本文關(guān)鍵詞：新型抗生物黏附功能化水凝膠治療糖尿病潰瘍的應(yīng)用基礎(chǔ)研究

  更多相關(guān)文章： 糖尿病足潰瘍 水凝膠 抗黏附 傷口敷料 堿性成纖維細(xì)胞因子

【摘要】：作為一種終身性慢性疾病,糖尿病可導(dǎo)致一系列嚴(yán)重的神經(jīng)和血管并發(fā)癥,其人群中的高發(fā)病率不僅給發(fā)達(dá)國(guó)家?guī)?lái)沉重的醫(yī)療負(fù)擔(dān),而且隨著人們生活水平的提高和生活方式的改變,欠發(fā)達(dá)地區(qū)的糖尿病發(fā)病率亦逐年攀升。其中,因其疾病發(fā)生和進(jìn)程中受到多種因素影響,糖尿病足潰瘍已成為領(lǐng)域內(nèi)眾所周知的難愈性潰瘍,臨床預(yù)后不佳,更可導(dǎo)致壞疽而截肢,極大地降低了患者的生活質(zhì)量和主觀幸福感。本文基于糖尿病足潰瘍難以治愈這一科研和臨床領(lǐng)域共有的難題,針對(duì)傷口局部微環(huán)境中細(xì)胞外基質(zhì)和生長(zhǎng)因子兩方面因素,融合細(xì)胞外基質(zhì)類(lèi)似物——天然高分子材料葡聚糖和殼聚糖,設(shè)計(jì)并合成旨在促進(jìn)傷口愈合的新型功能化水凝膠材料。以巰基化殼聚糖與馬來(lái)酸化葡聚糖為基本原料,通過(guò)邁克爾加成反應(yīng)制備出一系列三維網(wǎng)絡(luò)狀的新型復(fù)合水凝膠。制備條件僅需在弱堿性環(huán)境下,簡(jiǎn)單溫和,無(wú)須額外添加催化劑或引發(fā)劑等有毒有害物質(zhì),有效避免了化學(xué)合成產(chǎn)物的生物毒性問(wèn)題,極大拓寬其在生物醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用。通過(guò)調(diào)節(jié)巰基和馬來(lái)酸雙鍵的摩爾比和材料濃度得到不同濃度的五種比例水凝膠,對(duì)其進(jìn)行冷場(chǎng)發(fā)射掃描電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),所有水凝膠切面微觀形態(tài)學(xué)均呈典型的三維孔洞結(jié)構(gòu),這種多微孔結(jié)構(gòu)使不同水凝膠的溶脹性能均高達(dá)900%以上,并可在30 min內(nèi)迅速達(dá)到平衡,為其應(yīng)用于細(xì)胞增殖和藥物載體材料奠定了良好基礎(chǔ)。MTT分析結(jié)果可見(jiàn),濃度低于4 mg/mL的水凝膠與NIH 3T3細(xì)胞共培養(yǎng)24 h和48 h后的細(xì)胞相對(duì)增值率均在80%以上,說(shuō)明水凝膠的細(xì)胞毒性低,擁有優(yōu)良的生物相容性,也驗(yàn)證了上述制備條件簡(jiǎn)單所帶來(lái)的益處。物理性質(zhì)方面的流變學(xué)性能測(cè)試結(jié)果顯示,隨著角頻率由0.1 rad/s增加至100 rad/s,不同比例水凝膠的損耗模量G"均小于儲(chǔ)存模量G',說(shuō)明水凝膠形態(tài)在以上角頻率范圍內(nèi)均可保持完好,不受破壞,可在正常移動(dòng)和搬運(yùn)過(guò)程中保持物理性質(zhì)穩(wěn)定。為進(jìn)一步克服傳統(tǒng)敷料易粘連傷口,更換敷料時(shí)易破壞新生上皮組織引起再次出血加重病情的問(wèn)題,本文再次優(yōu)化材料比例,制備出正負(fù)電荷相等的抗生物黏附的功能化水凝膠。以激光共聚焦掃描顯微鏡和冷場(chǎng)發(fā)射掃描電子顯微鏡分別評(píng)估凝膠表面細(xì)菌和細(xì)胞的黏附情況,分別在400和2000倍鏡下發(fā)現(xiàn),與普通比例水凝膠相比,抗黏附水凝膠表面和內(nèi)部對(duì)細(xì)菌和細(xì)胞的黏附顯著減少,證實(shí)不黏附細(xì)菌的抗黏附新性能和不黏附細(xì)胞的不粘連傷口皮膚新性能。依據(jù)潰瘍微環(huán)境中生長(zhǎng)因子缺乏的特征,進(jìn)行負(fù)載堿性成纖維細(xì)胞因子的抗生物黏附水凝膠材料促進(jìn)糖尿病難愈性潰瘍愈合的體內(nèi)研究,以鏈脲佐菌素成功造模后的糖尿病SD大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,于背部消毒備皮后造成直徑為1.2 cm的全層皮膚缺損傷口。實(shí)驗(yàn)共分為四組,分別為單純抗生物黏附水凝膠組、抗生物黏附水凝膠+堿性成纖維細(xì)胞因子組、單純堿性成纖維細(xì)胞因子組和生理鹽水對(duì)照組。利用T檢驗(yàn)對(duì)組間創(chuàng)面愈合情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,并進(jìn)一步比較傷口新生肉芽組織的組織形態(tài)學(xué)結(jié)果和增殖細(xì)胞核抗原與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的免疫組織化學(xué)結(jié)果,發(fā)現(xiàn)與其他三組相較,水凝膠+堿性成纖維細(xì)胞因子組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物第5天傷口即開(kāi)始明顯縮小,并率先于第13天完全愈合。