本文關(guān)鍵詞：HIF-1α促成骨細(xì)胞IL-6、IL-8表達(dá)分子機(jī)制的研究

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【摘要】：目的:在骨組織生長發(fā)育及修復(fù)的過程中,機(jī)體血液供應(yīng)起著至關(guān)重要的作用。低氧是促進(jìn)血管生成的主要驅(qū)動力,它通過抑制低氧誘導(dǎo)因子(hypoxia-inducible factor)-1α的降解,使其聚積并轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞核內(nèi)與HIF-1β結(jié)合形成HIF-1復(fù)合物,作為轉(zhuǎn)錄因子與低氧反應(yīng)元件(hypoxia reaction element,HRE)結(jié)合,進(jìn)而激活下游靶基因血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的轉(zhuǎn)錄,從而促進(jìn)血管的生成。在生理和病理?xiàng)l件下,由于骨組織血供的減少會使骨系細(xì)胞處于低氧狀態(tài),成骨細(xì)胞位于骨小梁的表面,其首先感受骨組織內(nèi)血流的變化和氧壓力的降低。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn),低氧及模擬低氧條件下,人成骨樣MG-63細(xì)胞HIF-1α及下游靶基因VEGF的表達(dá)水平顯著增加。白細(xì)胞介素(Interleukin-6,IL)-6和IL-8作為前血管生成因子,在血管發(fā)生發(fā)展中也起重要調(diào)節(jié)作用,而成骨細(xì)胞均可分泌這兩種細(xì)胞因子。由此,我們推測HIF-1α也可能調(diào)節(jié)IL-6和IL-8的表達(dá)而在骨形成耦聯(lián)血管生成過程中發(fā)揮重要作用。本文在前期工作的基礎(chǔ)上,繼續(xù)利用人成骨樣MG-63細(xì)胞作為研究模型,探討HIF-1α對成骨細(xì)胞IL-6、IL-8表達(dá)的作用及作用機(jī)制。方法:1通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測人成骨樣MG-63細(xì)胞中IL-6、IL-8、及VEGF的基因表達(dá)水平。2酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(enzyme-linked immnosorbent assay,ELISA)法檢測MG-63細(xì)胞中IL-6、IL-8及VEGF的蛋白表達(dá)水平。3脂質(zhì)體法將含正義(sense,ss)HIF-1αc DNA的表達(dá)載體導(dǎo)入MG-63細(xì)胞,G418篩選出陽性細(xì)胞克隆,擴(kuò)大培養(yǎng)后免疫印跡(Western Blot)技術(shù)鑒定出HIF-1α高表達(dá)克隆,用于觀察內(nèi)源性過表達(dá)HIF-1α對成骨細(xì)胞IL-6、IL-8及VEGF表達(dá)的作用。4采用熒光素酶報(bào)告基因試驗(yàn)檢測低氧條件下,過表達(dá)HIF-1α對MG-63細(xì)胞IL-6、IL-8基因啟動子轉(zhuǎn)錄活性的影響。5利用染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)(Chromatin Immunoprecipitation,Ch IP)檢測低氧對MG-63細(xì)胞內(nèi)源性HIF-1α與IL-6、IL-8基因啟動子結(jié)合能力的影響。結(jié)果:1在低氧及內(nèi)源性過表達(dá)HIF-1α條件下,與對照組相比,MG-63細(xì)胞中IL-6、IL-8及VEGF m RNA表達(dá)水平明顯提高。2在低氧及內(nèi)源性過表達(dá)HIF-1α條件下,與對照組相比,MG-63細(xì)胞IL-6、IL-8及VEGF分子的蛋白分泌水平明顯增加。3低氧條件下,過表達(dá)HIF-1α能夠提高M(jìn)G-63細(xì)胞IL-6、IL-8基因啟動子的轉(zhuǎn)錄活性。4 MG-63細(xì)胞IL-6、IL-8啟動子區(qū)具有HIF-1α的結(jié)合位點(diǎn),提示二者亦是HIF-1α下游的靶基因,且低氧能夠促進(jìn)HIF-1α與IL-6、IL-8基因啟動子的結(jié)合。結(jié)論:1外源性(低氧)和內(nèi)源性過表達(dá)HIF-1α均可上調(diào)成骨細(xì)胞IL-6、IL-8及VEGF的表達(dá)。2 HIF-1α是通過與IL-6、IL-8分子的基因啟動子結(jié)合來促進(jìn)二者轉(zhuǎn)錄進(jìn)而上調(diào)二者表達(dá)的。
【關(guān)鍵詞】：成骨細(xì)胞 低氧誘導(dǎo)因子(HIF)-1α 白細(xì)胞介素6(IL-6) 白細(xì)胞介素8(IL-8) 血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R580
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文縮寫9-11
• 前言11-14
• 材料與方法14-38
• 結(jié)果38-42
• 附圖42-51
• 討論51-55
• 結(jié)論55-56
• 參考文獻(xiàn)56-60
• 綜述 低氧誘導(dǎo)因子調(diào)控機(jī)制的相關(guān)研究進(jìn)展60-69
• 參考文獻(xiàn)66-69
• 致謝69-70
• 個人簡歷70

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 王彥梅;鄒多宏;何家才;;HIF-1在骨缺損修復(fù)中的作用[J];口腔醫(yī)學(xué)研究;2014年02期

2 牛廷獻(xiàn);史智勇;羅建軍;;缺血缺氧腦損傷大鼠IL-6和TNF-α的變化及其臨床意義[J];放射免疫學(xué)雜志;2009年06期

3 李啟芳,戴愛國;Hypoxia-inducible factor-1 alpha regulates the role of vascular endothelial growth factor on pulmonary arteries of rats with hypoxia-induced pulmonary hypertension[J];Chinese Medical Journal;2004年07期

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本文編號：808079