種至6孔板中進行培養(yǎng)擴增。每2-3天換液一次,待細胞融合度達到90%左右時進行傳代。2.ADSC表面干細胞相關標志檢測通過流式細胞術的方法,分別檢測WT和Pdcd4-/- ADSC表面陽性標志CD105. CD90和陰性標志CD11b、CDllc的表達情況。3. Pdcd4缺失對ADSC干性標志的影響分別提取WT和Pdcd4-/- ADSC和SVF中總RNA,檢測RNA濃度并進行逆轉(zhuǎn)錄,通過Real-time PCR的方法來檢測干性標志Nanog、Oct4和Sox2的表達。二、Pdcd4缺失對ADSC自我更新能力的影響1. Pdcd4缺失對ADSC增殖能力的影響體外實驗：首先通過CCK-8實驗檢測WT和Pdcd4-/- ADSC在培養(yǎng)12 h和24 h后細胞增殖能力的不同,通過克隆形成實驗檢測其克隆形成能力的差異。接下來又通過EdU摻入和PI染色檢測細胞的增殖及周期變化。體內(nèi)實驗：將EdU通過腹腔注射到WT和Pdcd4-/-小鼠體內(nèi),24 h后取附睪處脂肪組織,固定包埋切片并進行染色,觀察脂肪組織中ADSC的增殖情況。2. Pdcd4缺失對ADSC增殖相關信號通路的影響取處于對數(shù)生長期的WT和Pdcd4-/- ADSC,用Western-blot的方法檢測p-AKT和細胞周期蛋白cyclinD1的表達情況。為了進一步驗證AKT通路在ADSC增殖過程中的影響,我們在細胞培養(yǎng)過程中加入2μM AKT抑制劑MK2206,用Western-blot和EdU摻入的方法檢測加入抑制劑之后細胞增殖的變化。三、Pdcd4缺失對ADSC成脂分化能力的影響1. Pdcd4缺失對ADSC成脂分化的影響按照C57BL/6小鼠脂肪間充質(zhì)干細胞成脂誘導分化培養(yǎng)基產(chǎn)品說明書分別對WT和Pdcd4-/- ADSC進行成脂誘導。用Real-time PCR的方法分別檢測在誘導0、4、8、12天白色脂肪細胞標志C/EBPa-/- PPAR-γ-/- adiponectin和aP2的mRNA表達水平。在誘導18天后對細胞進行油紅O染色,觀察脂滴的多少和大小,用紫外分光光度計檢測脂質(zhì)形成的多少。并用Real-time PCR和組化的方法檢測12天后米色脂肪細胞標志UCP1的表達情況。2. Pdcd4缺失對高脂環(huán)境下WAT中ADSC分化的影響(1)建立飲食誘導肥胖模型8周齡WT和Pdcd4-/-小鼠用于實驗模型建立,分別給予高脂飲食(High fat diet, HFD,含有15%脂肪和0.25%膽固醇),或常規(guī)飲食(Normal diet, ND)喂養(yǎng)24周。(2)米色脂肪細胞標志的檢測取高脂和常規(guī)喂養(yǎng)24周的WT和Pdcd4-/-小鼠附睪處白色脂肪組織的蛋白和總RNA,分別用Western-blot和Real-time PCR的方法檢測UCP1的表達情況,并對脂肪組織切片進行免疫熒光染色檢測UCP1的表達。3. Pdcd4缺失對ADSC乳酸產(chǎn)生的影響分別收集WT和Pdcd4/-/ ADSC誘導之前和誘導第12天的細胞上清,用乳酸檢測試劑盒檢測上清中乳酸的含量。一、結(jié)果Pdcd4缺失增強LDSC干細胞相美標志的表達1. Pdcd4缺失增強SC表面標志的表達檢測WT和Pdcd4-/- ADSC在體外培養(yǎng)擴增后干細胞相關表型的表達。對兩種不同來源的ADSC進行拍照觀察,兩種細胞在形態(tài)上并沒有明顯的差異。WT和Pdcd4-/- ADSC都高表達干細胞相關的表面標志CD105和CD90,不表達或者低表達CD11b和CD11c。