本文關鍵詞：阿魏酸促進糖尿病大鼠慢性創(chuàng)面血管化及其作用機制研究

  更多相關文章： 阿魏酸 慢性難愈性創(chuàng)面 糖尿病大鼠 人臍靜脈內皮細胞 ERK1/2信號通路

【摘要】：目的在體內試驗中,研究阿魏酸(ferulic acid,FA)對2型糖尿病大鼠慢性創(chuàng)面愈合的影響。在體外實驗中,分別在常氧和缺氧狀態(tài)下,探討不同濃度阿魏酸對人臍靜脈內皮細胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)血管生成相關功能的影響;研究阿魏酸對HUVEC細胞血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血小板衍化生長因子(platelet-derived growth factor,PDGF)及缺氧誘導因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)表達的影響;研究阿魏酸調節(jié)HUVEC細胞VEGF及PDGF基因的表達與細胞外調蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases 1/2,ERK1/2)信號通路的關系。方法我們以凡士林為基質,制作了阿魏酸軟膏。為了研究阿魏酸的軟膏制劑在水中的釋放度,分別將2%、5%及10%的阿魏酸軟膏各150mg分別置入50ml純水中,在不同時間點取樣,用比色法測量吸光度值,計算阿魏酸在水中釋放度。以高糖高脂鼠料喂養(yǎng)SD大鼠4周后,再以45mg/kg的劑量腹腔注射鏈脲佐菌素,監(jiān)測空腹血糖值,建立2型糖尿病大鼠模型。建立糖尿病大鼠慢性創(chuàng)面模型,分別設置糖尿病對照組(diabetic control group,DC)、凡士林對照組(vaseline control group,VC)、生理鹽水對照組(normal saline control group,NSC)、10%阿魏酸外用組(10%ferulic acid ointment treatment group,10%FA)和40mg/kg阿魏酸灌胃組(40mg/kg ferulic acid irrigation treatment group,40mg FA),觀察不同處理對各組創(chuàng)面愈合率及愈合時間的影響,CD34免疫組織化學染色觀察阿魏酸對慢性創(chuàng)面血管生成的影響。原代培養(yǎng)HUVEC細胞,分別在常氧和缺氧條件下實驗。以不同濃度的阿魏酸(1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5、1×10-4及1×10-3 mol/L)處理后,分別采用MTS法、劃痕法、Matrigel法分析不同濃度阿魏酸處理對HUVEC細胞的增殖、遷移和管腔樣結構形成的影響;以1×10-5mol/L阿魏酸處理HUVEC細胞后,在0h、3h、6h、24h時提取蛋白,采用western blot分析對血管生成密切相關的因子VEGF、PDGF及HIF-1α表達的影響;以ERK1/2信號通路特異性抑制劑PD98059預處理HUVEC細胞,阻斷ERK1/2信號通路后,再采用1×10-5mol/L阿魏酸處理6h,western blot分析VEGF及PDGF蛋白表達的變化。結果分析阿魏酸軟膏在水中的釋放度,12h時2%、5%及10%的阿魏酸軟膏的釋放度分別達到8.6%、11.2%和16.2%;在24h時分別達到10.4%、13.2%和21.8%。阿魏酸軟膏在水中的釋放良好,可以用于慢性創(chuàng)面的治療。SD大鼠以高糖高脂鼠料喂養(yǎng)4周后,采用小劑量鏈脲佐菌素腹腔注射,監(jiān)測血糖值,維持在16.7mmol/L以上至少4周,成功建立了2型糖尿病大鼠模型。慢性創(chuàng)面造模后,第16天,10%FA組創(chuàng)面愈合率為94.0±5.7%,高于VC組的87.2±6.4%;40mg FA組的創(chuàng)面愈合率為91.3±6.5%,亦明顯高于NSC組的82.2±6.9%。10%FA組愈合時間為20.29±1.67天,與VC組(22.86±2.23天)相比,明顯縮短了愈合時間;40mg FA組的愈合時間為20.57±1.84天,與NSC組(23.29±1.98天)相比,明顯加快了創(chuàng)面的愈合速度。處理后11天,創(chuàng)面組織取材,并采用CD34免疫組化染色,統(tǒng)計各組創(chuàng)面的微血管密度(Micro-vessel Density,MVD),阿魏酸處理組與對照組相比,陽性細胞數(shù)目明顯增多,管腔數(shù)目較多,結構也較完整,p0.05,有統(tǒng)計學差異。分別在常氧和缺氧條件下以不同濃度的阿魏酸處理HUVEC細胞。發(fā)現(xiàn)阿魏酸能不同程度的促進HUVEC細胞的增殖,在常氧狀態(tài)下以1×10-4 mol/L的阿魏酸處理效果最好,而在缺氧條件下,阿魏酸濃度為1×10-5 mol/L時,細胞增殖最活躍,與對照組相比,有統(tǒng)計學差異。在常氧和缺氧狀態(tài)下,當阿魏酸濃度為1×10-8~1×10-5mol/L時,阿魏酸可呈濃度依賴性地促進HUVEC細胞遷移和管腔樣結構的形成,以1×10-5 mol/L阿魏酸處理的作用最好,與對照組相比,有統(tǒng)計學差異。在常氧和缺氧狀態(tài)下,以1×10-5 mol/L的阿魏酸處理HUVEC細胞,Western blot檢測發(fā)現(xiàn)PDGF、VEGF及HIF-1α蛋白的表達上調,在6h時蛋白的表達達到最大值,與對照組相比,有統(tǒng)計學差異。在常氧和缺氧狀態(tài)下,用ERK1/2信號通路特異性抑制劑PD98059預處理HUVEC細胞30min后,再用1×10-5mol/L阿魏酸處理6h。Western blot檢測發(fā)現(xiàn),阻斷了ERK1/2信號通路后,抑制了阿魏酸依賴的VEGF及PDGF蛋白表達的上調,甚至還有所降低,與對照組相比,p0.05,差異有統(tǒng)計學意義。結論在水中,阿魏酸能從以凡士林為基質的軟膏中溶出;阿魏酸能加速糖尿病大鼠慢性創(chuàng)面的愈合,并能提高創(chuàng)面組織中的微血管密度;在常氧和缺氧條件下,阿魏酸能促進HUVEC細胞增殖、遷移和管腔樣結構的形成;在常氧和缺氧條件下,阿魏酸能上調VEGF、PDGF及HIF-1α蛋白的表達,并且其調節(jié)VEGF及PDGF蛋白的表達與ERK1/2信號通路有關。
【關鍵詞】：阿魏酸 慢性難愈性創(chuàng)面 糖尿病大鼠 人臍靜脈內皮細胞 ERK1/2信號通路
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R587.2
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-12
• 前言12-14
• 文獻回顧14-25
• 1 研究背景及意義14-15
• 2 慢性創(chuàng)面的血管化機制15-18
• 3 慢性創(chuàng)面的治療方法18-23
• 4 阿魏酸與慢性創(chuàng)面愈合23-25
• 實驗一 阿魏酸對糖尿病大鼠慢性創(chuàng)面愈合的影響25-42
• 1 材料25-26
• 2 方法26-32
• 3 結果32-39
• 4 討論39-42
• 實驗二 阿魏酸對HUVEC細胞血管生成的影響及其分子機制研究42-55
• 1 材料42-44
• 2 方法44-48
• 3 結果48-53
• 4 討論53-55
• 小結55-57
• 參考文獻57-65
• 個人簡歷和研究成果65-66
• 致謝66

