發(fā)布時(shí)間：2017-08-23 14:17

  本文關(guān)鍵詞：1型1-磷酸鞘氨醇受體的siRNA對(duì)人涎腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞的作用

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【摘要】：目的:構(gòu)建靶向1型1-磷酸鞘氨醇受體(sphingosine 1-phosphate receptor-1,S1P1)基因的小干擾RNA(small interfering RNA,siRNA)慢病毒表達(dá)載體,感染干燥綜合征細(xì)胞模型——人涎腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞(human salivary gland cells,HSG),探討S1P1的siRNA治療干燥綜合征的可能性,為臨床靶標(biāo)治療提供廣闊的思路。方法:實(shí)驗(yàn)分空白組、空載體組、scramble-siRNA組及S1P1-siRNA組,分別將p LL3.7空載體、構(gòu)建成功的scramble-siRNA及S1P1-siRNA慢病毒表達(dá)載體與p MD2.G、p MDL g/p RRE、pRSV-REV共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞制備病毒,感染HSG細(xì)胞株48 h,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其感染效率,實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法檢測(cè)HSG細(xì)胞中S1P1 mRNA的表達(dá)水平,細(xì)胞免疫組織化學(xué)法檢測(cè)細(xì)胞中S1P1蛋白的表達(dá)水平,ELISA法檢測(cè)細(xì)胞上清中γ-干擾素(interferon-γ,IFN-γ)和白細(xì)胞介素(interleukin,IL)-17的表達(dá)水平。結(jié)果:(1)成功構(gòu)建scramble-siRNA、S1P1-siRNA慢病毒表達(dá)載體,慢病毒的滴度約為3.5×108TU/m L。(2)感染48 h后S1P1-siRNA組HSG細(xì)胞中S1P1 mRNA的表達(dá)水平明顯低于空白組、空載體組和scramble-siRNA組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(3)S1P1-siRNA組HSG細(xì)胞中S1P1蛋白的表達(dá)水平低于空白組、空載體組和scramble-siRNA組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(4)S1P1-siRNA組HSG細(xì)胞分泌的IL-17的濃度明顯降低,與空白組、空載體組和scramble-siRNA組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(5)S1P1-siRNA組細(xì)胞上清液中IFN-γ的濃度降低,與空白組、空載體組和scramble-siRNA組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:成功構(gòu)建了靶向S1P1基因的慢病毒載體,S1P1 siRNA可以使S1P1 mRNA和蛋白表達(dá)水平下降,細(xì)胞上清液中IL-17和IFN-γ的濃度下降,證明S1P1 siRNA可轉(zhuǎn)染HSG細(xì)胞且特異、高效地抑制S1P1基因的表達(dá),抑制細(xì)胞上清液中細(xì)胞因子的表達(dá),為治療干燥綜合征奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科;內(nèi)蒙古自治區(qū)自體免疫學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 受體 鞘磷脂 RNA 小分子干擾 涎腺 腺泡細(xì)胞 遺傳載體
【基金】：內(nèi)蒙古自治區(qū)科技計(jì)劃項(xiàng)目(20120403) 國(guó)家自然科學(xué)基金(81360463)資助~~
【分類號(hào)】：R593.2
【正文快照】： 內(nèi)蒙古自治區(qū)包頭014010)sion of S1P1 protein was lower in S1P1-siRNA group than those in blank group,empty vector group,andscramble-siRNA group 48 h after transfection,there were significant differences between them(P0.05).(4)The levels of IL-17 were low

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1 陳海英,栗占國(guó);干燥綜合征動(dòng)物模型的研究與應(yīng)用現(xiàn)狀[J];中華風(fēng)濕病學(xué)雜志;2004年08期

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 李茜;口干舌燥多因所致[N];保健時(shí)報(bào);2005年

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本文編號(hào)：725501