不同的是,與WT ADSC相比,Pdcd4-/- ADSC表面CD105和CD90的表達水平明顯增高。2. Pdcd4缺失增強ADSC干性相關標志的表達接下來,我們檢測了干細胞干性相關基因Nanog、Oct4和Sox2在mRNA水平的變化。與WTADSC相比,Pdcd4-/- ADSC中Nanog-/- Oct4在mRNA水平的表達明顯上調(diào),而Sox2變化不是很明顯。為了排除體外擴增培養(yǎng)對ADSC的可能影響,我們又檢測了ND小鼠SVF中干性相關基因的表達。結(jié)果顯示,Pdcd4-/-小鼠SVF中Nanog-/- Oct4和Sox2的表達在mRNA水平的表達都較WT小鼠SVF中顯著增高。二、Pdcd4缺失增強ADSC的自我更新能力1. Pdcd4缺失促進ADSC由G1期進入到S期,進而促進ADSC的增殖從CCK-8方法繪制的生長曲線和克隆形成實驗的結(jié)果都可以看出Pdcd4缺失能夠促進ADSC的增殖。而EdU染色的結(jié)果提示Pdcd4-/- AADSC有較多的細胞處于細胞周期的S期,流式細胞術檢測細胞周期的結(jié)果顯示與WT ADSC相比,Pdcd4-/- ADSC處于S期的細胞比例增大,而處于G1期的細胞數(shù)明顯減少。WAT石蠟切片的EdU染色結(jié)果顯示,Pdcd4-/- WAT中有較多的細胞處于增殖期。提示Pdcd4缺失可以增強小鼠WAT中ADSC的干性。以上結(jié)果表明Pdcd4缺失能夠促進ADSC由G1期進入到S期,進而促進ADSC的增殖。2. Pdcd4缺失引起的ADSC周期變化依賴于AKT信號通路的激活利用Western-blot的方法檢測WT和Pdcd4-/- ADSC中AKT的活化狀態(tài),結(jié)果顯示與WT ADSC相比,Pdcd4-/- ADSC中p-AKT的水平明顯上調(diào),cyclinD1表達也顯著增強。加入AKT抑制劑MK2206后,WT ADSC的細胞增殖受到了明顯的抑制,EdU陽性的細胞數(shù)也明顯降低,但cyclinD1的變化不大。然而在Pdcd4-/- ADSC中,AKT的抑制伴隨著cyclinD1表達的顯著下調(diào),EdU陽性的細胞數(shù)也大大降低。以上結(jié)果表明Pdcd4缺失引起的ADSC由G1期向S期的轉(zhuǎn)換依賴于AKT信號通路的激活。三、Pdcd4缺失促進ADSC由白色脂肪細胞轉(zhuǎn)分化為米色脂肪細胞1. Pdcd4缺失體外促進ADSC由白色脂肪細胞轉(zhuǎn)分化為米色脂肪細胞檢測誘導0、4、8和12天的WT和Pdcd4-/- ADSC中白色脂肪細胞相關標志C/EBPα adiponectin、PPAR-γ和aP2的nRNA表達水平,發(fā)現(xiàn)在誘導過程中這些基因的表達都快速上調(diào)。誘導12天以后,Pdcd4-/- ADSC中這些基因的mRNA表達水平明顯低于WT ADSC,油紅O染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)Pdcd4-/- ADSC誘導形成脂質(zhì)的能力較低。而Pdcd4-/-脂肪細胞中UCP1的mRNA表達水平明顯高于WT脂肪細胞,細胞UCP1的組化染色也得到了相同的結(jié)論。以上實驗結(jié)果表明,Pdcd4缺失在一定程度上能夠抑制ADSC向白色脂肪細胞的分化,轉(zhuǎn)而促進ADSC分化為表達UCP1的米色脂肪細胞。2. Pdcd4缺失促進高脂喂養(yǎng)的小鼠WAT中米色脂肪細胞的形成我們分別提取了ND和HFD喂養(yǎng)的WT和Pdcd4-/-小鼠附睪處WAT中的蛋白和總RNA,并檢測在蛋白和mRNA水平UCP1的表達。