本文關鍵詞：3-甲基腺嘌呤對急進高原大鼠腸上皮細胞損傷自噬影響的研究

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【摘要】：目的:探討自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-MA)對急進高原缺氧大鼠腸上皮細胞自噬水平及損傷程度的影響。方法:以體重在180-280克,年齡在6-9周的50只健康雄性Wister大鼠作為研究對象,隨機分成:A組(對照組),B組(急進高原缺氧24h組),C組(急進高原缺氧24h 3-MA組),D組(急進高原缺氧48h組),E組(急進高原缺氧48h 3-MA組)。除A組外,其余4組在海拔高度5000 m低壓氧艙環(huán)境下建立急進高原缺氧大鼠腸上皮細胞損傷模型,預先篩選出自噬抑制劑3-MA的最佳作用濃度,并于模型建立前半小時給予C組、E組腹腔注射該濃度的3-MA(20mg/kg,溶于1ml生理鹽水中),同時給予A組、B組、D組腹腔注射1ml 0.9%生理鹽水,肉眼觀察各組大鼠的行為學改變,HE染色分析大鼠腸組織的損傷程度,透射電鏡觀察自噬體結構的表達,免疫組織化學方法檢測自噬相關蛋白(LC-3、Beclin-1)的表達,RT-PCR方法檢測(LC-3、Beclin-1)mRNA的表達情況。結果:(1)3-MA在濃度為20 mg/kg具有明顯的腸上皮細胞自噬抑制作用;(2)腸組織病理損傷級別評分示:A組大鼠腸組織基本正常(腸道病理損傷級別得分為1.1±0.3);與A組相比,B-E組大鼠腸組織均有不同程度的病理性損傷(腸道病理損傷級別得分分別為3.1±0.6、4.5±0.5、2.6±0.5、3.8±0.4),且差異顯著(P0.05);3-MA組(C、E組)較模型組(B、D組)腸組織的病理性損傷級別明顯增加(P0.01);(3)透射電鏡下可見:模型組(B、D組)腸上皮細胞均可見自噬體結構,而3-MA組(C、E組)自噬體這種雙層膜結構小體的數(shù)量則相對明顯減少;(4)RT-PCR及免疫組化結果提示:與平原組相比,模型組LC-3、Beclin-1自噬相關蛋白及mRNA表達均明顯上調(P0.05);而與模型組相比,3-MA組LC-3、Beclin-1蛋白和mRN A表達均顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。結論:(1)3-MA可加重急進高原缺氧腸上皮細胞損傷,原因之一可能與其明顯降低細胞自噬水平有關;(2)細胞自噬可能是急進高原缺氧腸上皮細胞損傷過程中的保護因素。
【關鍵詞】：高原 腸上皮細胞 缺氧 自噬 3-甲基腺嘌呤
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R594.3
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-7
• 縮略詞表7-11
• 前言11-17
• 一、材料與方法17-24
• 1.1 材料17-18
• 1.1.1 實驗動物17
• 1.1.2 主要實驗試劑及藥品17
• 1.1.3 儀器17-18
• 1.2 方法18-24
• 1.2.1 實驗動物分組18
• 1.2.2 模型建立及給藥18-19
• 1.2.3 待測腸組織收集19
• 1.2.4 行為學觀察19
• 1.2.5 腸組織HE染色19-20
• 1.2.6 采用SABC方法進行免疫組化20-21
• 1.2.7 透射電鏡檢測自噬體結構21
• 1.2.8 RT-PCR方法檢測LC3、Beclin-1 基因的表達21-23
• 1.2.9 統(tǒng)計學分析23-24
• 二、結果24-30
• 2.1 行為學改變24
• 2.2 腸組織病理學改變24-26
• 2.3 免疫組化結果26-28
• 2.4 自噬體結構觀察28
• 2.5 RT-PCR結果28-30
• 三、討論30-33
• 四、結論33
• 五、不足與展望33-34
• 參考文獻34-39
• 附：綜述39-48
• 參考文獻45-48
• 在學期間的研究成果48-49
• 致謝49

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本文編號：878873