本文關(guān)鍵詞：高糖對(duì)人外周血晚期內(nèi)皮祖細(xì)胞的影響及記憶效應(yīng)

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【摘要】：研究背景及目的內(nèi)皮祖細(xì)胞(Endothelial Progenitor Cells,EPCs)是一類起源于骨髓,在循環(huán)血中少量存在,并能夠在外周血中增殖、分化成為血管內(nèi)皮細(xì)胞(Endothelial cell,EC)的干、祖細(xì)胞性質(zhì)的內(nèi)皮前體細(xì)胞。血管內(nèi)皮功能紊亂是糖尿病血管病變發(fā)生發(fā)展的重要始動(dòng)因素,高糖環(huán)境會(huì)導(dǎo)致EPCs遷移、增殖、分化、成管等能力下降,EC功能紊亂,引起一系列血管并發(fā)癥。既往研究表明,早期積極控制血糖水平,雖可以延緩糖尿病血管病變的發(fā)展,但最終收益不佳,患者仍有較高的發(fā)生糖尿病血管病變的風(fēng)險(xiǎn)。我們從健康成人外周血中分離獲取EPCs,培養(yǎng)、鑒定出晚期EPCs,模擬構(gòu)建高糖代謝記憶,從晚期EPCs的黏附、增殖、遷移、成管等功能方面,探究該類細(xì)胞是否存在高糖代謝記憶現(xiàn)象,為臨床早期干預(yù)糖尿病血管病變的發(fā)生提供理論、實(shí)際依據(jù),也為糖尿病血管病變的治療提供新思路。研究方法本實(shí)驗(yàn)采集健康成人外周血,行密度梯度離心法,分離獲取單個(gè)核細(xì)胞(Mononuclear cell,MNC),用EPCs專用培養(yǎng)基對(duì)分離得到的細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng),觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。待細(xì)胞培養(yǎng)至出現(xiàn)立體鵝卵石樣形態(tài)時(shí),行細(xì)胞傳代,同時(shí)行細(xì)胞免疫化學(xué)染色,測(cè)定該時(shí)期細(xì)胞CD31、CD34、CD133、VEGFR-2(KDR/CD309/Flk-1)表面標(biāo)志物的表達(dá)情況,并檢測(cè)該時(shí)期細(xì)胞對(duì)乙�；兔芏戎鞍�(Ac-LDL)的攝取及對(duì)荊豆凝集素(UEA-1)的結(jié)合情況。隨后建立高糖代謝記憶模型,分3組處理細(xì)胞,即:正糖組(5.5mmol/L普通EGM-2培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞6天),高糖組(30mmol/L高糖EGM-2培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞6天),記憶組(30mmol/L高糖EGM-2培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞6天+5.55mmol/L普通EGM-2培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞6天),分別采用黏附能力測(cè)定實(shí)驗(yàn)、Transwell小室實(shí)驗(yàn)、二苯基四氮唑溴鹽(MTT)比色法、成管實(shí)驗(yàn),測(cè)定不同組細(xì)胞的黏附、遷移、增殖、成管情況,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果1.從人外周血中新分離的單個(gè)核細(xì)胞呈亮圓形,懸浮于培養(yǎng)基。體外培養(yǎng)4天,細(xì)胞多貼壁,體積增大,并開(kāi)始出現(xiàn)長(zhǎng)梭形。細(xì)胞培養(yǎng)14天左右開(kāi)始呈現(xiàn)出立體的鵝卵石樣形態(tài),該時(shí)期細(xì)胞增殖能力旺盛,可以繼續(xù)進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。此時(shí)細(xì)胞高表達(dá)CD31、CD34、CD133、VEGFR-2(KDR/CD309/Flk-1),并可以攝取乙�；兔芏戎鞍�,結(jié)合荊豆凝集素,提示該類細(xì)胞為正在增殖分化的晚期EPCs。2.體外培養(yǎng)得到的晚期EPCs,經(jīng)高糖培養(yǎng)基(糖濃度為30mmol/L)作用一定時(shí)間(6天)后,其黏附、增殖、遷移、成管能力,均較正常糖濃度培養(yǎng)基(5.55mmol/L)培養(yǎng)條件的細(xì)胞下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.晚期EPCs用一定糖濃度培養(yǎng)基(30mmol/L)培養(yǎng)一定時(shí)間(6天),再轉(zhuǎn)為正常糖濃度培養(yǎng)基(5.55mmol/L)培養(yǎng)一定時(shí)間(6天)后,細(xì)胞功能狀態(tài)與持續(xù)高糖(30mmol/L)條件下培養(yǎng)的細(xì)胞一樣受到損害,提示晚期EPCs可能存在高糖代謝記憶現(xiàn)象。結(jié)論1.采用密度梯度離心法可以從人外周血中分離培養(yǎng)出晚期EPCs2.經(jīng)高糖作用一定時(shí)間后,晚期EPCs黏附、增殖、遷移、成管能力下降3.晚期EPCs在受到高糖作用一定時(shí)間后,即使后續(xù)糾正糖濃度,細(xì)胞的功能狀態(tài)仍然受到損害,晚期EPCs可能存在高糖代謝記憶現(xiàn)象。
【關(guān)鍵詞】：晚期內(nèi)皮祖細(xì)胞 密度梯度離心法 高糖代謝記憶
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.2
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-14
• 1 材料與方法14-21
• 2 結(jié)果21-29
• 3 討論29-33
• 4 結(jié)論33-35
• 參考文獻(xiàn)35-40
• 文獻(xiàn)綜述40-49
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 致謝49-50
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況50

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中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李燕,高平進(jìn),朱鼎良;內(nèi)皮祖細(xì)胞研究進(jìn)展[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2002年03期

2 孫燕,夏春林,何炎,施嬋宏,萬(wàn)明輝;體外培養(yǎng)獲取高純度O-2A祖細(xì)胞[J];解剖學(xué)研究;2002年04期

3 袁紅豐;內(nèi)皮祖細(xì)胞研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).輸血及血液學(xué)分冊(cè);2002年06期

4 楊申淼,劉開(kāi)彥,陸道培;外周血造血干/祖細(xì)胞動(dòng)員與采集時(shí)動(dòng)態(tài)快速監(jiān)測(cè)造血祖細(xì)胞的意義[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2003年03期

5 孫燕,王R，

本文編號(hào)：883944