ND WAT中UCP1的表達量很低,但在高脂以后,Pdcd4-/- WAT中UCP1的表達明顯增強,而WT WAT中并沒有太大的變化。與肥胖的WT小鼠相比,HFD Pdcd4-/- WAT中UCP1的表達量更高,與WAT的UCP1免疫熒光染色的結(jié)果是一致的。以上結(jié)果表明,Pdcd4缺失能夠促進高脂飲食喂養(yǎng)的小鼠白色脂肪組織中米色脂肪細胞的形成。3. Pdcd4缺失促進ADSC產(chǎn)生乳酸乳酸含量檢測結(jié)果顯示,Pdcd4-/- ADSC上清中乳酸的含量顯著高于WTADSC上清。在誘導12天時,Pdcd4-/-脂肪細胞上清中乳酸的含量也是顯著增高的,而此時細胞中UCP1的表達也是上調(diào)的,提示乳酸在這一過程中有推動作用。結(jié)論1.Pdcd4缺失增強ADSC的干性。2. Pdcd4缺失通過激活AKT通路促進ADSC的G1/S期轉(zhuǎn)換,進而促進其增殖。3. Pdcd4缺失促進ADSC由白色脂肪細胞轉(zhuǎn)分化為米色脂肪細胞。目的應激顆粒(stress granule,SG)是真核細胞在受到熱休克、病毒感染、氧化應激或者內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激等刺激下,細胞質(zhì)內(nèi)mRNA和多種核糖核蛋白聚集形成的顆粒狀復合體。為了應對環(huán)境中的有害刺激,細胞中的蛋白翻譯迅速停滯,導致多聚核糖體的快速解離,未翻譯的mRNA、多種翻譯起始因子和核糖核蛋白等重新組裝,形成SG。T細胞內(nèi)抗原(T-cell-restricted intracellular antigen-1, TIA-1)、脆性X智力遲鈍相關受體(Fragile X mental retardation-relate protein 1, FXR1)、真核細胞起始因子4A (Eukaryotic-initiating factors 4A, eIF4A)和eIF4B常作為SG形成的標志。當環(huán)境中的壓力消失以后,聚集形成的SG就會重新解聚,蛋白翻譯繼續(xù)進行。迄今為止,SG已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)存在于多種類型的疾病中,包括病毒感染、炎癥性疾病、癌癥和多種神經(jīng)退行性疾病。程序性細胞死亡基因4 (Programmed cell death 4, Pdcd4)作為一種翻譯抑制因子,可以通過其MA3結(jié)構(gòu)域與翻譯起始因子eIF4A結(jié)合并抑制其解旋酶活性,從而抑制帽依賴的蛋白翻譯作用。基于其蛋白翻譯抑制作用,Pdcd4可以抑制腫瘤細胞的生長,進而抑制腫瘤的致瘤性轉(zhuǎn)化和進展。隨著研究的深入,Pdcd4的抗炎作用逐漸被大家認識。近期,我們的研究證實Pdcd4可以促進飲食誘導肥胖及相關脂肪組織炎癥。Pdcd4缺失(Pdcd4-/-)小鼠可以抵抗高脂飲食誘導的脂肪組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激和肝組織氧化應激,提示Pdcd4可以參與高脂飲食誘導的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激和氧化應激。但是Pdcd4在應激過程中的作用尚未確定,是否與應激狀態(tài)下SG形成有潛在的聯(lián)系尚不可知。氧化應激是體內(nèi)氧化作用和抗氧化作用失衡的一種狀態(tài)。