本文關(guān)鍵詞：MiR-150介導(dǎo)CXCR4調(diào)控糖尿病腎病間充質(zhì)干細(xì)胞歸巢

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【摘要】：目的:探討miR-150對DN間充質(zhì)干細(xì)胞趨化歸巢的影響是否是通過靶向調(diào)控CXCR4/SDF-1信號通路實現(xiàn)方法:提取C57BL/6J小鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,通過成骨,成脂誘導(dǎo)及表面分子鑒定建立原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞系。Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染miR-150 mimic,miR-150 inhibit及control至原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,通過RT-PCR技術(shù)檢測骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞miR-150的表達(dá)情況。通過western-blot檢測CXCR4和SDF-1蛋白的表達(dá),采用生物信息學(xué)軟件檢測miR-150的靶基因,通過transwell實驗和劃痕實驗檢測骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移;移植已構(gòu)建好的miR-150慢病毒表達(dá)載體至DN小鼠,檢測小鼠的24小時尿蛋白,血糖,腎臟比重;HE染色觀察腎臟的形態(tài)變化,western-blot檢測腎臟指標(biāo)蛋白的表達(dá)。結(jié)果:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞CD29,CD90陽性表達(dá)(97±2.25%)、(99±0.6%),CD45呈陰性表達(dá)(17±4.5%),并且可向脂肪細(xì)胞、骨細(xì)胞分化,符合干細(xì)胞特性。DN組骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞miR-150的表達(dá)較Normal組顯著降低(p㩳0.05),DN組小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中遷移相關(guān)蛋白CXCR4和SDF-1表達(dá)均顯著高于正常小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(p㩳0.05);生物信息學(xué)研究發(fā)現(xiàn)CXCR4含有miR-150的結(jié)合位點,且在多個物種中呈高度保守。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中過表達(dá)mi R-150后CXCR4表達(dá)水平明顯下降(p㩳0.05),而抑制miR-150的表達(dá)CXCR4表達(dá)顯著增加(p㩳0.05);Transwell遷移實驗和劃痕實驗發(fā)現(xiàn),過表達(dá)miR-150能顯著抑制骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞遷移,抑制miR-150后細(xì)胞遷移能力提高;尾靜脈注射移植感染miR-150慢病毒的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞入DN小鼠,治療4周后,mi R-150 inhibitor-MSC組小鼠尿蛋白明顯低于DN未治療組,血糖也比DN組小鼠明顯下降,腎臟指數(shù)同樣比DN組有所降低(p㩳0.05),HE染色發(fā)現(xiàn)miR-150 inhibitor-MSC組腎臟組織病理形態(tài)學(xué)明顯改善。Western-blot檢測發(fā)現(xiàn)腎臟組織中DN組高表達(dá)CXCR4/SDF-1蛋白,miR-150 inhibitor-MSC治療后CXCR4和SDF-1蛋白表達(dá)降低(p㩳0.05)。結(jié)論:抑制miR-150的表達(dá)會引起CXCR4表達(dá)增加,從而刺激骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞歸巢,修復(fù)受損的腎臟組織。
【關(guān)鍵詞】：miR-150 糖尿病腎病 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 歸巢
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R587.2;R692.9
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 第一部分 C57BL/6J小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞提取與鑒定11-18
• 1 實驗材料11-12
• 2 實驗方法12-13
• 3 實驗結(jié)果13-16
• 4 討論16-17
• 結(jié)論17-18
• 第二部分 miR-150 通過CXCR4 調(diào)控糖尿病腎病BMSCs遷移18-30
• 1 實驗材料與方法18-19
• 2 實驗方法19-23
• 3 實驗結(jié)果23-27
• 4 討論27-28
• 結(jié)論28-30
• 第三部分 miR-150 調(diào)控骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向db/db小鼠腎臟歸巢30-39
• 1 實驗材料30-31
• 2 實驗方法31-33
• 3 結(jié)果33-37
• 4 討論37-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 文獻(xiàn)綜述42-52
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 致謝52-53
• 研究生期間發(fā)表論文53

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