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1 李玉梅,張翠英,徐小遲,任聯(lián),張靈芝,郭妍;多孔敷料負壓封閉治療創(chuàng)面的觀察和護理[J];實用護理雜志;2000年12期

2 肖龍明,譚江海;堿性成纖維細胞生長因子在瘢痕防治及創(chuàng)面處理中的療效觀察(附40例報告)[J];廣西醫(yī)學;2000年03期

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4 許龍順,陳紹宗,李學擁;負壓封閉治療慢性創(chuàng)面的初步報告[J];現(xiàn)代康復;2001年14期

5 陳鴻昌,趙廣賀,張宏,楊曉東;成批燒傷患者的早期創(chuàng)面處理[J];實用醫(yī)藥雜志;2002年02期

6 賴西南,王正國,朱佩芳,楊志煥;第12屆歐洲創(chuàng)面處理協(xié)會年會論文綜述[J];中華創(chuàng)傷雜志;2003年06期

7 張志學,張志哲,郭萌軍,王黎,張沛;中藥燒傷粉創(chuàng)面外用治療燒傷1000例療效觀察[J];中國中藥雜志;2004年05期

8 付小兵;進一步重視體表慢性難愈合創(chuàng)面發(fā)生機制與防治研究[J];中華創(chuàng)傷雜志;2004年08期

9 常柏;李巧芬;張庚揚;;糖尿病足的創(chuàng)面處理[J];中國中西醫(yī)結合外科雜志;2006年02期

10 賈赤宇;;燒傷早期創(chuàng)面處理[J];繼續(xù)醫(yī)學教育;2006年14期

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1 陳玉林;;創(chuàng)面處理幾個問題的商榷[A];急慢性創(chuàng)面治療新技術專題系列研討會之感染創(chuàng)面綜合治療論壇論文匯編[C];2011年

2 劉靜;王曉東;李燕歡;許巧琴;魏偉;周燕輝;;不同創(chuàng)面處理方法對壓瘡創(chuàng)面療效的對比研究[A];第七屆全國創(chuàng)傷學術會議暨2009海峽兩岸創(chuàng)傷醫(yī)學論壇論文匯編[C];2009年

3 陳欣;;震災傷員開放創(chuàng)面處理的體會[A];急、慢性創(chuàng)面治療新技術專題系列研討會之災難性成批傷早期救治與創(chuàng)面修復論壇論文匯編[C];2010年