氧化低密度脂蛋白(Oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)可以通過促進和增加活性氧的生成進而增強巨噬細胞和許多其他細胞中的氧化應激,可作為氧化應激的誘導條件。于是,在本研究中,我們檢測了高脂飲食條件下Pdcd4對巨噬細胞和肝組織中SG形成的影響,并進一步用ox-LDL刺激巨噬細胞、HeLa細胞和HepG2細胞,觀察在體外誘導條件下Pdcd4對SG形成的影響,并探討其內(nèi)在機制。方法1.高脂小鼠巨噬細胞和肝組織中SG的檢測首先用野生型(Wild type,WT)和Pdcd4-/-雄性小鼠建立飲食誘導肥胖模型,取高脂飲食WT和Pdcd4-/-小鼠腹腔巨噬細胞和肝組織的石蠟切片進行TIA-1的免疫熒光染色,觀察TIA-1+ SG的形成。2.Pdcd4在SG形成中的作用分別提取WT和Pdcd4-/-小鼠腹腔巨噬細胞,設置ox-LDL刺激組和對照組,進行TIA-1的免疫熒光染色,觀察SG的形成情況,并對含有SG的細胞數(shù)進行統(tǒng)計學分析。3.Pdcd4與SG的定位關系Ox-LDL分別刺激WT巨噬細胞和轉(zhuǎn)染了pEGFP-C1-Pdcd4質(zhì)粒的HeLa細胞,24 h后進行SG特異性標志TIA-1、FXR1和eIF4A的免疫熒光染色,觀察Pdcd4與SG標志的定位關系。4.Pdcd4通過RNA結(jié)合區(qū)域參與SG形成已證實Pdcd4基因序列中有兩個RNA結(jié)合區(qū)域,分別是RBM1和RBM2基序。我們在pEGFP-C1-Pdcd4(Pdcd4-WT)質(zhì)粒的基礎上,分別構(gòu)建RBM1缺失(Pdcd4-D1).RBM2缺失(Pdcd4-D2)和這兩個區(qū)域共同缺失(Pdcd4-D1+2)的截短體,并分別轉(zhuǎn)染入HepG2細胞,然后ox-LDL刺激并進行SG特異性標志TIA-1的免疫熒光染色,觀察SG的形成情況,并對細胞中的SG數(shù)進行統(tǒng)計學分析。5.Pdcd4調(diào)節(jié)SG形成1)HeLa細胞分別轉(zhuǎn)染pEGFP-C1質(zhì)粒和pEGFP-C1-Pdcd4質(zhì)粒,ox-LDL刺激24 h后提取蛋白,并設置對照組,用Western-blot的方法檢測p-eIF2a的表達情況。2)分別提取WT和Pdcd4-/-巨噬細胞,ox-LDL刺激24 h后提取蛋白,并設置對照組,用Western-blot的方法檢測p-AKT和p-eIF2a的表達情況。3)提取Pdcd4-/-巨噬細胞,過夜后加入2μM AKT抑制劑MK2206,6h后加入ox-LDL培養(yǎng)24 h,收集蛋白,用Western-blot的方法檢測p-AKT和p-eIF2a的表達情況,并用免疫熒光染色的方法觀察SG的變化。4)分別提取高脂喂養(yǎng)WT和Pdcd4-/-小鼠腹腔巨噬細胞的蛋白,用Western-blot的方法檢測p-AKT和p-eIF2a的表達情況。結(jié)果1.高脂喂養(yǎng)Pdcd4-/-小鼠中巨噬細胞和肝組織中的SG減少首先,我們以TIA-1作為應激顆粒的標志,檢測WT和Pdcd4-/-小鼠腹腔巨噬細胞和肝組織中SG的形成。結(jié)果顯示,WT巨噬細胞中可以明顯得觀察到TIA-1+ SG,而Pdcd4-/-巨噬細胞中則很少,肝組織中也出現(xiàn)類似的現(xiàn)象。這些數(shù)據(jù)表明,SG能夠參與高脂飲食誘導的應激反應,更重要的是揭示在高脂飲食的刺激下,Pdcd4是SG形成的一個關鍵因素。