本文關(guān)鍵詞：AMPK調(diào)控鈣內(nèi)流對高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響及其機制研究

  更多相關(guān)文章： AMP活化蛋白激酶類 鈣離子載體 鈣庫依賴性鈣通道 高糖 內(nèi)皮細(xì)胞

【摘要】：研究背景:隨著我國社會人口老齡化的加劇,老年人的健康問題越來越受到關(guān)注。老年患者作為糖尿病的主體人群,糖尿病的心腦血管并發(fā)癥的發(fā)生是臨床上致死和致殘的重要原因,而動脈粥樣硬化是糖尿病最常見的心腦血管并發(fā)癥。但其病因尚未完全闡明。內(nèi)皮細(xì)胞的過度凋亡是內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙的重要表現(xiàn)形式,同時也是動脈粥樣硬化形成的始動因素。有研究表明長期高糖刺激,血管內(nèi)皮細(xì)胞的主要特征是在轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)下,產(chǎn)生一系列相關(guān)因子,導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙,引起糖尿病血管并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展。高糖在內(nèi)皮細(xì)胞凋亡中起著重要作用,高糖誘導(dǎo)氧化應(yīng)激,通過一系列復(fù)雜信號通路直接或間接引起血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。高糖引起內(nèi)皮凋亡的機制很多,如氧化應(yīng)激、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、鈣離子內(nèi)流。其中Ca2+濃度升高是其重要機制。鈣庫依賴性鈣通道(SOCC)在細(xì)胞凋亡增殖起著重要作用。但高糖對其具體調(diào)節(jié)機制尚需進一步研究。AMPK是由α、β、γ三個亞基組成的異源三聚體,α亞基行使催化功能、β和γ亞基行使調(diào)節(jié)功能。α亞基有α1和α2兩個亞型,在內(nèi)皮細(xì)胞中AMPKα1和α2均有表達(dá),但以表達(dá)以α1亞單位為主。最近的證據(jù)表明AMPK在延緩動脈粥樣硬化的形成和保護血管功能等過程中充當(dāng)重要的角色,但其具體機制尚需進一步研究。研究目的:本研究以離體培養(yǎng)胰腺血管內(nèi)皮細(xì)胞(MS1)和構(gòu)建糖尿病動脈粥樣硬化小鼠模型為研究對象,采用激光共聚焦檢測鈣內(nèi)流、TUNEL檢測內(nèi)皮細(xì)胞凋亡等方法,力圖證實:1)、AMPK抑制高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡;2)、高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡與鈣離子內(nèi)流相關(guān);3)、AMPK抑制高糖誘導(dǎo)的ROS生成;4)、AMPK抑制高糖介導(dǎo)的SOCC蛋白表達(dá)以及鈣離子內(nèi)流;5)、AMPK抑制動脈粥樣斑塊形成。研究方法:1、采用離體培養(yǎng)MS1內(nèi)皮細(xì)胞株,應(yīng)用TUNEL法檢測內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。細(xì)胞分6組為:高糖組(30m M高糖刺激48h)、AMPK激動劑組(1m MAICAR預(yù)處理2h)、高糖+AICAR組(30m M高糖處理48h+1m MAICAR預(yù)處理2h)、SOC通道抑制劑組(100u M2-APB預(yù)處理2h)和高糖+SOC通道抑制劑組(30m M高糖處理48h+100u M 2-APB預(yù)處理2h),另外設(shè)立對照組(未用任何處理因素)。2、采用激光共聚焦檢測鈣離子內(nèi)流情況,將共聚焦培養(yǎng)皿中培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞置于Hank液中,應(yīng)用特異性的熒光染料Fluo-3AM檢測內(nèi)鈣離子濃度。細(xì)胞分組為對照組、高糖組、AICAR組、高糖+AICAR組、SOC通道抑制劑(2-APB)和高糖+SOC通道抑制劑組。3、采用DHE探針觀察細(xì)胞內(nèi)ROS形成,將內(nèi)皮細(xì)胞接種于六孔板中,細(xì)胞孵育DHE探針后于熒光顯微鏡下觀察ROS生成。細(xì)胞分組為對照組、高糖組、AICAR組、高糖+AICAR組。4、采用Western Blotting技術(shù)檢測SOCC蛋白。內(nèi)皮細(xì)胞以105密度接種于六孔板中,每組三個副孔,細(xì)胞分組為對照組、高糖組、AICAR組、高糖+AICAR組,以1m M AICAR預(yù)處理2h,再給予高糖刺激48h。用PBS清洗細(xì)胞兩次后,收集各組細(xì)胞,應(yīng)用WB技術(shù)檢測AMPK對SOC相關(guān)Stim1、Orai1蛋白表達(dá)的影響。5、采用油紅O、HE染色觀察主動脈斑塊形成。實驗分組為普通飼料組、高脂組、STZ組、STZ組+對照病毒組、STZ組+AMPKα1過表達(dá)組,取小鼠胸主動脈,縱向切開后,采用油紅O染色觀察主動脈血管內(nèi)斑塊形成,其余血管制成石蠟切片后,利用HE染色觀察AMPK對動脈粥樣硬化形成的影響。研究結(jié)果:1.高糖處理血管內(nèi)皮細(xì)胞后凋亡明顯增多(P0.05),而與高糖刺激組相比,預(yù)處理AMPK激動劑能顯著抑制高糖刺激的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡(P0.05)2.高糖刺激內(nèi)皮細(xì)胞后鈣離子內(nèi)流明顯增加,而給予2-APB預(yù)處理后,高糖介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡和鈣內(nèi)流明顯能被SOC通道抑制劑抑制(P0.05)3.高糖刺激內(nèi)皮細(xì)胞后,細(xì)胞內(nèi)ROS生成增多,而給予AICAR預(yù)處理后,高糖誘導(dǎo)的ROS生成明顯能被AMPK激動劑AICAR抑制(P0.05)4.高糖刺激內(nèi)皮細(xì)胞后,Stim1、Orai1蛋白表達(dá)增加,而與高糖組相比,高糖+AICAR組能夠明顯抑制Stim1、Orai1表達(dá)和鈣內(nèi)流(P0.05)5.與高脂飼料組相比,小鼠給予STZ誘導(dǎo)糖尿病后,主動脈粥樣斑塊形成明顯,而給予AMPKα1過表達(dá)慢病毒注射后,主動脈斑塊形成明顯減少(P0.05)結(jié)論:1.高糖誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡,而AMPK能顯著抑制高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮凋亡。2.高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮凋亡與鈣內(nèi)流相關(guān),SOC通道介導(dǎo)高糖誘導(dǎo)的鈣內(nèi)流。3.高糖誘導(dǎo)ROS生成,而AMPK能顯著抑制高糖誘導(dǎo)的ROS產(chǎn)生。4.AMPK能夠顯著抑制高糖誘導(dǎo)的Stim1、Orai1蛋白表達(dá)增加,并通過SOC蛋白抑制高糖介導(dǎo)的鈣內(nèi)流。5.AMPK抑制糖尿病致動脈粥樣硬化斑塊形成
【關(guān)鍵詞】：AMP活化蛋白激酶類 鈣離子載體 鈣庫依賴性鈣通道 高糖 內(nèi)皮細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R587.2
【目錄】：

