本文關(guān)鍵詞：Rcan2和Rps6kb1在小鼠體重調(diào)節(jié)機(jī)制中關(guān)系的研究

  更多相關(guān)文章： Rcan2基因 Rps6kb1基因 生長 體重調(diào)節(jié) 肥胖

【摘要】：最近三四十年以來,伴隨著全球整體生活水平的提高,全世界肥胖的人口也隨之增加。而超重和肥胖的人群往往都伴隨有糖尿病、脂代謝紊亂、心血管疾病等并發(fā)癥,肥胖的發(fā)生嚴(yán)重影響了人們的健康。因此,研究體重調(diào)節(jié)的機(jī)制以及肥胖發(fā)生的原因,是當(dāng)下迫切需要解決的重要難題。但是人類的體重受遺傳、性別、年齡、飲食結(jié)構(gòu)、運(yùn)動、精神壓力、健康狀況、經(jīng)濟(jì)狀況及教育水平等多因素的交叉影響,人們很難鑒別每一種因素對體重的影響。目前,研究人員利用實(shí)驗(yàn)動物特別是C57BL/6J(B6)小鼠來研究體重的調(diào)節(jié)機(jī)制,可以為研究人類的體重調(diào)節(jié)機(jī)制提供寶貴的借鑒。近年來,隨著基因打靶技術(shù)的廣泛應(yīng)用,研究人員發(fā)現(xiàn)小鼠體內(nèi)很多基因的敲除都會影響其體重,但這些基因通過何種機(jī)制影響體重,彼此之間的關(guān)系如何,以及它們影響體重的機(jī)制是否與肥胖發(fā)生有關(guān),目前尚不明確。在以往的研究中我們發(fā)現(xiàn)Rcan2基因的敲除能夠改善年齡及高脂肪食物引起的肥胖,并且Rcan2參與體重調(diào)節(jié)的這種方式與瘦素信號通路無關(guān)。RCAN2最初是在人類皮膚成纖維細(xì)胞中克隆出來的一種甲狀腺激素(T3)應(yīng)答基因,T3通過P I3K-Akt/PKB-mTOR-Rps6kb1信號通路來調(diào)控RCAN2的表達(dá)的。有趣的是,據(jù)報(bào)道Rps6kb1-/-突變小鼠也具有消瘦的表型。本研究是在B6的近交系遺傳背景下,通過比較Rcan2及 Rps6kbl兩種基因突變對小鼠生長和體重的影響,從而推測它們在影響體重過程中的關(guān)系。本論文研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),與正常B6小鼠相比,Rcan2-/-和 Rps6kb1--/-兩種突變小鼠的體重和體內(nèi)脂肪都有減少,但是,二者又存在明顯的不同。首先,Rcan2的缺失沒有改變小鼠的體長,但是減少了食物的攝入量；而Rps6kb1-/-小鼠表現(xiàn)為胚胎發(fā)育異常、較小的體型和成年后食物攝入量的減少。其次,在普通飼料喂養(yǎng)條件下,Rcan2-/-小鼠明顯比Rps6kb 1-/-小鼠重,但是兩種小鼠卻具有相同總量的生殖脂肪；而在高脂肪飼料喂養(yǎng)條件下,Rcan2-/-小鼠的體重和脂肪的增速均明顯低于Rps6kb1-/-小鼠。此外,通過正常B6小鼠和Rcan2-/-小鼠的高脂肪飼料配對喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn),我們證明B6小鼠與Rcan2-/-小鼠的體重和脂肪量的差別是由它們攝食量的不同導(dǎo)致的。最后,用Rcan2-/-Rps6kb1--雙基因敲除小鼠,進(jìn)一步證明Rcan2和 Rps6kbl兩基因的同時敲除對B6小鼠體重的影響具有疊加效應(yīng)。根據(jù)以上結(jié)果可知,Rcan2和Rps6kbl兩基因的缺失都能影響機(jī)體的生長和體重,但是它們是通過不同的機(jī)制完成的。Rps6kbl的缺失影響了小鼠的胚胎發(fā)育,導(dǎo)致小鼠體型變小,攝食量也隨之減少,進(jìn)而影響了體重,因此Rps6kbl可能是一個在發(fā)育過程中起重要作用的基因；而Rcan2基因的缺失僅僅影響了小鼠的攝食,攝食量的減少導(dǎo)致了小鼠體重的減輕,從而我們確定它是肥胖發(fā)生中的一個重要基因。因此,通過比較,我們可以確定這兩種基因在機(jī)體生長過程中的功能,進(jìn)而明確它們在肥胖發(fā)生中的作用。
【關(guān)鍵詞】：Rcan2基因 Rps6kb1基因 生長 體重調(diào)節(jié) 肥胖
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R589.2
【目錄】：

• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 符號說明12-14
• 1 前言14-28
• 1.1 肥胖流行程度的嚴(yán)重性14
• 1.2 與肥胖發(fā)生相關(guān)的假說14-19
• 1.2.1 腸道微生物與肥胖14-15
• 1.2.2 環(huán)境與肥胖的關(guān)系15-17
• 1.2.3 遺傳與肥胖的關(guān)系17-18
• 1.2.4 能量穩(wěn)態(tài)與肥胖18-19
• 1.3 能量穩(wěn)態(tài)存在的疑問19-22
• 1.3.1 瘦素抵抗19-20
• 1.3.2 能量消耗數(shù)據(jù)疑問20-21
• 1.3.3 能量消耗作用被夸大21-22
• 1.4 Rcan2基因背景22-24
• 1.4.1 RCAN2基因基本介紹22-23
• 1.4.2 RCAN2基因的功能23
• 1.4.3 RCAN2基因在體重調(diào)節(jié)中的功能23-24
• 1.5 Rps6kb1基因背景24-28
• 2 實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器28-32
• 2.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｊ絼游?/span>28
• 2.2 實(shí)驗(yàn)所用主要試劑28-30
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑28-30
• 2.3 實(shí)驗(yàn)耗材與儀器30-32
• 2.3.1 動物飼料30
• 2.3.2 實(shí)驗(yàn)耗材30
• 2.3.3 實(shí)驗(yàn)儀器30-32
• 3 實(shí)驗(yàn)方法32-40
• 3.1 實(shí)驗(yàn)小鼠基因型的鑒定32-33
• 3.1.1 小鼠基因組的提取32
• 3.1.2 PCR鑒定小鼠的基因型32
• 3.1.3 PCR鑒定Rcan2和Rps6kb1兩基因敲除小鼠的基因型32-33
• 3.2 Rcan2~(-/-)Rps6kb1~(-/-)雙基因敲除小鼠的獲得33
• 3.3 體重統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)33
• 3.4 小鼠攝食量的測量實(shí)驗(yàn)33-34
• 3.5 高脂肪食物配對喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)34
• 3.6 Western Blot檢測34-35
• 3.6.1 提取組織總蛋白34
• 3.6.2 紫外分光光度計(jì)測蛋白濃度34
• 3.6.3 Western Blot34-35
• 3.7 Real-Time PCR35-37
• 3.7.1 小鼠組織RNA的提取35-36
• 3.7.2 將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA36
• 3.7.3 熒光實(shí)時定量PCR36-37
• 3.8 動物組織石蠟切片37-38
• 3.9 石蠟切片HE染色38-39
• 3.10 脂肪細(xì)胞大小的統(tǒng)計(jì)39
• 3.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析39-40
• 4 結(jié)果與分析40-56
• 4.1 分子水平上鑒定Rcan2和Rps6kb1兩種基因之間的關(guān)系40-41
• 4.1.1 Rcan2敲除對Rps6kb1蛋白表達(dá)水平的影響40-41
• 4.2 Rcan2和Rps6kb1兩基因的敲除對小鼠胚胎發(fā)育的影響41-42
• 4.3 普通飲食條件下,Rcan2~(-/-)和Rps6kb1~(-/-)兩種突變對小鼠生長和體重的影響42-44
