本文關(guān)鍵詞：氟對(duì)大鼠骨組織RBPJ及相關(guān)基因表達(dá)的影響

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【摘要】：目的:通過研究氟中毒大鼠骨組織中RBPJ、Notch3、Jag1和Hes5基因表達(dá)變化,探討Notch通路與氟骨癥關(guān)系,為氟骨癥發(fā)生機(jī)制提供理論依據(jù)。方法:成年SD大鼠24只,隨機(jī)分為3組:對(duì)照組(飲水含氟1mg/L),低氟組(飲水含氟50mg/L),高氟組(飲水含氟100 mg/L),每組8只,組內(nèi)雌雄各半。飼養(yǎng)6個(gè)月后,收集動(dòng)物尿樣,觀察氟斑牙發(fā)生情況,采用氟離子選擇電極法測(cè)定尿氟和骨氟,常規(guī)石蠟切片HE染色觀察骨組織學(xué)變化并采用圖像分析軟件測(cè)定骨組織形態(tài)學(xué)指標(biāo),免疫組化法(Immunohistochemistry,IHC)觀察成骨細(xì)胞中RBPJ、Notch3、Jag1和Hes5蛋白表達(dá)情況,免疫印跡法(Western blot)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR法(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)分別檢測(cè)骨組織RBPJ、Notch3、Jag1和Hes5蛋白與mRNA表達(dá)量。結(jié)果:1.氟骨癥大鼠模型復(fù)制成功,表現(xiàn)為染氟組出現(xiàn)不同程度氟斑牙,同時(shí)與對(duì)照組(2.00±0.34 mg/L、1753.67±184.68μg/g)比較,低氟組(11.80±1.08 mg/L、5974.76±2036.13μg/g)、高氟組(18.08±1.13 mg/L、7996.51±2669.93μg/g)大鼠尿氟和骨氟明顯升高(P0.05);且染氟組大鼠骨皮質(zhì)厚度、骨小梁寬度、骨小梁密度、成骨細(xì)胞指數(shù)明顯升高(P0.05),表現(xiàn)骨質(zhì)硬化病理改變特征。2.Western blot法檢測(cè)顯示,高氟組大鼠骨組織Notch3蛋白(0.201±0.093)顯著低于對(duì)照組(0.434±0.218,P0.05);Jag1蛋白在高氟組(0.112±0.024)大鼠的表達(dá)水平不僅明顯低于對(duì)照組(0.516±0.144),也明顯低于低氟組(0.475±0.189,P0.05);而低氟組(4.985±0.913),高氟組(4.279±1.507)大鼠RBPJ蛋白表達(dá)升高,與對(duì)照組(2.892±1.001)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);低氟組(0.147±0.039),高氟組(0.128±0.039)Hes5蛋白表達(dá)則又明顯低于對(duì)照組(0.282±0.099,P0.05)。3.采用免疫組化法觀察成骨細(xì)胞上述因子表達(dá)情況,并對(duì)陽性成骨細(xì)胞Notch3、Jag1、RBPJ、Hes5平均光密度的檢測(cè)發(fā)現(xiàn),低氟組,高氟組大鼠Notch3平均光密度(0.022±0.007,0.019±0.005)、Jag1平均光密度(0.024±0.008,0.029±0.009)水平明顯低于對(duì)照組(0.045±0.016、0.044±0.023,P0.05),而低、高氟組RBPJ平均光密度(分別為0.032±0.017,0.033±0.017)明顯高于對(duì)照組(0.021±0.013,P0.05);但染氟組與對(duì)照組之間Hes5平均光密度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.RT-qPCR法檢測(cè)骨組織內(nèi)上述因子mRNA水平,結(jié)果顯示高氟組大鼠骨組織Notch3 mRNA(0.0044±0.0040)、Jag1 mRNA(0.0057±0.0054)相對(duì)表達(dá)量明顯低于對(duì)照組(0.0116±0.0072、0.0087±0.0059,P0.05),同時(shí)高氟組大鼠骨組織Jag1 mRNA相對(duì)表達(dá)量也明顯低于低氟組(0.0066±0.0060,P0.05);而低氟組(0.0058±0.0037),高氟組(0.0055±0.0044)大鼠RBPJ mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯低于對(duì)照組(0.0122±0.0059,P0.05);但染氟組與對(duì)照組之間Hes5 mRNA相對(duì)表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5.相關(guān)性分析顯示大鼠成骨細(xì)胞中RBPJ蛋白水平與成骨細(xì)胞指數(shù)呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.465,P0.05),Notch3蛋白水平與骨皮質(zhì)厚度、骨小梁寬度、骨小梁密度、成骨細(xì)胞指數(shù)均呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.612、-0.557、-0.640、-0.716,P0.05),Jag1蛋白水平與骨小梁寬度、骨小梁密度均呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.446、-0.609,P0.05),而Hes5蛋白水平與骨小梁密度呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.452,P0.05)。結(jié)論:過量氟可能抑制骨組織Notch經(jīng)典信號(hào)通路,抑制下游靶基因表達(dá),從而減弱對(duì)成骨細(xì)胞的分化抑制作用,使成骨作用增強(qiáng),該過程可能參與氟骨癥發(fā)病機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：氟 骨組織 成骨細(xì)胞 Notch經(jīng)典通路 RBPJ
【學(xué)位授予單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R599.1
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-11
• 略縮詞表11-12
• 引言12-14
• 材料與方法14-28
• 結(jié)果28-35
• 討論35-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 綜述46-58
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 作者簡(jiǎn)歷58-59
• 致謝59-60
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集60

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