本文關(guān)鍵詞：高脂血癥大鼠種植體早期骨結(jié)合界面的微觀分析及分子機(jī)制探究

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【摘要】：目的研究高脂血癥大鼠種植體早期骨結(jié)合界面的微觀形態(tài)和微觀成分,并探究其與Dishevelled-2 (DVL2)相關(guān)的可能的分子機(jī)制。方法(1).Wistar大鼠60只,均為雄性,依照隨機(jī)原則,分為實驗組和對照組分別以高脂飼料和普通飼料喂養(yǎng)。(2).12周后,檢測實驗組大鼠血脂水平,去除實驗組中不符合高脂血癥標(biāo)準(zhǔn)的大鼠以及對照組中血脂異常的大鼠。在全麻下分別將一枚種植體植入,兩組大鼠左右兩側(cè)股骨干骺端。在種植體植入后的1天、3天和5天分別處死一批大鼠,取出含有種植體的骨組織(圖1),分別進(jìn)行不同的檢測。(3).種植體植入后1天和5天的標(biāo)本固定包埋后制作硬組織切片,分別進(jìn)行光學(xué)顯微鏡和和掃描電鏡(scanning electronic microscopy, SEM)觀測,分析種植體早期骨結(jié)合界面的微觀形態(tài)的動態(tài)變化。光學(xué)顯微鏡觀測種植體周圍的成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞和骨小梁；SEM進(jìn)一步在高倍鏡下,觀測種植體周圍的成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞和骨質(zhì)狀況。(4).種植體植入后1天和5天的標(biāo)本固定包埋后制作硬組織切片,在種植體中部1/3,沿種植體向組織方向,以10 um為間隔依次選“1-6”六個微區(qū)(圖2),通過X射線能譜儀(energy dispersive X-ray spectrometer, EDS)分析種植體早期骨結(jié)合界面的微觀成分的動態(tài)變化,進(jìn)行鈣、磷、氧和鈦元素定量測定；計算Ca/P原子個數(shù)百分比。(5).1天、3天和5天的標(biāo)本,一部分液氮凍存通過熒光定量PCR (relative fluorescence quantitative polymerase chain-reaction, RT-PCR)檢測種植體周圍1mm骨組織中DVL2基因的表達(dá)情況；另外一部分,迅速提取蛋白,通過Western Bolt檢測種植體周圍1mm骨組織中DVL2蛋白和磷酸化的DVL2蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果(1).光學(xué)顯微鏡分析發(fā)現(xiàn),種植體植入后的1-5 d,種植體周圍的成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞逐漸增多。實驗組骨質(zhì)疏松,骨小梁稀疏、排列紊亂；對照組骨質(zhì)致密。實驗組種植體周圍的成骨細(xì)胞少于對照組(P0.05),破骨細(xì)胞多于對照組(P0.05)。(2).SEM觀測到的結(jié)果與光學(xué)顯微鏡相似,在種植體植入后的1-5 d,種植體周圍的成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞逐漸增多。實驗組骨質(zhì)疏松,對照組骨質(zhì)致密。實驗組種植體周圍的成骨細(xì)胞少于對照組,破骨細(xì)胞多于對照組。(3).實驗組Ca/P原子個數(shù)百分比低于對照組(P0.05),O元素的原子百分比高于對照組(P0.05)；由種植體至骨組織Ti元素的原子百分比逐漸減少,實驗組和對照組各取樣微區(qū)內(nèi)的Ti元素原子百分比無明顯差異。實驗組和對照組的“5、6”取樣微區(qū)的Ca/P原子個數(shù)百分比,均隨時間的增加而減少,并且“5”取樣微區(qū)的Ca/P原子個數(shù)百分比略小于“6”取樣微區(qū)的Ca/P原子個數(shù)百分比；“4”取樣微區(qū)的Ca/P原子個數(shù)百分比,隨種植體植入時間的增加而略增加。“1、2、3”取樣微區(qū)均未檢測到Ca、P元素。實驗組和對照組的“5、6”取樣微區(qū)的O元素原子百分比,隨種植體植入時間的增加而略增加,并且“5”取樣微區(qū)的O元素原子百分比大于“6”取樣微區(qū)的O元素原子百分比；“4”取樣微區(qū)的O元素原子百分比,隨種植體植入時間的增加而略微減少。“1、2、3”取樣微區(qū)均未檢測到O元素。實驗組和對照組的“6”取樣微區(qū)未檢測到Ti元素,“1、2、3、4、5”取樣微區(qū)的Ti元素原子百分比逐漸減少,“4、5”取樣微區(qū)的Ti元素原子百分比,表現(xiàn)出隨種植體植入時間的增加而稍減少的趨勢；“1、2、3”取樣微區(qū)的Ti元素原子百分比,隨種植體植入時間的增加而略增加。(4).實驗組的DVL2基因的表達(dá)水平不及對照組(P0.05)。實驗組DVL2的mRNA的表達(dá)水平在1-3天呈現(xiàn)下降趨勢,在3-5天內(nèi)呈現(xiàn)出上升趨勢(p0.05)；對照組DVL2的mRNA的表達(dá)水平在1-3天以內(nèi)略微上升,在3-5天內(nèi)略微下降。(5).DVL2蛋白的表達(dá)水平與DVL2的mRNA的表達(dá)水平相似。實驗組的DVL2蛋白的表達(dá)水平低于對照組(P0.05)。實驗組DVL2蛋白的表達(dá)水平在1-3天呈現(xiàn)下降趨勢,在3-5天內(nèi)呈現(xiàn)出上升趨勢(p0.05)；對照組DVL2蛋白的表達(dá)水平在1-3天以內(nèi)呈現(xiàn)上升趨勢,在3-5天內(nèi)略微下降。(6).實驗組的磷酸化的DVL2蛋白的表達(dá)水平低于對照組(P0.05)。實驗組磷酸化的DVL2蛋白的表達(dá)水平在1-3天呈現(xiàn)下降趨勢,在3-5天內(nèi)呈現(xiàn)出上升趨勢(p0.05)；對照組磷酸化的DVL2蛋白的表達(dá)水平在1-3天以內(nèi)也呈現(xiàn)下降趨勢,之后基本維持在恒定的水平。結(jié)論高脂血癥通過抑制DVL2基因、DVL2蛋白和磷酸化的DVL2蛋白的表達(dá),在一定程度上干擾種植體的早期骨結(jié)合。此研究為提高高脂血癥患者種植的成功率提供了理論支持。
【關(guān)鍵詞】：種植體 骨結(jié)合 掃描電鏡 X射線能譜儀 DVL 大鼠
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R783.6;R589.2
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-11
• 英文縮略詞11-12
• 前言12-15
• 實驗材料15-18
• 實驗方法18-28
• 結(jié)果28-35
• 討論35-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-43
• 致謝43-44
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表文章44-45
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表45

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本文編號：757085