本文關(guān)鍵詞：短期碘過量激活大鼠甲狀腺的Nrf2-Keap 1抗氧化防御

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【摘要】：目的氧化應(yīng)激是碘過量引起甲狀腺疾病的潛在機(jī)制之一。核因子E2-相關(guān)因子2(nuclear factor E2-related factor,Nrf2)是一個重要的轉(zhuǎn)錄因子,其對調(diào)節(jié)一些抗氧化酶的表達(dá)有重要作用,如Sulfiredoxin(Srx)和Peroxiredoxin 3(Prx 3)。在氧化應(yīng)激下,Nrf2與Kelch樣ECH相關(guān)蛋白(Keap 1)解離,從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核并激活下游的抗氧化蛋白。通過研究短期碘過量對Wistar大鼠甲狀腺內(nèi)Nrf2-Keap 1通路及其調(diào)控的抗氧化蛋白Srx和Prx 3表達(dá)的影響,探討短期碘過量對甲狀腺氧化應(yīng)激和抗氧化防御的影響。方法建立短期(7天、14天和28天)碘過量的動物模型:選用10~12周,體重280~300g的Wistar大鼠,隨機(jī)分為適碘(normal iodide,NI)攝入組,10倍高碘(10 times high iodide,10 HI)攝入組和100倍高碘(100 high iodide,100 HI)攝入組。通過飲用含不同濃度碘化鉀(potassium iodide,KI)的去離子水和喂養(yǎng)正常飼料,使三組大鼠每日攝碘量分別為7.5μg/d、75μg/d和750μg/d。測量大鼠體重,甲狀腺重量,并計算甲狀腺臟體比;采用過硫酸銨消化砷鈰催化分光光度法測定大鼠尿碘濃度;采用直接化學(xué)發(fā)光技術(shù)的競爭免疫法測定大鼠血清甲狀腺激素水平;采用特異性靶向線粒體的新型熒光染料MitoSOX,通過流式細(xì)胞術(shù)檢測大鼠甲狀腺線粒體超氧化物生成;采用western blot方法檢測蛋白Nrf2、Keap 1、Srx和Prx 3表達(dá)的變化;采用免疫熒光染色,通過共聚焦熒光顯微鏡觀察大鼠甲狀腺Nrf2,Srx的表達(dá)。結(jié)果1.甲狀腺臟體比:大鼠在NI、10 HI和100 HI攝入7天、14天和28天后,不同倍數(shù)碘對大鼠體重、甲狀腺重量和甲狀腺臟體比無明顯影響(p0.05)。2.尿碘濃度:大鼠在分別喂養(yǎng)7天、14天和28天后,與NI組相比,10 HI組和100 HI組尿碘濃度隨著碘攝入量的增加顯著增加(p0.05)。當(dāng)?shù)鈹z入量從NI增加至10 HI攝入時,尿碘排出量增加至NI組尿碘排出的10倍左右,而當(dāng)增加至100 HI攝入時,尿碘排出僅增加至NI組尿碘排出的60~80倍。3.血清甲狀腺激素水平:NI、10 HI和100 HI攝入7天、14天和28天,不同倍數(shù)碘對大鼠血清甲狀腺激素(T3、T4、FT3、FT4和TSH)水平,比值T3/T4無明顯影響(p0.05)。4.線粒體超氧化物生成:在7天、14天和28天各時間點,與NI組相比,100 HI組線粒體超氧化物產(chǎn)生明顯增加(p0.05);與10 HI組相比,100 HI組線粒體超氧化物產(chǎn)生顯著增加(p0.05)。在100 HI組,與7天相比,28天的線粒體超氧化物產(chǎn)生顯著增加(p0.05);同樣,與14天相比,28天的線粒體超氧化物產(chǎn)生也顯著增加(p0.05)。5.Western blot:在7天、14天和28天各時間點,與NI組相比,10 HI組Nrf2,Keap 1,Srx和Prx 3蛋白表達(dá)無明顯變化(p0.05);100 HI組Nrf2,Srx和Prx 3蛋白表達(dá)顯著增高(p0.05),而Keap 1在100 HI組顯著降低(p0.05)。6.免疫熒光:免疫熒光結(jié)果顯示,在7天、14天和28天100 HI組,Nrf2在細(xì)胞核中強(qiáng)表達(dá)。結(jié)論1.100 HI攝入后大鼠體內(nèi)仍有部分碘蓄積,可能是100 HI引起甲狀腺氧化應(yīng)激-抗氧化防御的基礎(chǔ)。2.短期碘過量雖可誘導(dǎo)Wistar大鼠甲狀腺細(xì)胞線粒體超氧化物生成增加,但同時激活了Nrf2-Keap 1通路上調(diào)了抗氧化蛋白Srx和Prx 3的表達(dá),表明蓄積在體內(nèi)的碘激活了甲狀腺內(nèi)的氧化應(yīng)激-抗氧化防御機(jī)制,維持了正常的甲狀腺功能。