2. Pdcd4缺失能夠降低ox-LDL刺激的巨噬細胞中TIA-1+ SG的形成我們用ox-LDL刺激分別刺激WT和Pdcd4-/-巨噬細胞,結(jié)果顯示W(wǎng)T巨噬細胞中含TIA-1+ SG的細胞數(shù)顯著升高,而Pdcd4-/-巨噬細胞中含TIA-1+ SG的細胞數(shù)變化并不明顯,只有很少的細胞中可觀察到SG。與WT巨噬細胞相比,Pdcd4-/-巨噬細胞中含有TIA-1+ SG的細胞數(shù)明顯下降。以上結(jié)果說明,Pdcd4缺失能夠降低ox-LDL刺激的巨噬細胞中TIA-1+ SG形成。3. Ox-LDL刺激的巨噬細胞中Pdcd4與SG特異性標志的共定位免疫熒光的結(jié)果顯示,在ox-LDL刺激的WT巨噬細胞中Pdcd4與SG特異性標志TIA-1、FXR1和eIF4A的表達具有良好的共定位關系,說明ox-LDL可以誘導巨噬細胞中SG的產(chǎn)生,Pdcd4可能是SG的一個重要組成部分。4. Ox-LDL刺激的HeLa細胞中外源性Pdcd4與SG特異性標志的共定位免疫熒光的結(jié)果顯示,過表達Pdcd4-GFP融合蛋白的HeLa細胞(轉(zhuǎn)染pEGFP-C1-Pdcd4質(zhì)粒)經(jīng)ox-LDL刺激后有明顯SG的形成,且外源性Pdcd4 (GFP')與SG標志TIA-1、FXR1和eIF4A的表達都具有共定位的關系,與巨噬細胞中觀察到的現(xiàn)象是一致的。因此提示ox-LDL刺激可以促進外源性Pdcd4參與SG的形成。5.Pdcd4通過RNA結(jié)合區(qū)參與SG的形成在HepG2細胞中轉(zhuǎn)染pEGFP-C1-Pdcd4質(zhì)粒(Pdcd4-WT)并用ox-LDL刺激之后,可以看到大量GFP+ TIA-1+ SG的形成,但轉(zhuǎn)染Pdcd4-D2和Pdcd4-D1+2的細胞,GFP+ TIA-1+ SG的形成顯著減少。而在轉(zhuǎn)染Pdcd4-D1的細胞中,GFP+ TIA-1+ SG的形成與轉(zhuǎn)染pEGFP-C1-Pdcd4質(zhì)粒相比并沒有明顯的變化。以上結(jié)果表明,Pdcd4主要通過RBM2結(jié)構(gòu)域參與ox-LDL誘導的SG形成。6.Pdcd4通過AKT-eIF2a通路調(diào)節(jié)SG的形成首先,我們證實了ox-LDL刺激可以激活eIF2α信號通路并促進SG的形成。接下來我們發(fā)現(xiàn)與WT巨噬細胞相比,ox-LDL刺激之后,Pdcd4-/-巨噬細胞中p-eIF2a的表達下調(diào)伴有p-AKT的明顯上調(diào),提示Pdcd4-/-巨噬細胞中p-eIF2α的下調(diào)可能源于AKT信號通路的激活。當抑制AKT通路的活化之后,p-eIF2α的表達明顯上調(diào),SG的形成也隨之增多。此外,與高脂喂養(yǎng)的WT小鼠相比,來自高脂喂養(yǎng)Pded4-/-小鼠的腹腔巨噬細胞亦發(fā)現(xiàn)明顯的p-eIF2α下調(diào)伴p-AKT上調(diào)。以上這些結(jié)果表明ox-LDL和高脂飲食誘導的SG形成依賴于eIF2α的磷酸化,這一過程在一定程度上是受AKT通路調(diào)節(jié)的。結(jié)論1.Ox-LDL和高脂飲食可以誘導SG的產(chǎn)生。2.Pdcd4通過RNA結(jié)合區(qū)參與SG的形成。3.Pdcd4通過AKT-eIF2α通路調(diào)節(jié)SG的形成。
【關鍵詞】：Pdcd4 ADSC 干性 米色脂肪細胞 白色脂肪細胞 Pdcd4 應激顆粒 巨噬細胞 氧化低密度脂蛋白 高脂飲食
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R589.2
【目錄】：

