本文關鍵詞：早期糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中蛋白激酶C與內皮素系統(tǒng)、核因子-kB的相關性研究

  更多相關文章： 糖尿病視網(wǎng)膜病變 蛋白激酶C 內皮素系統(tǒng) 核因子-kB

【摘要】：目的:觀察在糖尿病早期階段視網(wǎng)膜內蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)活性及各亞型蛋白表達的情況,并連續(xù)動態(tài)觀察糖尿病早期狀態(tài)下視網(wǎng)膜內皮素(endothelin,ET)系統(tǒng)及核因子-Kappa B(nuclear factor-kappa B,NF-k B)的表達變化。觀察非選擇性PKC抑制劑GF109203X對視網(wǎng)膜內ET系統(tǒng)及NF-k B表達的影響,以探討PKC在糖尿病早期誘導視網(wǎng)膜細胞損傷的作用機制。方法:采用Sprague Dawley(SD)大鼠為實驗對象,使用一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)的方法誘導糖尿病大鼠動物模型。酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunoabsorbent assay,ELISA)檢測12周病程的糖尿病大鼠視網(wǎng)膜內PKC活性。免疫印跡法(western blottiog,WB)檢測12周病程的糖尿病大鼠視網(wǎng)膜內相關PKC亞型的蛋白表達情況。實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應法(quantitative real time-polymerase chain reaction,QRT-PCR)檢測不同病程的糖尿病大鼠視網(wǎng)膜ET系統(tǒng)和NF-k B p65 m RNA的表達情況。對12周病程的糖尿病大鼠玻璃體腔內注射不同濃度(10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L)的非選擇性PKC抑制劑后,運用QRT-PCR檢測ET系統(tǒng)及NF-k B m RNA表達的變化。結果:1、12周病程的糖尿病大鼠視網(wǎng)膜組織內細胞膜組份的PKC活性較正常對照組明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),細胞漿組份的PKC活性無明顯變化(P0.05)。2、12周病程的糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中,PKC-α、β1、β2、δ表達較正常對照組增多,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05),其中以PKC-β1、β2最為明顯,PKC-ε無明顯變化(P0.05)。3、在糖尿病早期大鼠視網(wǎng)膜組織內ETs及NF-k B的m RNA表達均較正常對照組明顯增加,其中ET-1及NF-k B在2周既已出現(xiàn)明顯升高,ET-3及ET-A在第4周檢測出m RNA表達水平的升高,而ET-B m RNA的升高出現(xiàn)在第12周,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.01)。4、對12周病程的糖尿病大鼠進行玻璃體注射10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L的PKC抑制劑后,視網(wǎng)膜內ETs及NF-k B p65 m RNA表達均不同程度的降低,且呈劑量依賴性反應,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.01)。結論:1、在糖尿病早期大鼠視網(wǎng)膜組織內即已出現(xiàn)PKC的激活及ETs、NF-k B表達的增加。2、PKC抑制劑GF103209X可不同程度地降低視網(wǎng)膜內ETs及NF-k B的表達,且成劑量依賴性反應。3、在糖尿病早期階段PKC可能通過破壞ET系統(tǒng)及NF-k B的平衡狀態(tài)從而誘導早期糖尿病視網(wǎng)膜細胞的損傷。
【關鍵詞】：糖尿病視網(wǎng)膜病變 蛋白激酶C 內皮素系統(tǒng) 核因子-kB
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R587.2;R774.1
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞表9-11
• 第1章 引言11-15
• 第2章 材料與方法15-29
• 2.1 主要材料與試劑15-17
• 2.1.1 實驗動物15
• 2.1.2 主要試劑和產(chǎn)地15-16
• 2.1.3 主要儀器設備和產(chǎn)地16-17
• 2.2 實驗方法17-29
• 2.2.1 常用試劑的配制17-19
• 2.2.2 糖尿病大鼠模型的建立19
• 2.2.3 ELISA測定視網(wǎng)膜內PKC活性19-21
• 2.2.4 Western Blot測定視網(wǎng)膜內PKC亞型21-24
• 2.2.5 視網(wǎng)膜HE染色24-25
• 2.2.6 QRT-PCR檢測視網(wǎng)膜內ET系統(tǒng)及NF-k B的mRNA表達水平25-27
• 2.2.7 PKC抑制劑GF109203X干預27-28
• 2.2.8 統(tǒng)計方法28-29
• 第3章 結果29-35
• 3.1 組間基本情況的比較29-30
• 3.2 視網(wǎng)膜HE染色結果30-31
• 3.3 PKC活性的比較31
• 3.4 PKC亞型的表達情況31-32
• 3.5 不同時間點視網(wǎng)膜內ETs及NF-k B p65 mRNA的表達情況32-34
• 3.6 不同劑量GF109203X處理后ETs及NF-k B p65 mRNA的表達34-35
• 第4章 討論35-42
• 4.1 PKC與早期糖尿病視網(wǎng)膜35-37
• 4.1.1 DAG/PKC信號通路35-36
• 4.1.2 PKC在早期糖尿病視網(wǎng)膜病變化36-37
• 4.2 PKC、ET系統(tǒng)與早期糖尿病視網(wǎng)膜37-38
• 4.3 PKC、NF-k B與早期糖尿病視網(wǎng)膜38-40
• 4.3.1 NF-k B38-39
• 4.3.2 PKC對早期糖尿病視網(wǎng)膜組織中NF-k B的影響39-40
• 4.4 總結40
• 4.5 本研究的創(chuàng)新之處40
• 4.6 本研究的不足之處40-42
• 第5章 結論與展望42-43
• 5.1 結論42
• 5.2 展望42-43
• 致謝43-44
• 參考文獻44-50
• 附圖50-53
• 攻讀學位期間的研究成果53-54
• 綜述 糖尿病視網(wǎng)膜病變的系統(tǒng)綜合性治療進展54-64
• 參考文獻60-64

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