【關(guān)鍵詞】：甲狀腺 碘過量 短期 超氧化物 核因子E2-相關(guān)因子2 過氧化物酶3 硫氧還蛋白
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R581
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 符號說明10-12
• 技術(shù)路線圖12-13
• 碘過量引起甲狀腺氧化應(yīng)激-抗氧化防御機(jī)制設(shè)想圖13-14
• 前言14-17
• 研究現(xiàn)狀、成果14-15
• 研究目的、方法15-17
• 材料和方法17-31
• 1.1 對象和方法17-22
• 1.1.1 主要試劑17-18
• 1.1.2 主要儀器18-19
• 1.1.3 主要試劑盒19
• 1.1.4 主要溶液的配制19-22
• 1.2 方法22-31
• 1.2.1 實驗對象及分組22-23
• 1.2.2 大鼠甲狀腺臟體比的測定23
• 1.2.3 大鼠尿碘濃度的測定23
• 1.2.4 大鼠血清甲狀腺激素水平的測定23-24
• 1.2.5 大鼠甲狀腺線粒體超氧化物生成的檢測24-25
• 1.2.6 Western blot檢測大鼠甲狀腺蛋白表達(dá)25-30
• 1.2.7 甲狀腺組織免疫熒光染色30-31
• 1.3 統(tǒng)計分析方法31
• 結(jié)果31-44
• 2.1 大鼠甲狀腺臟體比的測定結(jié)果31-34
• 2.1.1 大鼠體重的測定結(jié)果31-32
• 2.1.2 大鼠甲狀腺重量的測定結(jié)果32-33
• 2.1.3 大鼠甲狀腺臟體比的測定結(jié)果33-34
• 2.2 大鼠尿碘濃度的檢測結(jié)果34-36
• 2.3 大鼠血清甲狀腺激素水平的測定結(jié)果36
• 2.4 大鼠線粒體超氧化物生成的檢測結(jié)果36-38
• 2.5 Western blot檢測蛋白表達(dá)結(jié)果38-41
• 2.5.1 大鼠甲狀腺Nrf2蛋白表達(dá)的結(jié)果38-39
• 2.5.2 大鼠甲狀腺Keap 1 蛋白表達(dá)的結(jié)果39
• 2.5.3 大鼠甲狀腺Srx蛋白表達(dá)的結(jié)果39-40
• 2.5.4 大鼠甲狀腺Prx 3 蛋白表達(dá)的結(jié)果40-41
• 2.6 甲狀腺組織免疫熒光染色結(jié)果41-44
• 討論44-52
• 3.1 不同倍數(shù)高碘攝入對大鼠甲狀腺臟體比的影響44-45
• 3.2 不同倍數(shù)高碘攝入對大鼠尿碘濃度的影響45-46
• 3.3 不同倍數(shù)高碘攝入對大鼠血清甲狀腺激素水平的影響46-48
• 3.4 不同倍數(shù)高碘攝入對大鼠甲狀腺線粒體超氧化物生成的影響48-52
• 3.5.1 不同倍數(shù)高碘攝入對大鼠甲狀腺蛋白Nrf2表達(dá)的影響48-50
• 3.5.2 不同倍數(shù)高碘攝入對大鼠甲狀腺蛋白Keap 1 表達(dá)的影響50
• 3.5.3 不同倍數(shù)高碘攝入對大鼠甲狀腺蛋白Srx表達(dá)的影響50-51
• 3.5.4 不同倍數(shù)高碘攝入對大鼠甲狀腺蛋白Prx 3 表達(dá)的影響51-52
• 本實驗發(fā)現(xiàn)52-54
• 結(jié)論54-55
• 參考文獻(xiàn)55-65
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明65-67
• 綜述 過量與甲狀腺疾病的相關(guān)性研究67-79
• 綜述參考文獻(xiàn)73-79
• 致謝79-80
• 個人簡歷80

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本文編號：870701