因此,負(fù)載堿性成纖維細(xì)胞因子的抗生物黏附的功能化水凝膠可通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)因子、形成傷口抗感染保護(hù)層并提供細(xì)胞生長(zhǎng)所需的優(yōu)良濕潤(rùn)環(huán)境進(jìn)而加快傷口修復(fù),為治療糖尿病難愈性潰瘍提供一條新思路,有望在不久的將來(lái)作為傷口敷料應(yīng)用于臨床。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病足潰瘍 水凝膠 抗黏附 傷口敷料 堿性成纖維細(xì)胞因子
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R587.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明10-11
• 前言11-14
• 研究現(xiàn)狀、成果11-13
• 研究目的、方法13-14
• 1 對(duì)象和方法14-21
• 1.1 主要材料與試劑14
• 1.2 主要儀器與設(shè)備14-15
• 1.3 巰基化殼聚糖的制備與巰基含量測(cè)定15
• 1.4 馬來(lái)酸化葡聚糖的制備與馬來(lái)酸取代度測(cè)定15-16
• 1.5 巰基化殼聚糖/馬來(lái)酸化葡聚糖復(fù)合水凝膠的制備16
• 1.6 水凝膠的核磁和紅外表征16
• 1.7 水凝膠的形態(tài)學(xué)表征16
• 1.8 水凝膠溶脹性能測(cè)試16
• 1.9 水凝膠流變學(xué)性能檢測(cè)16-17
• 1.10 水凝膠的生物相容性評(píng)價(jià)17
• 1.10.1 細(xì)胞培養(yǎng)17
• 1.10.2 凝膠浸出液的制備17
• 1.10.3 MTT法17
• 1.11 抗生物黏附水凝膠的制備17-18
• 1.12 抗生物黏附水凝膠對(duì)細(xì)菌的黏附能力測(cè)定18
• 1.13 抗生物黏附水凝膠對(duì)細(xì)胞的黏附能力測(cè)定18
• 1.14 負(fù)載bFGF的CSDM水凝膠促進(jìn)傷口愈合的體內(nèi)研究18-20
• 1.14.1 bFGF稀釋液的制備19
• 1.14.2 負(fù)載bFGF的CSDM水凝膠的制備19
• 1.14.3 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)19-20
• 1.14.4 開(kāi)放傷口愈合情況記錄20
• 1.14.5 組織樣本采集20
• 1.15 組織形態(tài)學(xué)測(cè)試20
• 1.16 免疫組織化學(xué)測(cè)試20-21
• 2 結(jié)果21-35
• 2.1 巰基化殼聚糖的成功制備與巰基含量21
• 2.2 馬來(lái)酸化葡聚糖的成功制備與馬來(lái)酸取代度21-22
• 2.3 水凝膠的成功制備22-23
• 2.4 水凝膠形態(tài)學(xué)23-25
• 2.5 水凝膠溶脹性能25
• 2.6 水凝膠流變性能25-26
• 2.7 水凝膠的生物相容性26-28
• 2.8 抗生物黏附水凝膠的制備28
• 2.9 抗生物黏附水凝膠對(duì)細(xì)菌的黏附能力28-30
• 2.10 抗生物黏附水凝對(duì)細(xì)胞的黏附能力30-31
• 2.11 負(fù)載bFGF的CSDM水凝膠促進(jìn)傷口愈合的體內(nèi)研究31-32
• 2.12 H&E染色結(jié)果32-33
• 2.13 免疫組織化學(xué)結(jié)果33-35
• 3 討論35-37
• 3.1 CSDM水凝膠的基本性能35
• 3.2 不同比例水凝膠的流變學(xué)性能35
• 3.3 細(xì)菌和細(xì)胞對(duì)抗生物黏附水凝膠的黏附35-36
• 3.4 負(fù)載bFGF的CSDM水凝膠促愈合作用36-37
• 結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-45
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明45-46
• 綜述 糖尿病足潰瘍的傷口敷料研究現(xiàn)狀46-64
• 綜述參考文獻(xiàn)56-64
• 致謝64-66
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷66

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1 劉風(fēng)華,姜在e，

本文編號(hào)：766870