本文關(guān)鍵詞：PARP-1在900MHz微波輻射誘導(dǎo)小鼠骨髓基質(zhì)細胞適應(yīng)性反應(yīng)中的作用研究

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【摘要】：目的:以原代小鼠骨髓基質(zhì)細胞為研究對象,建立900MHz微波輻射誘導(dǎo)適應(yīng)性反應(yīng)的細胞模型,研究微波輻射與PARP-1活化、適應(yīng)性反應(yīng)之間的相關(guān)性,探討PARP-1在900MHz微波輻射誘導(dǎo)DNA損傷修復(fù)機制中的作用。方法:1.建立900MHz微波輻射誘導(dǎo)小鼠骨髓基質(zhì)細胞適應(yīng)性反應(yīng)模型將小鼠骨髓基質(zhì)細胞隨機分為以下6組:對照組、假暴露組(置于微波照射裝置中,不給予微波照射,3h/d,連續(xù)5d)、微波照射組(120μW/cm2,900MHz微波照射,3h/d,連續(xù)5d)、γ射線組(1.5 Gy 60Co-γ射線照射,劑量率0.5 Gy/min)、微波復(fù)合組(120μW/cm2,900MHz微波照射,3h/d,連續(xù)5d,微波輻照結(jié)束后3小時一次性給予1.5 Gyγ射線照射)、假暴露復(fù)合組(假照射結(jié)束后3小時一次性給予1.5Gyγ射線照射)。各組照射結(jié)束后立即收集細胞進行堿性單細胞凝膠電泳試驗,以彗星的尾長(tail length,TL)和尾矩(tail moment,TM)來判斷DNA的損傷情況。2.900MHz微波輻射誘導(dǎo)小鼠骨髓基質(zhì)細胞PARP-1的表達變化將小鼠骨髓基質(zhì)細胞隨機分為3組:假暴露組(置于微波照射裝置中,不給予微波照射,3h/d,連續(xù)5d)、微波照射組(120μW/cm2,900MHz微波照射,3h/d,連續(xù)5d)、γ射線組(1.5 Gy 60Co-γ射線照射,劑量率0.5 Gy/min)。各組于照射結(jié)束后的0,0.5,1,2,4,6,8和10小時收集細胞,分別采用RT-PCR和Western Blot檢測PARP-1 mRNA及蛋白水平的表達情況。3.PARP-1在微波拮抗γ射線致小鼠骨髓基質(zhì)細胞DNA損傷中的作用將小鼠骨髓基質(zhì)細胞隨機分為以下6組:對照組、微波照射組(120μW/cm2,900MHz微波照射,3h/d,連續(xù)5d)、γ射線組(1.5 Gy 60Co-γ射線照射,劑量率0.5Gy/min)、微波復(fù)合組(120μW/cm2,900MHz微波照射,3h/d,連續(xù)5d,微波輻照結(jié)束后3小時一次性給予1.5 Gyγ射線照射)、微波+3-AB組(120μW/cm2,900MHz微波照射,3h/d,連續(xù)5d,在微波照射的第五天,2mm3-ab預(yù)處理細胞1小時后給予微波照射)、微波+3-ab+γ組(120μw/cm2,900mhz微波照射,3h/d,連續(xù)5d,在微波照射的第五天,2mm3-ab預(yù)處理細胞1小時后給予微波照射,微波輻照結(jié)束后3小時一次性給予1.5gy60co-γ射線照射,劑量率0.5gy/min)。照射結(jié)束后,采用堿性單細胞凝膠電泳試驗觀察各組細胞dna損傷情況,rt-pcr檢測各組parp-1mrna的變化情況,westernblot檢測各組蛋白的表達情況。4.parp-1在900mhz微波輻射誘導(dǎo)細胞dna損傷修復(fù)能力增強中的作用制備原代小鼠骨髓基質(zhì)細胞,隨機分為以下各組:對照組、假暴露組(置于微波照射裝置中,不給予微波照射,3h/d,連續(xù)5d)、微波照射組(120μw/cm2,900mhz微波照射,3h/d,連續(xù)5d)、微波+3-ab組(120μw/cm2,900mhz微波照射,3h/d,連續(xù)5d,在微波照射的第五天,2mm3-ab預(yù)處理細胞1小時后給予微波照射)、γ射線組(1.5gy60co-γ射線照射,劑量率0.5gy/min)、假暴露復(fù)合組(假照射結(jié)束3小時后一次性給予1.5gyγ射線照射)、微波復(fù)合組(120μw/cm2,900mhz微波照射,3h/d,連續(xù)5d,微波輻照結(jié)束后3小時一次性給予1.5gyγ射線照射)、微波+3-ab+γ組(120μw/cm2,900mhz微波照射,3h/d,連續(xù)5d,在微波照射的第五天,2mm3-ab預(yù)處理細胞1小時后給予微波照射,微波輻照結(jié)束后3小時一次性給予1.5gy60co-γ射線照射,劑量率0.5gy/min)。