AMD3100聯(lián)合G-CSF動(dòng)員糖尿病鼠骨髓EPCs的實(shí)驗(yàn)研究
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【摘要】:[目的]血管內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)在缺血部位的血管新生中發(fā)揮著重要的作用,糖尿病引起血管病變導(dǎo)致組織供血不足已為大家所熟知,研究在糖尿病狀態(tài)下如何較好地動(dòng)員骨髓血管內(nèi)皮祖細(xì)胞至外周循環(huán)以改善組織血供及促進(jìn)創(chuàng)面愈合具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)以糖尿病雄性小鼠(db/db male mice)為研究對(duì)象,比較AMD3100聯(lián)合G-CS F與單一使用MD3100對(duì)骨髓血管內(nèi)皮祖細(xì)胞的動(dòng)員效果,并觀察在動(dòng)員后第3d、5d、7d和10d四個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)糖尿病鼠外周血管內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量的差異。通過(guò)優(yōu)選動(dòng)員方法和時(shí)機(jī),尋找一種能有效動(dòng)員糖尿病狀態(tài)下骨髓血管內(nèi)皮祖細(xì)胞的方法,從而為自體骨髓血管內(nèi)皮祖細(xì)胞治療糖尿病并發(fā)慢性難愈合性創(chuàng)面提供一種新的研究思路和理論依據(jù)。[方法]采用AMD3100(Selleck公司,Cat No.S3013,Lot.03)、重組人粒細(xì)胞集落刺激因子注射液(rhG-CSF,協(xié)和發(fā)酵麒麟(中國(guó))制藥有限公司,生產(chǎn)批:S20140010),參考國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)介紹的劑量(AMD3100的注射劑量為6mg/kg*d-1,G-CSF的注射劑量為10Oug/kg*d-1)和方法(糖尿病鼠連續(xù)皮下注射6天)進(jìn)行骨髓血管內(nèi)皮祖細(xì)胞的動(dòng)員。選用10-11周齡的糖尿病雄性小鼠(避免雌激素的干擾)共60只,采用隨機(jī)數(shù)字表的方法將其分為A組(AMD3100+G-CSF動(dòng)員組)、B組(AMD3100+NS動(dòng)員組)和C組(NS空白對(duì)照組),各組均為20只。每組在動(dòng)員后第3d、5d、7d和10d四個(gè)時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)選擇5只糖尿病小鼠,于心臟部位采集外周血并進(jìn)行免疫熒光染色,通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD133/Flk-1雙熒光陽(yáng)性細(xì)胞在相同微升數(shù)血液樣品中所占的比例。結(jié)果取平均值用x±s(單位%)表示,統(tǒng)計(jì)學(xué)方法處理后進(jìn)行比較和分析。[結(jié)果]采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組糖尿病小鼠外周血中CD133/Flk-1雙熒光陽(yáng)性細(xì)胞比例,統(tǒng)計(jì)分析后結(jié)果如下:①C組(NS空白對(duì)照組)糖尿病小鼠在動(dòng)員后第3d、5d、7d和10d四個(gè)時(shí)間點(diǎn),其外周血中CD133/Flk-1雙熒光陽(yáng)性細(xì)胞比例無(wú)差異(p0.05)。②A組(AMD3100+G-CSF動(dòng)員組)與B組(AMD3100+NS動(dòng)員組)糖尿病小鼠在動(dòng)員后第3d、5d、7d和10d四個(gè)時(shí)間點(diǎn),其外周血中CD133/Flk-1雙熒光陽(yáng)性細(xì)胞比例有差異(p0.05),并呈現(xiàn)一定的變化趨勢(shì):在動(dòng)員后第3d、5d、7d逐漸上升,至第7d達(dá)到高峰,隨后逐漸下降。③比較A、B、C三組之間糖尿病小鼠外周血中CD133/Flk-1雙熒光陽(yáng)性細(xì)胞比例在第3d、5d、7d和10d四個(gè)時(shí)間點(diǎn)的差異,其中A組糖尿病小鼠外周血中CD133/Flk-1雙熒光陽(yáng)性細(xì)胞比例較B組高(p0.05);B組糖尿病小鼠外周血中CD133/Flk-1雙熒光陽(yáng)性細(xì)胞比例較C組高(p0.05)。[結(jié)論]AMD3100聯(lián)合G-CSF與單一使用AMD3100對(duì)糖尿病狀態(tài)下骨髓血管內(nèi)皮祖細(xì)胞均有動(dòng)員作用;AMD3100聯(lián)合G-CSF與單一使用AMD3100兩種動(dòng)員方法下,糖尿病小鼠外周血管內(nèi)皮祖細(xì)胞比例呈現(xiàn)一定的變化趨勢(shì):在動(dòng)員后的第3d、5d、7d逐漸上升,至第7d達(dá)到高峰,隨后逐漸下降;AMD3100聯(lián)合G-CSF的動(dòng)員骨髓血管內(nèi)皮祖細(xì)胞的效果明顯強(qiáng)于單一使用AMD3100的動(dòng)員效果。
【關(guān)鍵詞】:血管內(nèi)皮祖細(xì)胞 AMD3100 粒細(xì)胞集落刺激因子 聯(lián)合動(dòng)員
【學(xué)位授予單位】:昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號(hào)】:R587.1
【目錄】:
- 英文縮寫一覽表(以字母順序排列)5-7
- 中文摘要7-9
- 英文摘要9-12
- 前言12-16
- 材料與方法16-20
- 結(jié)果20-28
- 討論28-35
- 結(jié)論35
- 不足之處35-36
- 參考文獻(xiàn)36-43
- 綜述43-52
- 參考文獻(xiàn)48-52
- 攻讀學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果52-53
- 致謝53
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,本文編號(hào):822076
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