HIF-1α促成骨細胞IL-6、IL-8表達分子機制的研究
發(fā)布時間:2017-09-07 07:02
本文關鍵詞:HIF-1α促成骨細胞IL-6、IL-8表達分子機制的研究
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【摘要】:目的:在骨組織生長發(fā)育及修復的過程中,機體血液供應起著至關重要的作用。低氧是促進血管生成的主要驅動力,它通過抑制低氧誘導因子(hypoxia-inducible factor)-1α的降解,使其聚積并轉運至細胞核內(nèi)與HIF-1β結合形成HIF-1復合物,作為轉錄因子與低氧反應元件(hypoxia reaction element,HRE)結合,進而激活下游靶基因血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的轉錄,從而促進血管的生成。在生理和病理條件下,由于骨組織血供的減少會使骨系細胞處于低氧狀態(tài),成骨細胞位于骨小梁的表面,其首先感受骨組織內(nèi)血流的變化和氧壓力的降低。本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn),低氧及模擬低氧條件下,人成骨樣MG-63細胞HIF-1α及下游靶基因VEGF的表達水平顯著增加。白細胞介素(Interleukin-6,IL)-6和IL-8作為前血管生成因子,在血管發(fā)生發(fā)展中也起重要調節(jié)作用,而成骨細胞均可分泌這兩種細胞因子。由此,我們推測HIF-1α也可能調節(jié)IL-6和IL-8的表達而在骨形成耦聯(lián)血管生成過程中發(fā)揮重要作用。本文在前期工作的基礎上,繼續(xù)利用人成骨樣MG-63細胞作為研究模型,探討HIF-1α對成骨細胞IL-6、IL-8表達的作用及作用機制。方法:1通過逆轉錄聚合酶鏈式反應(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測人成骨樣MG-63細胞中IL-6、IL-8、及VEGF的基因表達水平。2酶聯(lián)免疫吸附實驗(enzyme-linked immnosorbent assay,ELISA)法檢測MG-63細胞中IL-6、IL-8及VEGF的蛋白表達水平。3脂質體法將含正義(sense,ss)HIF-1αc DNA的表達載體導入MG-63細胞,G418篩選出陽性細胞克隆,擴大培養(yǎng)后免疫印跡(Western Blot)技術鑒定出HIF-1α高表達克隆,用于觀察內(nèi)源性過表達HIF-1α對成骨細胞IL-6、IL-8及VEGF表達的作用。4采用熒光素酶報告基因試驗檢測低氧條件下,過表達HIF-1α對MG-63細胞IL-6、IL-8基因啟動子轉錄活性的影響。5利用染色質免疫共沉淀技術(Chromatin Immunoprecipitation,Ch IP)檢測低氧對MG-63細胞內(nèi)源性HIF-1α與IL-6、IL-8基因啟動子結合能力的影響。結果:1在低氧及內(nèi)源性過表達HIF-1α條件下,與對照組相比,MG-63細胞中IL-6、IL-8及VEGF m RNA表達水平明顯提高。2在低氧及內(nèi)源性過表達HIF-1α條件下,與對照組相比,MG-63細胞IL-6、IL-8及VEGF分子的蛋白分泌水平明顯增加。3低氧條件下,過表達HIF-1α能夠提高MG-63細胞IL-6、IL-8基因啟動子的轉錄活性。4 MG-63細胞IL-6、IL-8啟動子區(qū)具有HIF-1α的結合位點,提示二者亦是HIF-1α下游的靶基因,且低氧能夠促進HIF-1α與IL-6、IL-8基因啟動子的結合。結論:1外源性(低氧)和內(nèi)源性過表達HIF-1α均可上調成骨細胞IL-6、IL-8及VEGF的表達。2 HIF-1α是通過與IL-6、IL-8分子的基因啟動子結合來促進二者轉錄進而上調二者表達的。
【關鍵詞】:成骨細胞 低氧誘導因子(HIF)-1α 白細胞介素6(IL-6) 白細胞介素8(IL-8) 血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)
【學位授予單位】:河北醫(yī)科大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2016
【分類號】:R580
【目錄】:
- 中文摘要4-6
- 英文摘要6-9
- 英文縮寫9-11
- 前言11-14
- 材料與方法14-38
- 結果38-42
- 附圖42-51
- 討論51-55
- 結論55-56
- 參考文獻56-60
- 綜述 低氧誘導因子調控機制的相關研究進展60-69
- 參考文獻66-69
- 致謝69-70
- 個人簡歷70
【參考文獻】
中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條
1 王彥梅;鄒多宏;何家才;;HIF-1在骨缺損修復中的作用[J];口腔醫(yī)學研究;2014年02期
2 牛廷獻;史智勇;羅建軍;;缺血缺氧腦損傷大鼠IL-6和TNF-α的變化及其臨床意義[J];放射免疫學雜志;2009年06期
3 李啟芳,戴愛國;Hypoxia-inducible factor-1 alpha regulates the role of vascular endothelial growth factor on pulmonary arteries of rats with hypoxia-induced pulmonary hypertension[J];Chinese Medical Journal;2004年07期
,本文編號:808079
本文鏈接:http://sikaile.net/yixuelunwen/nfm/808079.html
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