• 4.3.1 普通飲食條件下,正常小鼠、Rcan2~(-/-)和Rps6kb1~(-/-)三種小鼠的生長模式42-43
• 4.3.2 普通飲食條件下,正常小鼠、Rcan2~(-/-)和Rps6kb1~(-/-)三種小鼠中脛骨長度和附睪脂肪重量的統(tǒng)計(jì)43-44
• 4.4 高脂肪食物喂養(yǎng)條件下,Rcan2~(-/-)和Rps6kb1~(-/-)兩種突變對小鼠生長和體重的影響44-46
• 4.4.1 高脂肪食物喂養(yǎng)條件下,正常小鼠、Rcan2~(-/-)和Rps6kb1~(-/-)三種小鼠的生長模式44-45
• 4.4.2 高脂肪食物喂養(yǎng)條件下,正常小鼠、Rcan2~(-/-)和Rps6kb1~(-/-)三種小鼠中脛骨長度和相關(guān)組織器官重量的統(tǒng)計(jì)45-46
• 4.5 不同飲食條件下,正常小鼠、Rcan2~(-/-)和Rps6kb1~(-/-)三種小鼠中與脂質(zhì)相關(guān)組織的形態(tài)學(xué)分析46-50
• 4.5.1 正常小鼠,Rcan2~(-/-)和Rps6kb1~(-/-)三種小鼠的脂肪組織的形態(tài)學(xué)分析46-48
• 4.5.2 正常小鼠、Rcan2~(-/-)和Rps6kb1~(-/-)三種小鼠肝臟組織的形態(tài)學(xué)分析48-49
• 4.5.3 正常小鼠、Rcan2~(-/-)和Rps6kb1~(-/-)三種小鼠的褐色脂肪組織的形態(tài)學(xué)分析49-50
• 4.6 正常小鼠、Rcan2~(-/-)和Rps6kb1~(-/-)三種小鼠的攝食量的統(tǒng)計(jì)50-51
• 4.7 高脂肪飼料喂養(yǎng)條件下,正常小鼠和Rcan2~(-/-)小鼠之間的配對喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)51-53
• 4.7.1 高脂肪飼料喂養(yǎng)條件下,配對喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中小鼠的生長模式51-52
• 4.7.2 高脂肪飼料喂養(yǎng)條件下,配對喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中小鼠與脂肪代謝相關(guān)的組織器官重量的統(tǒng)計(jì)52-53
• 4.8 普通飼料喂養(yǎng)條件下,Rcan2~(-/-)Rps6kb1~(-/-)雙基因敲除小鼠的表型53-54
• 4.8.1 普通飼料喂養(yǎng)條件下,Rcan2~(-/-)Rps6kb1~(-/-)雙基因敲除小鼠體重及體長表型53-54
• 4.8.2 普通飼料喂養(yǎng)條件下,Rcan2~(-/-)Rps6kb1~(-/-)雙基因敲除小鼠與肥胖相關(guān)的組織器官的重量的統(tǒng)計(jì)54
• 4.9 普通飼料喂養(yǎng)條件下,Rcan2~(-/-)和Rps6kb1~(-/-)小鼠體內(nèi)與能量代謝相關(guān)的基因的mRNA表達(dá)水平54-56
• 5 討論56-64
• 5.1 Rcan2及Rps6kb1兩種基因的缺失對小鼠生長和體重的影響57-59
• 5.2 Rcan2基因敲除的研究59
• 5.3 Rps6kb1基因敲除的研究59-61
• 5.4 Rcan2和Rps6kb1兩基因與肥胖發(fā)生的關(guān)系61-64
• 參考文獻(xiàn)64-70
• 致謝70-71
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表71

【相似文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李士威;Rcan2和Rps6kb1在小鼠體重調(diào)節(jié)機(jī)制中關(guān)系的研究[D];山東大學(xué);2016年

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本文編號：721690