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間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨細(xì)胞分化和免疫組織化學(xué)鑒定

發(fā)布時間:2017-09-16 22:06

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【摘要】:目的探討臍帶的間充質(zhì)干細(xì)胞分化為成骨細(xì)胞的影響因素和免疫組織化學(xué)鑒定。方法收集306例凍存的健康胎兒臍帶,采用華爾通膠組織塊貼壁法從臍帶組織中分離間充質(zhì)干細(xì)胞,利用熒光顯微鏡觀察原代細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)。臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的免疫表型和細(xì)胞周期采用免疫組織化學(xué)檢測。復(fù)蘇凍存的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,并傳代培養(yǎng)至10代。對第10代的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞進行成骨誘導(dǎo),其成骨能力分別通過鈣結(jié)節(jié)和骨涎蛋白的免疫熒光檢測以及茜素紅染色檢測來確定。結(jié)果免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,培養(yǎng)的細(xì)胞高表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞的表面標(biāo)志物CD73、CD90和CD105,但是不表達(dá)造血細(xì)胞的表面標(biāo)志物CD34和CD45。復(fù)蘇后細(xì)胞的存活率是90%。細(xì)胞周期顯示,第10代的細(xì)胞有80%處于G0/G1期,20%處于S+G2/M期。成骨細(xì)胞刺激因子誘導(dǎo)干細(xì)胞的骨涎蛋白染色呈陽性,并形成礦化的鈣結(jié)節(jié)。結(jié)論凍存的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在成骨細(xì)胞刺激因子下能被誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞,具有高度自我增殖和多向分化能力。
【作者單位】: 福建省立醫(yī)院干部特診一科;福建省立醫(yī)院內(nèi)分泌科;福建省立醫(yī)院婦產(chǎn)科;福建省立醫(yī)院病理科;
【關(guān)鍵詞】間充質(zhì)干細(xì)胞 成骨細(xì)胞 骨涎蛋白 細(xì)胞三維培養(yǎng) 免疫組織化學(xué)
【基金】:福建省自然科學(xué)基金(2016J01434,2012J01316)
【分類號】:R580
【正文快照】: 骨質(zhì)疏松癥是一種慢性疾病,其病理解剖可見骨皮質(zhì)菲薄,骨小梁稀疏萎縮,鈣離子沉積障礙,這些骨質(zhì)破壞最終導(dǎo)致脆性骨折。骨組織重建工程是利用細(xì)胞分子生物學(xué)和工程學(xué)原理,將成骨細(xì)胞與載體材料復(fù)合在體外共同培養(yǎng),構(gòu)建成細(xì)胞-載體復(fù)合骨移植材料,研發(fā)骨缺損修復(fù)和再生的生物替

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