發(fā)布時間：2017-08-23 14:17

  本文關鍵詞：1型1-磷酸鞘氨醇受體的siRNA對人涎腺導管上皮細胞的作用

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【摘要】：目的:構建靶向1型1-磷酸鞘氨醇受體(sphingosine 1-phosphate receptor-1,S1P1)基因的小干擾RNA(small interfering RNA,siRNA)慢病毒表達載體,感染干燥綜合征細胞模型——人涎腺導管上皮細胞(human salivary gland cells,HSG),探討S1P1的siRNA治療干燥綜合征的可能性,為臨床靶標治療提供廣闊的思路。方法:實驗分空白組、空載體組、scramble-siRNA組及S1P1-siRNA組,分別將p LL3.7空載體、構建成功的scramble-siRNA及S1P1-siRNA慢病毒表達載體與p MD2.G、p MDL g/p RRE、pRSV-REV共轉染293T細胞制備病毒,感染HSG細胞株48 h,流式細胞術檢測其感染效率,實時熒光定量RT-PCR法檢測HSG細胞中S1P1 mRNA的表達水平,細胞免疫組織化學法檢測細胞中S1P1蛋白的表達水平,ELISA法檢測細胞上清中γ-干擾素(interferon-γ,IFN-γ)和白細胞介素(interleukin,IL)-17的表達水平。結果:(1)成功構建scramble-siRNA、S1P1-siRNA慢病毒表達載體,慢病毒的滴度約為3.5×108TU/m L。(2)感染48 h后S1P1-siRNA組HSG細胞中S1P1 mRNA的表達水平明顯低于空白組、空載體組和scramble-siRNA組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(3)S1P1-siRNA組HSG細胞中S1P1蛋白的表達水平低于空白組、空載體組和scramble-siRNA組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(4)S1P1-siRNA組HSG細胞分泌的IL-17的濃度明顯降低,與空白組、空載體組和scramble-siRNA組比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(5)S1P1-siRNA組細胞上清液中IFN-γ的濃度降低,與空白組、空載體組和scramble-siRNA組比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:成功構建了靶向S1P1基因的慢病毒載體,S1P1 siRNA可以使S1P1 mRNA和蛋白表達水平下降,細胞上清液中IL-17和IFN-γ的濃度下降,證明S1P1 siRNA可轉染HSG細胞且特異、高效地抑制S1P1基因的表達,抑制細胞上清液中細胞因子的表達,為治療干燥綜合征奠定了實驗基礎。
【作者單位】： 包頭醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院風濕免疫科;內蒙古自治區(qū)自體免疫學重點實驗室;
【關鍵詞】： 受體 鞘磷脂 RNA 小分子干擾 涎腺 腺泡細胞 遺傳載體
【基金】：內蒙古自治區(qū)科技計劃項目(20120403) 國家自然科學基金(81360463)資助~~
【分類號】：R593.2
【正文快照】： 內蒙古自治區(qū)包頭014010)sion of S1P1 protein was lower in S1P1-siRNA group than those in blank group,empty vector group,andscramble-siRNA group 48 h after transfection,there were significant differences between them(P0.05).(4)The levels of IL-17 were low

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1 陳海英,栗占國;干燥綜合征動物模型的研究與應用現狀[J];中華風濕病學雜志;2004年08期

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1 李茜;口干舌燥多因所致[N];保健時報;2005年

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本文編號：725501