本文關(guān)鍵詞：3-甲基腺嘌呤對(duì)急進(jìn)高原大鼠腸上皮細(xì)胞損傷自噬影響的研究

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【摘要】：目的:探討自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-MA)對(duì)急進(jìn)高原缺氧大鼠腸上皮細(xì)胞自噬水平及損傷程度的影響。方法:以體重在180-280克,年齡在6-9周的50只健康雄性Wister大鼠作為研究對(duì)象,隨機(jī)分成:A組(對(duì)照組),B組(急進(jìn)高原缺氧24h組),C組(急進(jìn)高原缺氧24h 3-MA組),D組(急進(jìn)高原缺氧48h組),E組(急進(jìn)高原缺氧48h 3-MA組)。除A組外,其余4組在海拔高度5000 m低壓氧艙環(huán)境下建立急進(jìn)高原缺氧大鼠腸上皮細(xì)胞損傷模型,預(yù)先篩選出自噬抑制劑3-MA的最佳作用濃度,并于模型建立前半小時(shí)給予C組、E組腹腔注射該濃度的3-MA(20mg/kg,溶于1ml生理鹽水中),同時(shí)給予A組、B組、D組腹腔注射1ml 0.9%生理鹽水,肉眼觀察各組大鼠的行為學(xué)改變,HE染色分析大鼠腸組織的損傷程度,透射電鏡觀察自噬體結(jié)構(gòu)的表達(dá),免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白(LC-3、Beclin-1)的表達(dá),RT-PCR方法檢測(cè)(LC-3、Beclin-1)mRNA的表達(dá)情況。結(jié)果:(1)3-MA在濃度為20 mg/kg具有明顯的腸上皮細(xì)胞自噬抑制作用;(2)腸組織病理?yè)p傷級(jí)別評(píng)分示:A組大鼠腸組織基本正常(腸道病理?yè)p傷級(jí)別得分為1.1±0.3);與A組相比,B-E組大鼠腸組織均有不同程度的病理性損傷(腸道病理?yè)p傷級(jí)別得分分別為3.1±0.6、4.5±0.5、2.6±0.5、3.8±0.4),且差異顯著(P0.05);3-MA組(C、E組)較模型組(B、D組)腸組織的病理性損傷級(jí)別明顯增加(P0.01);(3)透射電鏡下可見(jiàn):模型組(B、D組)腸上皮細(xì)胞均可見(jiàn)自噬體結(jié)構(gòu),而3-MA組(C、E組)自噬體這種雙層膜結(jié)構(gòu)小體的數(shù)量則相對(duì)明顯減少;(4)RT-PCR及免疫組化結(jié)果提示:與平原組相比,模型組LC-3、Beclin-1自噬相關(guān)蛋白及mRNA表達(dá)均明顯上調(diào)(P0.05);而與模型組相比,3-MA組LC-3、Beclin-1蛋白和mRN A表達(dá)均顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論:(1)3-MA可加重急進(jìn)高原缺氧腸上皮細(xì)胞損傷,原因之一可能與其明顯降低細(xì)胞自噬水平有關(guān);(2)細(xì)胞自噬可能是急進(jìn)高原缺氧腸上皮細(xì)胞損傷過(guò)程中的保護(hù)因素。
【關(guān)鍵詞】：高原 腸上皮細(xì)胞 缺氧 自噬 3-甲基腺嘌呤
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R594.3
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-7
• 縮略詞表7-11
• 前言11-17
• 一、材料與方法17-24
• 1.1 材料17-18
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物17
• 1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑及藥品17
• 1.1.3 儀器17-18
• 1.2 方法18-24
• 1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組18
• 1.2.2 模型建立及給藥18-19
• 1.2.3 待測(cè)腸組織收集19
• 1.2.4 行為學(xué)觀察19
• 1.2.5 腸組織HE染色19-20
• 1.2.6 采用SABC方法進(jìn)行免疫組化20-21
• 1.2.7 透射電鏡檢測(cè)自噬體結(jié)構(gòu)21
• 1.2.8 RT-PCR方法檢測(cè)LC3、Beclin-1 基因的表達(dá)21-23
• 1.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析23-24
• 二、結(jié)果24-30
• 2.1 行為學(xué)改變24
• 2.2 腸組織病理學(xué)改變24-26
• 2.3 免疫組化結(jié)果26-28
• 2.4 自噬體結(jié)構(gòu)觀察28
• 2.5 RT-PCR結(jié)果28-30
• 三、討論30-33
• 四、結(jié)論33
• 五、不足與展望33-34
• 參考文獻(xiàn)34-39
• 附：綜述39-48
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 在學(xué)期間的研究成果48-49
• 致謝49

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