• 第一部分 Pdcd4對脂肪來源干細胞的調(diào)控及其在飲食誘導肥胖中的作用9-63
• 中文摘要9-15
• 英文摘要15-22
• 符號說明22-23
• 前言23-27
• 材料27-30
• 方法30-39
• 1. Pdcd4缺失對ADSC干細胞相關標志的影響30-32
• 2. Pdcd4缺失對ADSC自我更新能力的影響32-35
• 3. Pdcd4缺失對ADSC成脂分化能力的影響35-38
• 4.統(tǒng)計學分析38-39
• 結(jié)果39-43
• 1. Pdcd4缺失增強ADSC干細胞相關標志的表達39
• 1.1 Pdcd4缺失增強ADSC表面標志的表達39
• 1.2 Pdcd4缺失增強ADSC干性相關標志的表達39
• 2. Pdcd4缺失增強ADSC的自我更新能力39-41
• 2.1 Pdcd4缺失促進ADSC由G1期進入到S期,進而促進ADSC的增殖39-40
• 2.2 Pdcd4缺失引起的ADSC周期變化依賴于AKT信號通路的激活40-41
• 3. Pdcd4缺失促進ADSC由白色脂肪細胞轉(zhuǎn)分化為米色脂肪細胞41-43
• 3.1 Pdcd4缺失體外促進ADSC由白色脂肪細胞轉(zhuǎn)分化為米色脂肪細胞41
• 3.2 Pdcd4缺失促進高脂喂養(yǎng)的小鼠WAT中米色脂肪細胞的形成41-42
• 3.3 Pdcd4缺失促進ADSC產(chǎn)生乳酸42-43
• 討論43-46
• 小結(jié)46-47
• 附表47-48
• 附圖48-59
• 參考文獻59-63
• 第二部分 Pdcd4在氧化低密度脂蛋白和高脂飲食誘導應激顆粒形成中的作用研究63-98
• 中文摘要63-67
• 英文摘要67-72
• 符號說明72-73
• 前言73-75
• 材料75-76
• 方法76-81
• 1. 高脂小鼠巨噬細胞和肝組織中SG的檢測76
• 2. Pdcd4在SG形成中的作用76-77
• 3. Pdcd4與SG的定位關系77
• 4. Pdcd4通過RNA結(jié)合區(qū)域參與SG形成77-80
• 5. Pdcd4調(diào)節(jié)SG形成80
• 6. 統(tǒng)計學分析80-81
• 結(jié)果81-84
• 1. 高脂喂養(yǎng)Pdcd4~(-/-)小鼠中巨噬細胞和肝組織中的SG減少81
• 2. Pdcd4缺失能夠降低ox-LDL刺激的巨噬細胞中TIA-1~+SG的形成81
• 3. Ox-LDL刺激的巨噬細胞中Pdcd4與SG特異性標志的共定位81
• 4. Ox-LDL刺激的HeLa細胞中外源性Pdcd4與SG特異性標志的共定位81-82
• 5. Pdcd4通過RNA結(jié)合區(qū)參與SG的形成82
• 6. Pdcd4通過AKT-eIF2α通路調(diào)節(jié)SG的形成82-84
• 討論84-86
• 小結(jié)86-87
• 附圖87-95
• 參考文獻95-98
• 致謝98-99
• 發(fā)表文章99
• 參與課題99-100
• 學術活動100
• 獲獎情況100-101
• 學位論文評閱及答辯情況表101