在照射結(jié)束后的0min,30min,60min,90min和120min進行堿性單細胞凝膠電泳試驗觀察各組細胞dna損傷情況,同時分別使用rt-pcr技術(shù)和wesrernblot檢測各時間點parp-1mrna水平及蛋白表達情況。結(jié)果:1.建立900mhz微波輻射誘導(dǎo)小鼠骨髓基質(zhì)細胞適應(yīng)性反應(yīng)模型(1)與對照組相比,假暴露組的細胞彗星tl和tm均無明顯變化(p0.05);與單純γ射線組相比,假暴露復(fù)合組細胞彗星tl和tm均無明顯變化(p0.05),說明微波假暴露對dna損傷無明顯影響。(2)與對照組相比,微波照射組細胞彗星tl和tm均無明顯變化(p0.05),而γ射線組細胞tl和tm明顯升高(p0.0001),說明微波輻射不會引起明顯的dna損傷,而γ射線暴露可導(dǎo)致明顯的dna損傷。(3)與單純γ射線組相比,微波復(fù)合組細胞彗星tl和tm明顯降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.0001),說明低劑量微波輻射能夠拮抗γ射線暴露導(dǎo)致的dna損傷,誘導(dǎo)小鼠骨髓基質(zhì)細胞產(chǎn)生適應(yīng)性反應(yīng)。2.900mhz微波輻射誘導(dǎo)小鼠骨髓基質(zhì)細胞parp-1的表達變化與假暴露組相比,在0,0.5,1,2,4,6,8和10h各時間點,微波照射組中parp-1mrna和蛋白水平均明顯升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);隨著照射后時間的延長,微波照射組中parp-1mrna和蛋白水平水平呈緩慢下降趨勢,但在照后10h時仍顯著高于假暴露組(p0.05)。與假暴露組相比,γ射線組的parp-1mrna水平在僅在照射后的0,0.5,1,2和4小時表達升高(p0.05),蛋白水平在照射后的0,0.5和1小時升高,其他時間點均無統(tǒng)計學(xué)意義。表明,120μw/cm2,900mhz微波照射能夠誘導(dǎo)小鼠骨髓基質(zhì)細胞parp-1mrna及蛋白水平在一段時間內(nèi)表達上調(diào)。3.parp-1在微波拮抗γ射線致小鼠骨髓基質(zhì)細胞dna損傷中的作用(1)與對照組相比,微波照射組parp-1mrna和蛋白水平明顯升高(p0.001);加入3-ab預(yù)處理后,微波誘導(dǎo)的parp-1mrna和蛋白表達上調(diào)程度減小(p0.01)。(2)與對照組相比,微波照射組、微波+3-ab組的彗星tl、tm均無顯著差異(p0.05),γ射線組彗星的tl、tm明顯增大(p0.0001),說明微波輻照以及parp-1抑制劑3-ab本身對dna損傷無明顯影響,而γ射線暴露可引起明顯的遺傳物質(zhì)損傷。(3)與單獨γ射線組相比,微波復(fù)合組預(yù)先給予微波照射可明顯減輕隨后γ射線造成的dna損傷(p0.001),微波+3-ab+γ組加入3-ab預(yù)處理后,由于3-ab的拮抗作用,微波誘導(dǎo)的parp-1表達上調(diào)程度降低,同時微波對γ射線造成的dna損傷的拮抗程度也隨之下降,其彗星tl、tm較微波復(fù)合組明顯增大(p0.001)。4.parp-1在900mhz微波輻射誘導(dǎo)細胞dna損傷修復(fù)能力增強中的作用(1)在0~120min,各時點單純γ射線組彗星tl、tm及parp-1水平與相應(yīng)時點假暴露復(fù)合組相比均無明顯變化(p0.05),說明微波假暴露對parp-1表達和dna損傷修復(fù)進程均沒有明顯影響;(2)與對照組相比,發(fā)現(xiàn)γ射線組、假暴露復(fù)合組、微波復(fù)合組和微波+3-ab+γ組的彗星tl及tm均顯著升高,但與單純γ組相比,微波復(fù)合組各時間點parp-1mrna及蛋白水平均明顯升高(p0.0001),同時dna損傷修復(fù)速度加快(p0.0001);而在微波照射時給予3-ab抑制劑預(yù)處理,發(fā)現(xiàn)微波+3-AB組各時間點PARP-1 mRNA及蛋白水平上調(diào)水平明顯降低(p0.0001),隨后暴露于γ射線后發(fā)現(xiàn),微波+3-AB+γ組較微波復(fù)合組DNA損傷修復(fù)速度明顯減慢(p0.0001),說明PARP-1在DNA的損傷修復(fù)中起作用。