• 英文縮寫一覽表5-6
• 英文摘要6-10
• 中文摘要10-13
• 第一章 前言13-14
• 第二章 AMPK對高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮凋亡的影響14-20
• 2.1 材料與方法14-16
• 2.2 統(tǒng)計學(xué)處理16
• 2.3 結(jié)果16-18
• 2.4 討論18-20
• 第三章 高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮凋亡的機制研究20-27
• 3.1 材料與方法20-23
• 3.2 統(tǒng)計學(xué)處理23
• 3.3 結(jié)果23-25
• 3.4 討論25-27
• 第四章 AMPK對高糖介導(dǎo)ROS生成的影響27-30
• 4.1 材料與方法27-28
• 4.2 統(tǒng)計學(xué)處理28
• 4.3 結(jié)果28-29
• 4.4 討論29-30
• 第五章 AMPK對高糖介導(dǎo)鈣內(nèi)流的機制研究30-40
• 5.1 材料與方法30-34
• 5.2 統(tǒng)計學(xué)處理34
• 5.3 結(jié)果34-38
• 5.4 討論38-40
• 第六章 AMPK對動脈粥樣硬化形成的影響40-47
• 6.1 材料與方法40-42
• 6.2 統(tǒng)計學(xué)處理42-43
• 6.3 結(jié)果43-46
• 6.4 討論46-47
• 全文結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-50
• 文獻(xiàn)綜述 AMPK在糖尿病及其動脈粥樣硬化機制研究50-60
• 參考文獻(xiàn)56-60
• 碩士在讀期間發(fā)表的文章60-61
• 致謝61