4 薛寶升;;慢性創(chuàng)面的治療總結[A];中華醫(yī)學會第六屆全國燒傷外科學術會議論文匯編[C];2001年

5 陳鴻昌;趙廣賀;張宏;楊曉東;;成批燒傷患者的早期創(chuàng)面處理[A];全國燒傷早期處理專題研討會論文集[C];2002年

6 黃道強;史浩銳;謝家水;;燒傷及創(chuàng)面處理38例電擊傷骨外露創(chuàng)面處理體會[A];中國康復醫(yī)學會修復重建外科專業(yè)委員會第十四次全國學術交流會論文集[C];2004年

7 付小兵;;進一步重視燒傷、創(chuàng)傷創(chuàng)面處理中幾個重要環(huán)節(jié)的研究[A];第五屆全國燒傷救治專題研討會燒傷后臟器損害的臨床救治論文匯編[C];2007年

8 梁黎明;柴家科;楊紅明;賈曉明;郝岱峰;宋慧鋒;李峰;申傳安;蔡笑;白樺;;燒傷患者糖尿病足的診斷及創(chuàng)面處理[A];第六屆全國燒傷救治專題研討會論文匯編[C];2009年

9 賈赤宇;;創(chuàng)面愈合基礎研究進展[A];中華醫(yī)學會整形外科學分會第十一次全國會議、中國人民解放軍整形外科學專業(yè)委員會學術交流會、中國中西醫(yī)結合學會醫(yī)學美容專業(yè)委員會全國會議論文集[C];2011年

10 劉旭盛;黃躍生;王甲漢;楊宗城;;改進創(chuàng)面處理方法提高燒傷治愈率[A];中華醫(yī)學會第六屆全國燒傷外科學術會議論文匯編[C];2001年

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1 江蘇省金壇市中醫(yī)院 戴揚;功能性敷料——美寶創(chuàng)面速愈貼的臨床應用[N];健康報;2007年

2 湖南師范大學第一附屬醫(yī)院(湖南省人民醫(yī)院)整形激光美容科 譚軍 李高峰;激光創(chuàng)面的原位再生修復(之一)[N];健康報;2009年

3 遼寧省鐵嶺市中醫(yī)醫(yī)院 劉強;濕潤燒傷膏 在創(chuàng)面換藥技術中應注意的問題[N];健康報;2009年

4 江蘇省金壇市中醫(yī)院燒傷、皮膚科 戴揚;美寶創(chuàng)面速愈貼治療創(chuàng)瘍臨床體會[N];健康報;2007年

5 何仁亮邋劉英祥;美寶創(chuàng)面速愈貼治療皮膚潰瘍臨床體會[N];健康報;2008年

6 湖南師范大學第一附屬醫(yī)院(湖南省人民醫(yī)院)整形激光美容科 譚軍 李高峰;激光創(chuàng)面的原位再生修復(之二)[N];健康報;2009年

7 洪東;規(guī)范應用MEBT/MEBO是治療燒傷的關鍵[N];健康報;2007年

8 本報記者 李穎;慢性創(chuàng)面為何難愈合？[N];科技日報;2012年

9 肖摩;燒傷皮膚原位再生醫(yī)療技術[N];健康報;2006年

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1 羅小波;負壓創(chuàng)面療法在深層結核創(chuàng)面中的相關作用研究及應用[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2016年

2 許龍順;創(chuàng)面封閉負壓引流技術促進創(chuàng)面愈合的實驗與臨床研究[D];第四軍醫(yī)大學;2001年

3 白明;創(chuàng)面負壓治療對人慢性創(chuàng)面中血紅素氧合酶-1表達的影響及其技術應用的臨床分析和系統(tǒng)評價[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2012年

4 劉道宏;負壓創(chuàng)面療法治療感染性軟組織損傷相關機制研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2014年

5 姜玉峰;中國體表慢性難愈合創(chuàng)面流行病學研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2011年

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1 冀凌云;中藥“蚓黃散”外治糖尿病潰瘍大鼠創(chuàng)面對相關因子的影響[D];北京中醫(yī)藥大學;2016年

2 李國瑞;負壓封閉引流對兔顱骨外露創(chuàng)面愈合影響的實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學;2014年

3 石定;阿魏酸促進糖尿病大鼠慢性創(chuàng)面血管化及其作用機制研究[D];第四軍醫(yī)大學;2016年

4 劉公洪;濕性醫(yī)療技術在兔深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面愈合的實驗研究[D];瀘州醫(yī)學院;2012年

5 李靖;封閉負壓引流技術對創(chuàng)面微循環(huán)影響的實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學;2001年

6 紀賡;封閉負壓引流技術促進慢性創(chuàng)面愈合機制的研究[D];蘇州大學;2013年

7 尚念勝;水凝膠敷料在磨削痂后創(chuàng)面中的應用[D];山東大學;2015年

8 吳巍巍;外用重組人粒細胞巨噬細胞刺激因子凝膠在Ⅱ°燒（燙）傷創(chuàng)面應用的療效觀察[D];吉林大學;2010年

9 張美光;負壓封閉引流聯(lián)合含氧液沖洗治療慢性創(chuàng)面的臨床研究[D];南方醫(yī)科大學;2014年

10 張夢思;銀離子抗菌凝膠敷料治療Ⅱ度燒傷創(chuàng)面的臨床應用研究[D];昆明醫(yī)科大學;2014年

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