結(jié)論:1.預(yù)先給予120μW/cm2,900MHz微波輻射能夠減輕γ射線致小鼠骨髓基質(zhì)細胞的DNA損傷,誘導(dǎo)細胞產(chǎn)生適應(yīng)性反應(yīng)。2.120μW/cm2,900MHz微波輻射能夠誘導(dǎo)小鼠骨髓基質(zhì)細胞PARP-1的表達,提高DNA損傷修復(fù)能力,加快DNA損傷修復(fù)速度,這可能是低劑量微波輻射誘導(dǎo)適應(yīng)性反應(yīng)的機制之一。
【關(guān)鍵詞】：微波 多聚(ADP-核糖)聚合酶-1(PARP-1) γ射線 適應(yīng)性反應(yīng) DNA損傷 小鼠骨髓基質(zhì)細胞
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R594.8
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• Abstract8-13
• 引言13-17
• 第一部分 建立 900MHz微波輻射誘導(dǎo)小鼠骨髓基質(zhì)細胞適應(yīng)性反應(yīng)模型17-29
• 1. 材料與方法17-23
• 1.1 試劑及儀器17-19
• 1.2 輻照條件19-21
• 1.3 原代小鼠骨髓基質(zhì)細胞的制備與培養(yǎng)21
• 1.4 細胞處理21-22
• 1.5 小鼠骨髓基質(zhì)細胞堿性單細胞凝膠電泳試驗22-23
• 1.6 統(tǒng)計分析23
• 2. 結(jié)果23-26
• 3. 討論26-29
• 第二部分 900MHz微波輻射誘導(dǎo)小鼠骨髓基質(zhì)細胞PARP-1 表達的變化29-41
• 1. 材料與方法29-35
• 1.1 試劑及儀器29-30
• 1.2 輻照條件30-31
• 1.3 原代小鼠骨髓基質(zhì)細胞的制備與培養(yǎng)31
• 1.4 細胞處理31
• 1.5 Western Blot檢測蛋白表達水平31-33
• 1.6 RT-PCR檢測PARP-1 mRNA表達水平33-35
• 1.7 統(tǒng)計分析35
• 2. 結(jié)果35-38
• 3. 討論38-41
• 第三部分 PARP-1 在微波拮抗 γ 射線致小鼠骨髓基質(zhì)細胞DNA損傷中的作用41-48
• 1. 材料和方法41-42
• 1.1 試劑及儀器41
• 1.2 輻照條件41
• 1.3 原代骨髓基質(zhì)細胞的制備與培養(yǎng)41
• 1.4 細胞處理41-42
• 1.5 小鼠骨髓基質(zhì)細胞堿性單細胞凝膠電泳試驗42
• 1.6 Western Blot檢測PARP-1 蛋白表達水平42
• 1.7 RT-PCR檢測PARP-1 mRNA表達水平42
• 1.8 統(tǒng)計分析42
• 2. 結(jié)果42-46
• 3. 討論46-48
• 第四部分 PARP-1 在 900MHz微波輻射誘導(dǎo)細胞DNA損傷修復(fù)能力增強中的作用48-59
• 1. 材料和方法48-50
• 1.1 試劑及儀器48
• 1.2 輻照條件48
• 1.3 原代骨髓基質(zhì)細胞的制備和培養(yǎng)48
• 1.4 細胞處理48-49
• 1.5 小鼠骨髓基質(zhì)細胞堿性單細胞凝膠電泳試驗49
• 1.6 Western Blot檢測蛋白表達49
• 1.7 RT-PCR檢測PARP-1 mRNA表達水平49
• 1.8 統(tǒng)計分析49-50
• 2. 結(jié)果50-57
• 3. 討論57-59
• 結(jié)論59-60
• 參考文獻60-69
• 綜述69-79
• 參考文獻73-79
• 研究生期間發(fā)表的文章及科研經(jīng)歷79-81
• 中英文縮略語對照表81-83
• 致謝83-84

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