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李娟娟;凌文華;;AMPK與肥胖[J];國際內(nèi)科學(xué)雜志;2007年11期

2 劉文倩;艾華;;AMPK與肥胖和減肥關(guān)系研究進展[J];中國運動醫(yī)學(xué)雜志;2008年06期

3 蔡明春,黃慶愿,高鈺琪;AMPK與能量代謝[J];重慶醫(yī)學(xué);2005年01期

4 葛斌;謝梅林;顧振綸;周文軒;郭次儀;;AMPK作為治療2型糖尿病新靶點的研究進展[J];中國藥理學(xué)通報;2008年05期

5 徐靜;劉毅;完強;賈振華;王榮;;高糖環(huán)境對大鼠腎小球系膜細(xì)胞AMPK表達(dá)及活性的影響[J];山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2009年05期

6 宮克城;丁樹哲;;AMPK與2型糖尿病的關(guān)系及其在運動介導(dǎo)下的研究[J];遼寧體育科技;2009年03期

7 羅招凡;李芳萍;丁鶴林;程樺;;AMPKα2基因克隆及其野生型和突變型真核表達(dá)載體的構(gòu)建[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2009年28期

8 丁曉潔;王佑民;王麗萍;;高脂飲食對大鼠肝臟組織AMPK表達(dá)及其活性的影響[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2009年06期

9 程媛;王佑民;丁曉潔;;肥胖大鼠骨骼肌AMPK表達(dá)及其與糖脂代謝的關(guān)系[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2010年02期

10 黃德強;羅凌玉;王麗麗;羅時文;呂農(nóng)華;羅志軍;;AMPK在胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的作用[J];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報;2011年11期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;Co-commitment and Interplay between Akt and AMPK in the Regulation of Endothelial NO Synthase Phosphorylation by Reactive Oxygen Species[A];第九屆全國心血管藥理學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

2 Paul M Vanhoutte;;SIRT1 and AMPK:the Seesaw Effect in Regulating Endothelial Sene-scence[A];第八屆海峽兩岸心血管科學(xué)研討會論文集[C];2011年

3 李瑾;朱海波;;新結(jié)構(gòu)類型調(diào)血脂化合物與靶蛋白AMPK分子間相互作用初步解析[A];全國第十二屆生化與分子藥理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

4 宋海燕;李強;孫玉倩;張巾超;鄔艷慧;;AMPK結(jié)合蛋白的篩選及其與2型糖尿病的關(guān)系研究[A];2008內(nèi)分泌代謝性疾病系列研討會暨中青年英文論壇論文匯編[C];2008年

5 ;AMPK mediated an apoptotic response to combined effect of hypoxia stress and ER stress[A];2012全國發(fā)育生物學(xué)大會摘要集[C];2012年

6 ZHANG Jian-wei;MA Xiao-wei;DENG Rui-fen;DING Shan;GU Nan;GUO Xiao-hui;;Genetic variability in AMPKαl gene may have synergetic effect with smoking on risk of coronary artery disease in chinese type 2 diabetics[A];中華醫(yī)學(xué)會糖尿病學(xué)分會第十六次全國學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

7 姚遠(yuǎn);周京軍;裴建明;;AMPK介導(dǎo)無鈣預(yù)處理心肌保護作用[A];中國生理學(xué)會第九屆全國青年生理學(xué)工作者學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2011年