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 王舒然;麻微微;趙丹;王國秀;藺威鳴;;高脂飲食誘導肥胖與肥胖抵抗動物模型建立[J];中國公共衛(wèi)生;2007年07期

2 劉忠榮;白紅艷;李祖?zhèn)?;藏藥烈洗的減肥和促進LDLR表達的作用研究[J];世界科學技術;2006年01期

3 梁穎;李焱;蔣妍;劉珊英;黎鋒;肖輝盛;劉丹;嚴勵;傅祖植;;替米沙坦對高脂飲食誘導的大鼠體重增加和血脂異常的影響[J];中國藥學雜志;2011年03期

4 袁欣;陳玉嬪;甘丹娜;程玉芳;徐江平;;二甲雙胍改善高脂飲食誘導的大鼠學習記憶障礙[J];軍事醫(yī)學;2014年01期

5 肖璐;楊卓;;促紅細胞生成素的滴定劑量對高脂飲食誘導的糖尿病的影響[J];天津醫(yī)藥;2011年12期

6 倪陣;聞勤生;趙曙光;張哲;王景杰;王旭霞;劉震雄;;敲除Nrf2促進高脂飲食誘導小鼠肝臟NF-kB的活化[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2013年30期

7 吳俊;陳琛;曾和松;汪道文;;細胞色素P450基因?qū)Ω咧嬍痴T導不同周齡小鼠動脈粥樣硬化的保護作用機制[J];中國分子心臟病學雜志;2011年02期

8 邵華;王珍;;高脂飲食誘導小鼠脂肪肝[J];肝膽胰外科雜志;2005年04期

9 ;[J];;年期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 高鳳英;趙鐵耘;;黃連素改善高脂飲食誘導的肥胖大鼠胰島素抵抗的作用及機制的初探[A];中華醫(yī)學會第十次全國內(nèi)分泌學學術會議論文匯編[C];2011年

2 楊年紅;王重建;許明佳;劉烈剛;孫秀發(fā);;高脂飲食誘導大鼠肥胖易感性差異的研究[A];中國營養(yǎng)學會第九次全國營養(yǎng)學術會議論文摘要匯編[C];2004年

3 李曼;齊艷平;孫學華;朱曉駿;高月求;;參葛方對單純高脂飲食誘導的非酒精性脂肪肝影響的實驗研究[A];2011年長江三角洲中醫(yī)肝病協(xié)作組學術會議暨浙江省中醫(yī)藥學會肝病分會學術年會文集[C];2011年

4 閆明先;李延青;孟敏;任洪波;;核因子-κB在長期高脂飲食誘導的大鼠胰腺損傷中的作用[A];中華醫(yī)學會第七次全國消化病學術會議論文匯編（上冊）[C];2007年

5 龍洋;嚴芳芳;肖竹;高峗;張祥迅;田浩明;;黃芪注射液灌胃改善高脂飲食誘導肥胖大鼠脂代謝紊亂分子機制的研究[A];中華醫(yī)學會第十次全國內(nèi)分泌學學術會議論文匯編[C];2011年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 李莫涵;早期非酒精性脂肪性肝病小鼠模型的實驗研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2015年

2 劉芳;從炎癥角度解析中度高脂飲食誘導肥胖對內(nèi)分泌代謝及骨骼肌功能的影響[D];吉林大學;2016年

3 白楊;1、Pdcd4對脂肪來源干細胞的調(diào)控及其在飲食誘導肥胖中的作用 2、Pdcd4在氧化低密度脂蛋白和高脂飲食誘導應激顆粒形成中的作用研究[D];山東大學;2016年

4 張情;植物甾醇酯對高脂飲食誘導的非酒精性脂肪肝的預防作用研究[D];上海交通大學;2015年

5 娜迪拉;短期高脂飲食誘導小鼠腸道TLR4/NF-κB通路表達[D];新疆醫(yī)科大學;2012年

6 張荷香;高脂飲食誘導的肥胖和肥胖抵抗大鼠脂聯(lián)素表達水平比較研究[D];華中科技大學;2009年

7 曾凡勇;鈣代謝及其相關基因在高脂飲食誘導的肥胖易感和肥胖抗性大鼠中的差異性研究[D];南京醫(yī)科大學;2006年

8 于洋;母代高脂飲食對子代代謝特征的影響及其機制[D];重慶醫(yī)科大學;2015年

，

本文編號：914216