8 季樂樂;Haifeng Zhang;Feng Gao;;A novel mechanism of preconditioning:Attenuating reperfusion injury through enhanced myocardial glucose uptake via insulin-stimulated Akt and AMPK activation[A];中國生理學(xué)會第十屆全國青年生理學(xué)工作者學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2013年

9 WU Qiao;;The orphan nuclear receptor Nur77 regulates AMPK activity through LKB1 subcellular localization in glucose metabolism[A];細(xì)胞—生命的基礎(chǔ)——中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會2013年全國學(xué)術(shù)大會·武漢論文摘要集[C];2013年

10 Jia-Wei Wu;;Conserved elements in allosteric regulation of AMPK[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會第十一次會員代表大會暨2014年全國學(xué)術(shù)會議論文集——專題報告二[C];2014年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 黃敏;精力充沛基因決定?[N];新華每日電訊;2011年

2 實習(xí)生 程鳳;不愛鍛煉可能與基因缺失有關(guān)[N];科技日報;2011年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳雷;AMP激活的蛋白質(zhì)激酶（AMPK）調(diào)控機制的研究[D];清華大學(xué);2010年

2 張秀娟;TSH調(diào)節(jié)肝臟HMG-CoA還原酶磷酸化修飾的研究[D];山東大學(xué);2014年

3 趙順玉;消積飲聯(lián)合CIK通過AMPKα/Sp1/EZH2/DNMT1相關(guān)通路抗肺癌生長的作用機制[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2015年

4 王紅亮;AMPK-α在鹵蟲胚胎發(fā)育過程中對細(xì)胞有絲分裂調(diào)控的研究[D];浙江大學(xué);2015年

5 周錫紅;三甲基甘氨酸通過AMPK途徑影響脂肪沉積的研究[D];浙江大學(xué);2015年

6 劉效磊;AMPK/mTOR介導(dǎo)有氧運動提高骨骼肌胰島素敏感性的機制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

7 劉書東;AICAR誘導(dǎo)激活的AMPK在肝臟抑制TSH/SREBP-2/HMGCR通路[D];山東大學(xué);2015年

8 李知行;電針對胰島素抵抗模型大鼠肝臟AMPK、ACC的干預(yù)機制研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2016年

9 尉娜;AMPK通過mTOR促進腦缺氧條件下血管內(nèi)皮細(xì)胞作用的研究[D];鄭州大學(xué);2016年

10 呂瓊;AMPK在炎癥誘導(dǎo)的肝臟脂質(zhì)沉積中的作用[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 柯志強;AMPK信號通路在白藜蘆醇改善高糖誘導(dǎo)乳鼠心肌細(xì)胞損傷中的作用[D];湖北科技學(xué)院;2015年

2 肖瑤;AMPK對低氧誘導(dǎo)血管生成作用的研究[D];湖北科技學(xué)院;2015年

3 王玉兵;HIF-1α、AMPK、E-cadherin在前列腺癌組織中的表達(dá)及意義[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

4 魏蘇玉;乙醇對H4-ⅡE細(xì)胞脂質(zhì)代謝及AMPK表達(dá)的影響[D];延邊大學(xué);2015年

5 陳婷;肌肉特異敲除AMPKα2對小鼠脂代謝的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

6 張二東;銅離子及模擬太空環(huán)境通過ROS/AMPK信號誘導(dǎo)人B淋巴母細(xì)胞凋亡[D];蘭州大學(xué);2015年

7 徐英秀;硫化氫通過AMPK激活調(diào)控腦缺血后小膠質(zhì)細(xì)胞的極化狀態(tài)[D];蘇州大學(xué);2015年

8 黃艷;AMPK和SIRT-1參與定時高脂飲食對小鼠肝臟生物鐘基因的影響研究[D];蘇州大學(xué);2015年

9 楊霞;AMPK參與線粒體通路介導(dǎo)的氟致H9c2心肌細(xì)胞凋亡機制的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

10 閆旭紅;胰島素對1型糖尿病大鼠睪丸脂聯(lián)素及其受體、AMPK、AKT和eNOS表達(dá)的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號：733821